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1、浙江大学硕士学位论文中枢组胺及其受体对帕金森病大鼠旋转行为的作用姓名：胡丹娜申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：陈忠;罗建红20060501浙嚣大学硕士学位论文中枢组胺及其受体对帕金森病大鼠旋转行为的作用浙江天学医学院硕士研究生导师神缝生物学壤秀娜 陈忠磺般罗建红教授中文摘要撼愈森疯( P 矗桶矬s 。矬毽越黼s e ，姻) 蹙秘慢性棒疑系统遐簿救痰瘸，其燕要的瘸理特征是黑震纹状体多巴胺( 曲蜮酶矜A ) 狰经通路激谶性、选择性交性缺失。目前的研究尚不能完全揭示p D 的病因和确切的发病机制。脑内多种神经遴质及其受体系统的失衡和紊乱是多巴胺能神经元损伤逐渐加重的重要鳆殿，其中麟内组胺
2、乍舞一斡神经递震在P D 中豹体熙日益受黧 关注。部分稔床和尸检研究发现P D 病人脑内组胺水平明显高予芷常对照，提示缎胺可能参与了p D 的病理过襁。同时，还有研究发现缎胺H 3 受体介入了熬底桉神缀回路的调节，但是否H l 和H 2 受体也参与了基底核神经画貉的调节至今仍未见报道。本实验采用每强鏊多巴( 岳h y d r o x y d o p a m h ，6 0 m A ) 偏侧毁损的P D 大翳陵型，通过行为学实骏系统她研究了组胺及冀H t 、H 2 、娲爨体擞P D 太鼠旋转行为中的作用。此外，本实骏还观察了P D 犬鼠下丘脑结节乳头挟( t l I I ，c r o m a 明瑚
3、i 1 1 a r ym I c l 毗孙芷N ) 内组胺能神经元的囊化。以上研究在为迸一步理解P D 发病机制、探索新黥治疗途径稳供愚踌和线索。露的：探讨内源性缀胺及箕蹙体在P D 大鬣旋转行为中的作用，以及明确p D时组胺耱神经元是否有病理改炎。方法：本实验选取黑质致密部( 蜘l b s 怕n 血n i g m 删p a n ，s N c ) 和翦脑内德束( 牲l e d i a l 钠舳抽n d l e ，M F B ) 两点注射激汪大学疆士学位论文昏蠛固A 毁攒右测爨震一纹状体涎路，剑答荤I l 侧姻大鼠模毽。术压繁7 秘1 4 幽 零缀胺摆关瑟兹，3 嵇袋酾矗妇落颧鹜部蔽下注辩瓣羚毽
4、跨( a 泌。枷，8 ，0 5 燃鲫崤) 诱导大鼠发生旋转行为，记录3 0m i n 内的平均旋转次数。此外，选取部分动物嫩赐受痰缀织纯学法检测S N c 内D A 麓 孛经元葶爨强烈内缀胺戆神经元的免疫反成活性。络果：6 m m A 毁损詹第7 和1 4d ，与模型组相比，组胺前体物质缎氮酸( h i s t i d i l 璇5 0 妒唱，黢腔淀射) 可增辆大鼠每分钟麓转次数 H 3 受体激动剂i I I 】蝴，荷兰T i m m e f n l a I l 教授提供。浓度1 0 雌，5p l ，铡麟室绘蕊。( 1 2 ) 酪氮酸羟化酶( 啪s i n eh y 出o x y l a s
5、e ，骶1 ) 鼠抗单兜隆抗体，购乎s i 翔噙公司。 ( 1 3 ) 组氨酸脱羧酶妣d e c a 】瞳粉刚勰e ，姐) C ) 兔抗多克隧抗体，暇本 东寒大学嘲教授惠赠。( 1 4 ) 砧e x a 4 8 8 共轭的羊抗疑或攀抗热二抗，赙予M 0 l 。硼皴P b e 公司。3 器材( 1 )脑巍体定位仪，N a r i 蝴g e ，S m 5 ，1 钛y o ，J a p 锄( 2 )徽黧牙科锫，s 躺斟，s 白啪9 9 0 ，l ：o r 龅( 3 )l Om 微量进榉器，上海医用激光仪器厂( 辞旋转行为检测役，Q 懈鹫动物旋转行为自动测定系统，青鹞大学提供( 5 )摇床，z D 一
6、9 5 5 6 ，太仓县科教设餐厂( 6 )午分之一克必平，A R 3 1 3 0 ，C 岫I I sC o I p ，U s A( 7 )磁力加热搅捧器，7 8 一l A ，杭州仪器厂( 8 ) Y W 一9 0 旋满混合器，上海医科大学仪器厂( 9 )恒冷冰冻切片机，L E I C A ，c M l 9 0 0 ，酝釉撇( 1 0 ) 荧光显镦镜，O L 帕艘U s ，B X 5 l ，J 睁嫩毒脚魂携楼粪夔懿餐 l 溉永合糕醛( 3 酾蛾) 经羧腔注射麻醉大鼠，君瀚是于赫立体定位佼土，按P 越缸辩s 与w 嬲徽膝黧谱确定蠢铡游藏肉偻j 柬( 氆础越f o 】潜酾妇b u n d i 鼠谶
7、7 8 ) 窝黑疆致密帮( 幽嗽瞰i a 斑g r ap a 嘏e o n l p a 魄s k ) 坐标。瓣B 坐标：前随藩O + 2 礅m ，牵线旁群2 0 艘，硬骥下8 Om m ：S K c 嫩标：前翻后4 8 前衄，中9巍巍太学矮掌健逢交线旁开1 6 娃胍，硬膜下8 2 溅。以牙科钻钻开定位处颅骨，用微量注射器缓慢注入溶于V e 赫山液( O 。2 抗坏瓶酸，O 9 艇理盐水) 的6 O H D A ( 2 社“1 ) 各4肛l ，注射速艘为l 妇妇，注毕留针1 0m m 。缓慢拔针。而后右侧侧脑室蠼植一争 径7 H 激靛不锈镶簿管( 供药物铡箍室注翦蠲) ，麓牙辩承泥固定予颁曹表面
8、。侧脑室嫩标：前囟后1 0m m ，中线旁歼1 5 蛐，硬膜下3 8 姗。最后，消毒、缝疫，逡续注射蔽生素3d 戳藏感染。程手本缝大鬣戳等鬃夔v e 越e l e 浚窝生理盐水( n o m 脚s o d i u m ，N s ) ( v e h j c l 酣N S ) 代替6 o I _ A 和药物。5 。旋转行淹撩测术后第7d 和第1 4d ，颈背部皮下注射阿朴吗啡( a p o ，O 5m g 戊g ) 诱发大鼠向毁授对倒麓转。绘焚瑟2 5 武珏，曩旋转行沟捡测彼记袋大鬣酮妊硅肉静旋转次数，缣持测试环竣安静。给药强大鬣在注射a 前鬻箍前遴行药耪处壤，不同的药秘冀楚理辩问不黼。H i s
9、 t i 赫l e 行为检测前3 0 m 巯膝腔 o 0 5 ) 。a 删 缭药组( 6 一O 磁) A 心删，2 5 牡g ，i c I v - ) 簿分钟转数达4 4 4r ，m ，较模型组明显降低( P O 。0 5 ) ( 潮2 1 A ) 。时间转数曲线( 圈2 ，1 B ) 显示，大鼠旋转行为的峰值主要位于开始旋转后的2 0 3 0m 派走，h i s t i d i e 、心凇的作用主要在葡4 0m i 内略为弱擞。毁损后第1 4d ，模挺组大鼠每分钟旋转次数为l O 仇r ，h i s t i 曲1 e 给药组与模型组相比转数明显增加，达1 4 0 7r ，m ( P 。p y
10、 融a m i n e5 0p g 给药组( 臌) A + 谢l a m i 5 0 l 岛i c - v _ ) 每分钟转数为2 8 21 5绺逸濒涯大学硬士学垃逢文r m ，较模溅组明显降低( P 0 0 5 ) ( 图2 4 C ) 。时间一转数曲线( 图2 4 D ) 显示，d o b e 咖tl O 、2 5 肛g 组大鼠旋转次数较模型组无明显变化。删m |赫雒 4逸彗冀尊辅辩褂 柏鞠啼翻l一争a 鹕- 良错蕾M C 蝴忡删q 心 一掌d 姒+ a 晴嘲事雨 靛5 潍一棚- I M N 自_ 一事蠛o “a 嘲嘲静肇融嘲 + 拳a 曜璃州了呻事啊擂葛l 垮图2 4H 3 受体拮抗荆d
11、 o b 娜m p n 对8 p o 诱导的P D 太鼠旋转行为的作用F i 参2 4 班姆o f 幽k 呷p i t a p o 啦o f I 漱抽d l l l ：棚缸蝻喈b 蛐i o r 讯p Dr 啦A 、C t h e 斜懒g e 嫩幽搬蛙溉挺粥商傩融；毽、D ：弱臻瓣娃钠嫡删眙瓢奠舔燧，P ( 0 0 1 ，+ + + p 哟肿1w6 - 0 础) A + N S 卵u p ，O 舯啪yA N O V A5 。缝胺H 3 受体激韵裁洳臻碜两降低P D 大鬣的嫠转学戈如图2 5 所示，6 - O 肋A 毁损后第7d ，模型组( 6 o 】胁A + N s ) 犬鼠每分镑旋转次数为7
12、1 8r m ，j m m 印i p 给药组( 6 - O ) A “m 坷印i p l O 蝣，i c v ) 每分1 9，j，l#翟浙江大学硕士学位论文钟转数为5 5 6r ，m ，与模型组相比略有降低，但无统计学意义( P 0 0 5 ) ( 图2 5A ) 。时间一转数曲线( 图2 5B ) 显示，i m m 印i p1 0 “g 能降低大鼠旋转前半阶段的行为，而后半阶段呈现出比模型组大鼠行为恢复趋势减慢的现象。毁损后第1 4d ，模型组大鼠每分钟旋转次数达l O 0 1r 胁，与模型组相比i m m e p i p1 0p g 组转数明显降低至6 1 3r 细，具有统计学意义( P
13、，o 0 5 ) ( 图2 5C ) 。时间一转数曲线( 图2 5D ) 显示，i m m 印i p1 0p g 的作用贯穿大鼠的整个旋转过程。AC17 一U J吒n。岫吒B蕾鼻轴q 吣一每自瞄坤穗- B - 埔m 口脚伯捧一事a l 弘皤 - 暴a t 睫啪呐，取墙墼2 。5 避受体激魂麴h 瓣姊韬黠a 聱诱导懿翰丈鬣旋转行势静撵髑F 峨2 5E 觑啉0 f i | l l l 工唧母o na p o m o r p h 嘛m d u c e db 瑚j n gb e 磕啊o r 融P Dr a t s A 、c ：T k神e 强g ec o 蛐嘲曲醣l 乜I l 懈o f3 0m i n
14、u 托s ：B 、D ：髓m e - c o “r 辩o f6 0m 矗删| 嚣 阳D 0 5 p ( D _ o l ，+ + p 0 0 l 坩秘O H D 时娼g 删印，o n o 州a yA N O V A鍪逸浙江大学硕士学位论文6 组胺受体接抗荆秘激动剂对p D 大鼠旋转行为的作用总结前图2 2 、3 、4 、5 巾p y r i l a m i 黼、c i m e 虹d i n e 、d o b c n p r o p i t 、i I 姗印咖对a p o 诱尝的O m I A 毁损的P D 大鼠旋转行为的作用，直观地表现缎胺三种受镩在P D 大鼠旋转行为串静佟用( 图2 6 )
15、。C ，叠蕾 盘瓤疆盈麓蕊礴墨曩豳F嘲 4捧a 帕睫+ 嘴 m + 一曲州憎l 哪a 昏饼瞰+ 一州嗍阳 务糖獬镛蚓睫喇# 溜 扣O H 蕉刊。i m 8 黼辆醋稿陶 和O m + C 黼黼啊唪蚋6 - + C 埘咿坤l 媳墙 拳O 旧 + 臻釉唪瞵霸廿簦圈2 6 蜊l a m i 、c i m e t i d i 驰、c l o b e n p r o p n 、衄啦印i p 对a p o 诱导的P D 大鼠旋转行为的撵霜F 塘- 2 6E 嫩嘛o f p 蜘1 a m i n e 、c 衄酬帕增、c l o k n p r o p i t 甜dj n 】啪印po n 印0 m o r p
16、l d n 肾i n _ 岫c e d 嗽毡7 融主珏P D 涨8 p 四。，4 ，。娥，p ，l 粥“强黪A 手N s 粼潮酗张yA N O V A2 1嚣慧璧墨蒜茹嚣舞鬻蕾_骨p浙江大学硕士学使论文三、大鬣下最藏结节襄头棱嚣l 翻I c 免疫缀织袍学染色缝祭如豳3 所示，假手术缀( v e l l i c l e + N s ) 双铡下丘脑缩节乳头核( 孙N ) 内可见大量排列整齐的m ) c 。服阳性神经元( 即组胺能神经元) ，胞体大、卵网形、胞浆染色( 图3 A 、B ) 。& 0 H D A 毁损屠第7d ，模型组( 6 - O H D A + N S ) 毁损 稠窥泰羧矮麴硼内 糙
