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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：徕着季新氍嘶念岔7 1，黟飘 7 镰?甏胡 终院领导盖章；鼍渤嬲河北医科大学研究生学位论文独创性声明日本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写
2、的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：东静导师签章：影考薪 I、f 乙年歹月k 日目录中文摘要1英文摘要3研究论文2 型糖尿病大鼠胰岛细胞肝X 受体仅的表达前言5日青”“”“”“”“”“”“”一”“一”“。5材料与方法7结果”1 7附I 图2 0附表“”2 3讨论一”2 4结论”2 7参考文献2 7综述肝X 受体与糖脂代谢紊乱3 0致谢3 9个人简历4 0中文摘要2 型糖尿病大鼠胰岛细胞肝X 受体Q 的表达摘要目的：观察链脲佐菌素( S 讹砷) z 0 I t o c i l l ，S T Z ) 诱导的2 型糖尿病大鼠胰岛细胞分泌功能紊乱及胰岛肝X
3、受体a ( L i v e rXR e c e p t o ra ，L X 耻)m R N A 和蛋白的表达情况，进而阐明胰岛肝X 受体a 表达异常是否和胰岛细胞分泌功能紊乱有关。方法： 1 将4 0 只雄性S T A 大鼠随机分为三组：对照( N C ) 组1 0 只、肥胖( F A ：r ) 组1 0 只及糖尿病( D M ) 组2 0 只。2N C 组大鼠给予国家标准啮齿类动物饲料喂养2 4 周，F A T 组和D M组大鼠给予高脂高糖饲料喂养1 2 周后，进行糖尿病大鼠造模，即D M 组 按2 5 3 5 哦体重分2 3 次腹腔注射1O m 咖lS T Z 溶液选择性破坏部分胰岛细胞以
4、诱导糖尿病的发生，以注药7 2 小时后大鼠尾静脉取血测随机血糖1 6 7n u n o l L 为成模标准；F A T 组大鼠则按3 0 峨体重腹腔注射柠檬酸盐缓冲液作为对照。糖尿病大鼠造模成功后盯组和D M 组继续予以高脂高糖饲料喂养1 2 周。3 糖尿病大鼠造模后第1 2 周，用O 4 戊巴比妥钠麻醉各组大鼠，开腹从下腔静脉取静脉血测定并且比较各组大鼠空腹血糖( F a S t 吨B l o o dG l u c o s e ，F B G ) 、血总胆固醇( T 0 脚C h o l e s t e 哟l ，T C ) ，血甘油三酯( 瞄9 1 y C 耐d e ，T G ) 、血胰岛素(
5、 F a S t i I 玛s e 砌【I li I l s u l i n ，F 烈S ) 水平的变化。计算并比较各组胰岛素敏感指数( m s u l i I ls e n s i t i v 时i n d e x ，I S I ) ，I S I ；h l( I S I ) 。4 处死大鼠，取出胰腺组织及分离胰岛细胞，分别用荧光定量P C R ( S R 骶e 1 1 ) 及免疫组化的方法检测各组大鼠胰岛细胞肝X 受体删心渔和蛋白的表达。结果：1 分组前，各组大鼠空腹血糖水平及体重无差异。成模后D M 组大鼠多饮、多食、多尿，体重减少等症状比较明显。D M 组大鼠体重明显低于F A T 组和
6、N C 组( 尸 O 0 5 ) ；F A T 组F B G水平与N C 组无明显差异( P O 0 5 ) 。胰岛素抵抗的判定用胰岛素敏感指数I S I ( I I l s u l i I lS e n s i t i v 时I n d e 对：I S 卜1 口I NXF B G ) ，F 玳单位为n l I UL ，F B G 单位为I I I l o l L ，取自然对数使其正态化后进行分析。D M 组与F A T 组大鼠I S I 明显低于N C 组( P O 0 5 ) I 璐u l i l ls e l l S i t i V 时( I N S ) o fD Mg r o u pa
7、 n dF A Tg r o u pi s0 b v i o u s l yl 佣，e r 吐l eN C 则p ，俨 O 0 5 ) 的各组样本均数，方差齐( 尸 O 0 5 ) 的采用方差分析( 锄a l y s i so f v 撕锄c e ，A N O V A ) 比较各样 本均数是否有显著差异，检验水准为删0 5 。结果l 大鼠体重、空腹血糖、血脂、胰岛素敏感性1 1 糖尿病大鼠症状与N C 组大鼠相比，D M 组大鼠多饮、多食、多尿、消瘦等症状明显。而汀组较之于N C 组无明显多饮、多食、多尿等表现。D M 组大鼠较R 虹组与N C 组明显反应迟钝，精神萎靡。研究论文1 2 体重变
8、化D M 组体重较F A T 组( P 0 0 5 ) 。( 见n b l e1 )1 4 血脂比较1 4 1 总胆固醇( T C )D M 组T C 与R 虹组( 尸 O 0 5 ) 。( 见T a b l e1 )1 5F I N S 和I S I 比较1 5 1 空腹血清胰岛素( F I N S )D M 组F I N S ( P 0 0 5 ) 之间的差异无统计学意义。( 见T a b l e1 )1 5 2 胰岛素敏感指数( I S I )胰岛素抵抗的判定用胰岛素敏感指数I S I ( I n S u l i nS e n s i t i v 毋I n d e X ) ：I S I
9、= 1 ( F I NXF B G ) ，F I N 单位为I I l I U L ，F B G 单位为l I n o l L ，取自然对数使其正态化后进行分析。D M 组、汀组和N C 组I S I 的均数分别为O 017 5 4 士o 0 0 2 7 8 3 、O 0 2 8 0 4 士0 0 0 7 9 4 5 和O 0 7 2 6 6 士O Ol5 0 4 4 ，由于I S I为偏态分布，故取其负自然对数I S I ；h l ( F P G F I I l s ) 进行正态性检验和方差齐性检验，属于正态分布且方差齐，方差分析结果显示：D M 组I S I 比F A T 组( P 4 0
10、k 卧n 2 ) 较对照组皮下和腹部脂肪组织中L h ，但不是L 邙的n d 淑A水平增高。有意思的是，L R S 激动剂促进骨骼肌中脂肪合成作用 2 型糖尿病患者较健康对照组有所加强，因为在糖尿病患者L b 激动剂能刺激脂肪酸合成，但不促进其氧化【1 5 1 。T 0 9 0 1 31 7 通过增加强1 和蛋白激酶磷酸化增加健康人骨骼肌细胞胰岛素敏感性【1 5 1 。我们以高脂高糖饮食成功诱导了肥胖和胰岛素抵抗( i I l s u l i I lr e s i g t a l l c e I R ) 大鼠，然后分次给予注射小剂量S T Z 破坏部分胰腺引起胰岛研究论文素分泌不足，模拟2 型
11、糖尿病的发生发展过程。D M 组大鼠与F A T 组大鼠胰岛素敏感性较N C 组有很大程度的降低，以D M 组大鼠更加明显，说明我们诱导的F A T 组大鼠胰岛素抵抗明显，且D M 组大鼠模型也是在胰岛素抵抗基础上逐渐演变。D M 组大鼠与F A T 组大鼠空腹胰岛素( F I N S ) 水平无明显差异，但D M 组大鼠空腹血糖F B G 更高，所以D M 组大鼠胰岛素敏感系数较F A T 组大鼠也明显降低，显示了较F A T 组大鼠更加严重的胰岛素抵抗。实验结果说明肥胖和高血脂症可以加重2 型糖尿病的患病风险，而2型糖尿病的发病又加重了胰岛素抵抗和高血脂症，形成恶性循环，从而使血糖进一步升
12、高。本实验用R P C R 和免疫组化的方法检测胰岛细胞L 之a m R N A 表达，发现D 】组大鼠和F A T 组大鼠胰岛细胞L Q m R N A 的表达都明显上调，而且D M 组大鼠比F A T 组大鼠上调的更明显。免疫组化结果可见D M 组大鼠和F A T 组大鼠胰岛虽然增生肥大，但胰岛细胞总量不但没有增加，反而减少，说明胰岛细胞已经开始凋亡。研究表明，L b 是通过调节胰岛细胞内的脂类和糖类代谢来控制胰岛素的合成和分泌。由此推测肥胖和脂质负荷时，胰岛细胞L 地的表达被激活，来维持胆固醇和脂肪酸代谢的稳态，刺激胰岛素分泌，血胰岛素升高，胰岛素又增强L h 基因转录。L k还可以代偿
13、性的改善胰岛素敏感性。这是在糖尿病发病早期急性刺激的结果。而当胰腺部分破坏血糖增高时，继续加重这个代偿过程。研究表明【1 7 】当细胞内胆固醇浓度过高时，L R S 可以激活脂肪合成甾醇调节元件结合蛋白( 渤o lr e 叫姗e l e m e mb 砌堍呻i I l ，S R E B P 1 c ) ，增加不饱和脂肪酸的合成并促进其与过多的胆固醇酯化，从而促进胆固醇的储存。在葡萄糖浓度高时L R s 激活碳水化合物反应元件( c 打b o h y 血舵r e s p o n e l 蹦l e n t - b i I l 如gp 眦i I l ，C 1 1 I 也B P ) 的表达，表达脂肪合
14、成酶从而促进多余的葡萄糖转化为脂肪，加强肝脏脂肪酸合成，引起肝脏脂质沉积。同时L R s 也参与了胰岛素介导的脂肪生成。这一负效应又会加重胰岛素抵抗。实验结果表明长期的高脂血症、高血糖对胰岛细胞的慢性刺激，L 妯的调节作用失常，细胞就表现出脂质和氧自由基积累，最终凋亡。病情发展，胰岛细胞进一步减少，胰岛素缺乏现象也会更加严重，血糖会持续增高。C a 0 等【1 8 1 也发现，人L 地可以把载脂细胞的信号进行放大达到自动调节机体的功能，这种自反馈调节是胆固醇代谢信号级联放大的重要方式。由研究论文此推测这种作用类推于人类，可能会更加放大和明显。结论在2 型糖尿病逐步形成过程中，L 地的表达逐步增加，与胰岛p 细胞分泌功能紊乱有密切联系，很可能是2 型糖尿病发病的重要促成机制之一。参考文献lW i l l yP J ，U m
