《villin和MUC2在结肠腺癌发生、发展中的表达及意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《villin和MUC2在结肠腺癌发生、发展中的表达及意义（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山西医科大学硕士学位论文villin和MUC2在结肠腺癌发生、发展中的表达及意义姓名：乔星申请学位级别：硕士专业：病理学指导教师：李士瑛;梁建芳20060515山西医科大学硕士学位论文v i l l i n 和M U C 2 在结肠腺癌发生、发展中的表达及意义摘要目的：研究绒毛蛋白v i l l i n 和粘蛋白M U C 2 在结肠腺癌发生发展各阶段的表达及其与结肠腺癌临床病理参数的关系，且进一步探讨两者在结肠腺瘤癌变中的作用及相关关系。方法：采用免疫组织化学P i c T u r e T M 二步法对4 0 例匹配结肠癌切缘粘膜，2 0 例结肠腺瘤组织( 轻中度不典型增生1 3 例、重度不
2、典型增生7 例) ，4 0 例结肠腺癌组织及其匹配的4 0 例癌旁粘膜的v i l l i n 和M U C 2 蛋白的表达情况进行检测。结果：( 1 ) 在结肠腺癌切缘粘膜中v i l l l n 染色阳性物质主要分布于肠吸收细胞膜纹状缘，表达均匀一致，部分细胞胞浆中呈弥漫或颗粒状着色，而杯状细胞无着色。在结肠腺瘤和腺癌中表达呈不同程度的异质性。v i l l i n 在切缘粘膜、结肠腺瘤( 伴轻中、重度不典型增生) 、结肠腺癌中阳性表达率分别为9 0 O 、7 5 ( 9 2 3 、4 2 9 ) 、5 0 0 ，呈递减趋势，各组比较差异有显著性( 尸 O 0 5 ) 、而与重度不典型增生
3、比较差异有显著性( P O ，0 5 ) ，腺瘤不同分级间比较差异具有显著性( P O 0 5 ) 、而与重度不典型增生组比较差异有显著性( P O 0 5 ) ，腺瘤不同分级间比较差异无显著性( P O 0 5 ) 。M U C 2 在切缘粘膜、癌旁粘膜、结肠腺癌中阳性表达率显著递减( P 0 0 5 ) 。( 3 ) 相关分析表明：在4 0 例结肠腺癌组织中，V i l l i n 与M U C 2 表达呈正相关( P 0 0 5 ) b u tt h ed i f f e r e n c ew e r es i g n i f i c a n tb e t w e e nr e s e
4、c t e dc o l o nm u c o s aa n ds e v e r ed y s p l a s i am u c o s ar P 0 0 5 )( 2 ) T h er e s u l t ss h o w e dt h a tM U C 2p o s i t i v e s t a i n i n gw a sf o u n di nt h ep e r i n u c l e a rc y t o p l a s mo fc e l l sw i t hag o b l e tc e l lt y p et h e c aa n dw i t ha p i c a lm
5、 u c o u sd r o p l e t s T h e r eW a sd i f f e r e n td e g r e eh e t e r o g e n e c i t yi nt h ee x p r e s s i o no fM U C 2i nc o l o nc a r c i n o m aa n dc o l o na d e n o m a F o rt h er e s e c t e dc o l o nm u c o s a ，c o l o na d e n o m aa n dc o l o na d e n o c a r c i n o m a
6、，t h ep o s i t i v er a t e so fe x p r e s s i o no fM U C 2w e r e9 5 O 、8 0 O 、5 5 0 r e s p e c t i v e l yT h ed i f f e r e n c ea m o n gt h e s eg r o u p sw e r es i g n i f i c a n t ( P O 0 5 ) b u tt h ed i f f e r e n c ew e r eI I山西医科大学硕士学位论文s i g n i f i c a n tb e t w e e nr e s e c
7、 t e dc o l o nm u c o s aa n ds e v e r ed y s p l a s i am u c o s ar P O 0 5 ) T h ed i f f e r e n c eb e t w e e ng r o u p so fa d e n o m aw e r en o ts i g n i f i c a n t ( P O 0 5 ) F o rr e s e c t e dc o l o n ，m u c o s a ，p e r i c a r c i n o m am u c o s aa n dc o l o na d e n o c a
8、r c i n o a m a ，t h e r ew e r ea l s os t a t i s t i c a lb e t w e e nt h et h r e eg r o u p s O 0 5 ) ( 3 ) E x p r e s s i o no fv i l l i nw a si d e n t i c a l l yc o r r e l a t e dw i t ht h ee x p r e s s i o no fM U C 2i n4 0c a s e so fc o l o nc a n c e rm u e o s a ( P 新载玻片酸液浸泡过夜，流水
9、冲洗，蒸馏水洗涤，置3 7 。C 温箱内烘干。 将烘干的载玻片浸入现配的1 ：5 0 A P E S 丙酮液1 分钟，入纯丙酮溶液洗除未结合的A P E S ，自然晾干。 将选好的蜡块切片，厚度为4 岬，6 0 。C 温箱烤片3 小时。2 2 兔疫组化Pie T u r e T M U - - 步法染色步骤：石蜡切片脱蜡至水化：二甲苯脱蜡3 次各1 0 分钟，梯度酒精水化各1 0 分钟。3 H i 0 2 室温孵育1 5 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，蒸馏水冲洗，P B S 浸泡5 分钟。v i I l i n 加微波高温E D T A ( L - - - 胺四乙酸) 抗原修复，9 8
10、火力2 0 ，加热2 0 m i n ；M U C 2加微波高温柠檬酸热修复，9 84 C 火力2 0 ，加热1 0 m i n ，自然冷却，P B S 冲洗，5 分钟，3 次。 1 0 正常山羊血清封闭，3 7 。C 孵育1 5 分钟，清除非特异性吸附。 倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗( 鼠抗人v i l l i n 抗体l ：5 0 ，鼠抗人M U C 2抗体l ：1 0 0 ，) ，在湿盒内4 。C 过夜。P B S 冲洗，5 分钟3 次。v i l l i n 、M U C 2 滴加羊抗小鼠I g G 抗体一H R P 多聚体，3 7 。| C 温箱孵育2 0 分钟，P B S
11、 液冲洗5 分钟3 次。 显色剂D A B ( 3 ，3 - 二氨基联苯胺四盐酸盐) 显色，取D A B 显色剂试剂盒中试剂A 、B 、C 各一滴，加入1 0 0 0 毫升蒸馏水，混匀，即配成D A B 工作液。每张切片滴加约5 0 9 l 。显色时间为1 0 2 0 分钟，显微镜下观察显色情况，发现开始有背景色时立即将切片放入水中终止显色。自来水充分冲洗。苏木素复染：苏木素染色2 0 秒，自来水冲洗；盐酸酒精分化2 秒，自来水冲洗；氨水返蓝1 秒，自来水冲洗。脱水透明。7 5 ，9 0 ，1 0 0 酒精各5 分钟：二甲苯3 次各1 0 分钟。 中性树胶封片。 光镜下观察，照像。选用免疫组化
12、室已知的阳性组织切片作为阳性对照，用P B S 液代替一抗作为阴性对照。2 3 染色结果判断：( 1 ) v i l l i n 染色结果判定：光镜下观察结肠吸收细胞膜纹状缘及( 或) 胞浆弥漫或颗粒状被染成棕黄色为阳性细胞。( 2 ) M U C 2 染色结果判定：光镜下观察结肠粘膜杯状细胞的周边部胞质内染成棕黄色为阳性细胞，核周及核上明显。采用双盲法选取有代表性的腺上皮区域，在4 0 0 倍高倍镜下，每张切片随机取5 个视野计算阳性细胞数，取其平均数，并根据阳性细胞数的多少进行半定量分级，采用半定量积分法计算免疫组化染色积分，即分别对每张切片的阳性细胞数及阳性细胞着色程度进行分级记分，结果
13、以两项乘积表示。染色强度分数标准：无色为0 分，淡黄色为1 分，黄色为2分，棕黄色为3 分；同样物镜观察阳性细胞数，高倍视野阳性细脆数( 5 为阴性记0 分，5 - 2 5 为1 分，2 6 5 0 为2 分，5 1 7 5 为3 分，) 7 5 为4 分，两者相乘1 4 分为弱阳性( + ) ，5 - 8 分为中等阳性( + + ) ，9 一1 2 分为强阳性( 卅) 。2 4 统计学分析：采用S P S S l l 5 软件包进行统计分析。v i l l i n 和M U C 2 在不同类型结肠粘膜间阳性率的比较用f 检验，必要时用确切概率法。v i l l i n 和M U C 2 与结
14、肠腺癌临床病理指标的关系采用两个独立样本( 等级资料) 比较的W i l c o x o n 秩和检验和( 或) 多个独立样本( 等级资料) 比较的K r u s k a l W a l l i sH 检验。v i l l i n 和M U C 2 之间阳性率的相关性采用S p e a r m a n 等级相关分析。当P O 0 5 ) ，与重度不典型增生比较差异有显著性( P O 0 5 ) ；腺瘤不同分级间比较差异具有显著性( P0 0 5 ) ，而切缘粘膜与癌旁粘膜间比较差异有显著性( P 0 0 5 ) 。而v i l l i n 表达与肿瘤分化程度无明显相关性( P 0 0 5 )
15、。未显示v i l l i n 表达阳性率和强阳性率与淋巴结转移、性别、年龄有关( 尸 0 0 5 ) 。山西医科大学硕士学位论文表4v i l l i n 表达与临床病理学参数的关系性别男文年龄岁5 02 7病理学分级高分化1 0中分化1 8低分化1 2浸润深度粘膜或浅肌层1 1深肌层或全层2 9淋巴结转移无1 51 1596324155112l2124 2 15 7 1 +3 8 55 56 +7 0 05 5 62 5 O 8 1 83 79 + 45 2 69 5 2 *76 974 1 1 0 05 5 68 3 3 +90 96 9 0 *4 006 6 7有2 51 17525
16、6 0 +8 0 0 注：+ ， 00 5 ”P 0 0 5 )6837，384眩3892体9山西医科大学硕士学位论文由表5 可见M U C 2 在切缘粘膜、结肠腺瘤( 伴轻冲、重度不典型增生) 、结肠腺癌中阳性表达率分别为9 5 O 、8 0 ( 9 2 3 、5 7 1 1 、5 5 ，各组比较差异具有显著性( P O 0 5 ) ，而与重度不典型增生比较差异具有显著性( 尸 O 0 5 ) ；腺瘤不同分级间比较差异无显著性( 尸= O 1 0 0 0 0 5 ) ；M U C 2 在切缘粘膜、癌旁粘膜、结肠腺癌中阳性表达率依次递减，且差异具有显著性( 户 0 0 5 ) 。3 2M U C 2 表达与临床病理学参数的关系表6M U C 2 表达与临床病理学参数的关系汪： P 00 5 P 0
