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1、 外源性磷酸肌酸钠对肢体缺血再灌注的保护作用外源性磷酸肌酸钠对肢体缺血再灌注的保护作用摘要 目的 探讨外源性磷酸肌酸钠（cp）对缺血再灌注肢体的保护作用。 方法 健康成年家兔 20 只，随机分为对照组、缺血再灌注组（ir） 、低浓度磷酸肌酸钠组（lcp)和高浓度磷酸肌酸钠组（hcp） ，每组 5 只。制备兔左后肢缺血再灌注模型。静脉注射生理盐水和不同浓度的 cp，再灌注前、后不同时间取血测定血清乳酸脱氢酶(ldh)、天冬氨酸氨基转移酶(ast)、丙二醛(mda)的含量及超氧化物歧化酶(sod)活力。电镜观察肌细胞超微结构变化。 结果 缺血再灌注后 lcp 和 hcp 组 ldh、ast、mda
2、 含量低于ir（p0.05） ，sod 活力显著高于 ir（p0.01） ；电镜下 lcp 和hcp 组肌损伤轻于 ir 组。 结论 外源性磷酸肌酸钠能够保护缺血再灌注骨骼肌。关键词 外源性磷酸肌酸钠；兔；骨骼肌；再灌注损伤protective effects of creatine phosphate on ischemia and reperfusion injury of limbsliu mingming1 ding ming21.the anesthesiology of weifang medical college，weifang 261041， china； 2.the ane
3、sthesia department of the 89th chinese peoples liberation army hospital，weifang 261023，chinaabstract objective to study the protective effect of creatine phosphate on ischemia reperfusion of skeletal muscle. methods the experimental models of ischemia referfusion injury in extremities were produced
4、in 20 healthy adult rabbits,which were randomly divided into control，reperfusion,low concentration and high concentration with 5 rabbits in each .isolated left hindlimb of rabbits were used as ischemia-reperfusion models.normal saline injection, creatine phosphate 0.5g and 1g were infused intravenou
5、sly into the three groups just before blood reperfusion. at the points of pre-ischemia,1 and 4 hours after reperfusion,the blood samples were collected respectively for measurements of ldh,ast, mda and sod. meanwhile,the tibialis anterior muscles were harvested for examination of the micro-structure
6、 and the ultrastructure by using electron microscope. results after reperfusion,the contents of ast,ldh,mda significantly decreased（p0.05）and the activity of sod obviously increased in the hcp and lcp groups compared with reperfusion group（p0.01）. the electron microscope examinations showed severe t
7、issue injury in the reperfusion group but mild in hcp and lcp groups. conclusion creatine phosphate has a significant protective effect on ischemia reperfusion injury in extremities.key words creatine phosphate ；rabbit； skeletal muscle；reperfusion injury临床上常见的断肢(指)再植、软组织损伤、骨筋膜室综合征、血栓形成及应用止血带时间过长等,均会
8、引起肢体缺血-再灌注（ischemia-reperfusion， i-r）损伤1。磷酸肌酸钠作为一种外源性的能量合剂,对缺血再灌注心肌具有确切保护作用2。但外源性磷酸肌酸钠对骨骼肌缺血再灌注损伤的影响尚未见报道。本实验制备家兔肢体缺血再灌注损伤模型，探讨外源性磷酸肌酸钠对肢体缺血再灌注骨骼肌的作用。1 材料与方法1.1 动物分组与模型建立健康成年家兔 20 只，体重 2.53.5kg，雌雄不限，解放军第89 医院动物中心提供。随机分为对照组、ir、lcp 和 hcp，每组 5只。1.2 建立家兔后肢缺血再灌注损伤动物模型3%戊巴比妥钠 30mg/kg 静脉麻醉，参照 crinnion3法建立家
9、兔后肢骨骼肌缺血再灌注损伤模型。对照组：只解剖出股动静脉，不阻断不环扎。缺血组：恢复血流前耳缘静脉给予生理盐水1ml，再灌注 4h。低浓度组：恢复血流前给予外源性磷酸肌酸钠溶液（北京利祥制药有限公司生产，0.5mg，生产批号 100602）0.5g/ml 1ml，再灌注 4h。高浓度组：恢复血流灌注前给予外源性磷酸肌酸钠 1g/ml 1ml，再灌注 4h。1.3 检测项目及方法四组分别于缺血前、缺血再灌注 1h、再灌注 4h，3 个时相点采血并制备电镜标本。1.3.1 生化指标检测 ast、ldh 的测定采用罗氏 p800 全自动生化分析仪。mda 和 sod 测定采用硫代巴比妥钠法和黄嘌呤氧
10、化酶法，试剂盒购自南京建成生物工程研究所，严格按照说明书操作。1.3.2 电镜观察 将取得的骨骼肌标本切成 1mm1mm1mm 大小的组织块，经 30g/l 戊二醛 4前固定 2h，再经锇酸后固定，梯度乙醇脱水，环氧树脂包埋，超薄切片，铅铀双重染色，透射电镜观察并摄片。1.4 统计学处理所得数据以均数标准差（s）表示。应用 spss13.0 统计软件进行数据处理，多组样本均数间先进行方差齐性检验，不同组间同一时间比较采用单因素方差分析，当差异明显时进一步比较采用 lsd 检验，方差不齐则采用 dunnets t3 法，p0.05 表示差异有统计学意义。2 结果2.1 血清学检测结果缺血组再灌注
11、后 1h、4h，ir 组较对照组 ast、ldh、mda 含量明显升高（p0.01） ，sod 的活力明显下降（p0.01） ；缺血再灌注后 1h 和 4h，hcp 和 lcp 组 ast、ldh、mda 含量较 ir 组降低（p0.05） ，sod 的活力明显增高（p0.01） 。见表 1。2.2 电镜结果再灌注后 4h，ir 组显示线粒体呈明显空泡样变，可见明显髓样变，线粒体嵴断裂、消失。lcp 组仍可见相当正常结构肌组织,但线粒体部分呈空泡样变、髓样变，部分线粒体嵴断裂。hcp 组肌组织基本完整，线粒体未见明显损伤变性。3 讨论肢体缺血再灌注损伤指肢体缺血达到一定时间，在恢复血供后反而出
12、现比缺血时更加严重的损伤，表现为组织结构与功能损害的进一步加重。缺血再灌注损伤是个多机制参与的损伤过程,能量代谢障碍、钙离子超载、氧自由基、白细胞介导的炎症反应等在骨骼肌缺血再灌注损伤中起关键作用4。正常肌细胞内含丰富的 ast、ldh，肌细胞受损后酶可释放入血，其含量高低可反映细胞损伤的程度。sod 可有效清除氧自由基，反映机体抗氧化能力； mda 是脂质过氧化作用的最终产物，其含量可间接反映氧自由基对机体造成的损伤程度。sod 和 mda 是反映氧化损伤的指标5。线粒体在缺血再灌注损伤发生及其发展中决定细胞存亡的关键6。cp 可以抑制 5-核苷酸酶的活性，使溶血磷脂酸甘油脂浓度下降，稳定磷
13、脂膜。cp 维持呼吸链正常氧化磷脂化功能保证atp 高水平，使氧自由基生产减少，保护机体免受氧自由基损伤7，8。本次实验显示，缺血再灌注后 ir 组 ast、ldh、mda 含量较对照组明显升高（p0.05） ，sod 活力较对照组明显降低（p0.01） ，说明 ir 组骨骼肌在缺血再灌注后发生了脂质过氧化反应，细胞膜损伤严重。lcp 组和 hcp 组缺血再灌注后 ast、ldh、mda 含量较ir 组降低（p0.05） ，sod 活力升高显著（p0.01） 。经电镜形态学观察证实在缺血再灌注 4h 后 ir 组细胞损伤明显，lcp 组细胞损伤较 ir 组减轻，hcp 组几乎接近正常组织细胞。
14、本实验说明应用外源性磷酸肌酸钠能减轻脂质过氧化反应，组织清除自由基能力增强，减轻线粒体的损伤，对肢体缺血再灌注损伤有显著的保护作用。本研究为外源性磷酸肌酸钠在肢体缺血再灌注损伤保护方面，提供了一定的实验依据，但最佳保护剂量还有待进一步探索。参考文献1 wang x，kan s，zhang b. pathological changes in neuromuscular junction during ischemia-reperfusion in rat skeletal musclej. zhonguoxiufuchongjian waikezazhi,2006,20（11）：1103-11
15、08.2 周丽昉, 高长斌.磷酸肌酸对大鼠缺血再灌注后心肌损伤的影响j.中国老年学杂志, 2010, 31（5）:1609-1610.3 crinnion jn,homer vs,parkin sm,et alrole of neutrphilendothelial adhesion in skeletal muscle reperfusion injuryj. br j surg，1996，83（2）：2514 洪念国,田中伟,李涛,等. 断肢再植缺血再灌注损伤的保护机制j. 河南科技大学学报，2006，24（9）:171.5 呼敏凤,尚立芝,韦大文. 川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠保护作用的实验研究j. 上海中医药杂志，2008，42（4）:66.6 kroemer g,galuzzi l,brenner c. mitochondrial membrane permeabilizationin cell deathj. physiol rev,2007，87:99-163.7 常建华,景桂霞,党旭云. 磷酸肌酸预处理对糖尿病大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制j. 西安交通大学学报(医学版)，2011，32（2）:151-154.
