《乙醇改变骨髓间充质干细胞神经肽的表达》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乙醇改变骨髓间充质干细胞神经肽的表达（58页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、At h e s i ss u b m i t t e dt oZ h e n g z h o uU n i v e r s i t yf o rt h ed e g r e eo fM a s t e rE f f e c t so fa l c o h o lo nt h ee x p r e s s i o no fn e u r o p e p t i d ei nh u m a nb o n em a r r o wm e s e n c h y m a ls t e mc e l l sB yZ h uS h a o y a n g 一一S u p e r v i s o r ：P
2、 r o fW a n gY i s h e n g O r t h o p e d i c st h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fZ h e n g z h o uu n i v e r s i t yA p r i l2 0 1 2原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：匆己缪I l 锣
3、日期：2 衫z 年 月刀日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：例F 1 期：2 上年夕月刀日摘要乙醇改变骨髓间充质干细胞神经肽的表达研究生：导师：朱绍阳王义
4、生郑州大学第一附属医院骨科郑州4 5 0 0 5 2摘要背景：现如今，患有酒精性股骨头坏死疾病的患者人群越来越多，严重困扰了人们的生活，但其致病的机理尚未清楚，而且到目前为止，还未找到任何一种能够有效预防酒精性股骨头坏死的方法。其严重影响了人们的身心健康，降低了生活质量。股骨头缺血坏死是指股骨头的血运不良最终导致骨细胞及组织的不断死亡和修复，从而使股骨头内部结构发生改变，而后塌陷，最终导致关节活动功能发生障碍。自1 7 世纪有学者提出此病至今，许多学者先后提出了一系列学说，但还没有能够完整合理说明发病机制的学说。骨髓间充质干细胞是一类能够向成骨细胞方向以及其它细胞方向分化的干细胞，骨髓中存在一
5、类神经肽类物质，这类物质对成骨或血管的分化有诱导作用，从而参与到骨组织细胞的代谢过程中，并发挥着重要的作用。到目前为止，乙醇对人骨髓间充质干细胞中神经肽表达影响，这方面在国内外还没有报道。目的：利用体外细胞学实验，观察乙醇对人骨髓间充质干细胞降钙素基因相关肽受体、P 物质受体、过氧化物酶体增殖子活化受体7 m R N A 及R u n x 2 m R N A 表达的影响，进一步探讨酒精性股骨头缺血坏死的发病机制。摘要材料与方法：在招募的1 0 名年龄平均在5 7 5 ( 5 4 6 2 ) 岁的健康志愿者中抽取骨髓标本，其中有6 名男性志愿者，4 名女性。利用密度梯度离心与贴壁分离相结合的方法
6、分离纯化细胞，使用无菌注射器抽取1 0m L 髂骨骨髓后，快速注入装有肝素钠的无菌管内并摇匀，取等体积的F i c o l l 淋巴细胞分离液，将标本缓慢铺上，离心后中间的白膜层则是B M S C s细胞层，轻轻将其抽出，加入P B S 混匀，离心后弃去上清，加入培养基，分装到细胞培养瓶中，在培养箱中培养，第3d 后首次换液，根据培养液的颜色及细胞生长情况2 d 3 d 换液，定期观察细胞。利用胰酶消化传代，免疫化学染色鉴定原代细胞。取6 孔培养板若干，将2 代细胞传代接种到板上培养，当孔内的细胞铺满板孔8 0 左右时，通过每4 个样本一组将细胞随机分为实验组与对照组。培养基加入乙醇维持浓度在
7、O 0 9 m o l L 为实验组，正常培养的则是对照组。通过T r i z o l 法在使用乙醇干预的第l l d 提取R N A ，并且检验R N A 纯度和完整性。逆转录合成c D N A ，而后通过实时荧光定量P C R ( R T - q P C R ) 检测以及P C R 产物琼脂糖凝胶电泳，主要观察实验组与对照组细胞C G R P 受体、P 物质受体、P P A R - f f 、R u n x 2m R N A 表达。结果与结论：培养l l d 后，实验组降钙素基因相关肽受体、P 物质受体、R u n x 2m R N A 表达较对照组明显降低( P 3 0 中有1 6 例患
8、者手术效果差，最终行人工全髋关节置换术。有学者对早期的股骨头坏死的髓芯减压手术治疗采用了一些改良的方法岬】，在5 5例股骨头缺血坏死的患者的6 1 髋的手术中使用了髓芯减压术联合植骨；平均2年的随访期，根据H a r r i s 评分结果如下：手术后有3 1 髋的效果优，2 2 髋的术后效果良，6 髋的术后效果可，2 髋的术后效果为差。这种改良后的手术方式可以使股骨头内应力负荷减小，使股骨头中的内环境维持稳定，为股骨头内坏死组织的修复提供条件，从而有效减少骨坏死中股骨头的塌陷率。截骨术：多用于I IB I I I B 期，手术主要是将负重区的坏死骨替换成正常骨，从而改变股骨头的负重骨，手术能够
9、减缓股骨头的塌陷，但增加了下次人工髋关节置换的手术难度【6 9 1 有学者研究发现r 删，对比治疗股骨头坏死的多种截骨手术效果，对比行截骨手术中2 9 例患者采用旋转截骨术，1 3 例采用外翻截骨术，4 例采用内移截骨术，6 3 髋采用屈曲截骨术，7 - 3 年的平均随访的时间中，观察到采用旋转截骨术的患者术后并发症的发病率为5 5 ，发病率高于其它方式的截骨术，采用屈曲截骨术的患者术后疗效好于采用旋转截骨术的患者。观察发现，2 9 例采用旋转截骨术的患者5 年内2 1 例患者因效差而行人工全髋关节置换3 2酒精性股骨头坏死研究进展( 综述)术，6 3 例采用屈曲截骨术的患者1 7 例因效差而
10、行人工全髋关节置换术。植骨术：植骨术包括带血管骨移植和非血管的骨移植，主要是通过手术挖除坏死骨组织，植入新骨，为股骨头提供结构支持，防止塌陷。曾述强等学者研究发现1 7 ，对于1 0 例介于F i c a t I I I I 期的非创伤性O N F H 患者，行死骨刮除并且髂骨移植术，术后1 0 年的平均随访期，通过H a r r i s 疗效评分得出8 8 5 的优良率。J u d c t 等学者研究发现1 7 列，在对股骨头缺血坏死的患者采用血管吻合游离腓骨移植手术的6 0 例髋中，术后平均1 8 年的随访期，观察发现，M a r c u s 分期I I I I I 期的早期患者采用此术式
11、的术后效果比M a r c u s 分期V 期的晚期患者好，此术式的适应人群是股骨头的轮廓以及髋关节软骨面的损害情况小且小于4 0 岁的年轻患者。有学者研究发现【_ 7 3 J ，国外采用的带肌蒂的植骨手术如缝匠肌肌蒂的植骨术对臀部肌肉功能影响较大，而取带股方肌的骨柱对臀肌功能影响不大，而且骨的血运良好，可取骨量较大，8 2 例O N F H 的患者9 4 髋中采用骨方肌蒂骨柱植骨，其中9 4 髋中A R C O 分期I IB 期3 6 髋，I IC 期3 0 髋，I A 期2 8髋，3 2 年的平均随访年期，H a r r i s 疗效评分A R C OI IB 期患者术后疗效优良率为9 4
12、 4 ，l IC 期患者术后疗效优良率为9 3 3 ，I I I A 期患者术后疗效优良率为8 9 3 ，O N F H 患者总的术后疗效优良率为9 2 6 。人工髋关节置换术：多用于晚期股骨头坏死患者，如F i c a t - A r l e t 分期中I I I 期或期患者。关节置换的目的是缓解患者的疼痛症状，重建并恢复关节活动的功能。全髋置换的假体包括非骨水泥固定和骨水泥固定两种类型。随着手术技术的改进，人工材料以及假体设计的更新，关节置换的疗效与预后有显著的提高。X e n a k i s 等学者研究发现【7 4 J ，对2 8 例O N F H 患者3 6 髋采用非骨水泥型的全髋关节
13、置换术，术后对患者进行随访，随访年数平均为1 1 2 年，植入的关节假体的生存率是9 3 4 ，患者的活动度、活动能力、疼痛症状评分等都有了改善。有学者认为r 7 5 】，在O N F H 患者中，F i c a t e 分期为I I I 期的年轻且髋臼损伤较小的患者应该采用单纯的股骨头表面置换手术，认为这种手术方式使髋关节的骨床得到较好的保留，大大减少了二次翻修的难度，并且是能够延缓全髋关节置换手术的过度性手术治疗。总之，酒精性股骨头坏死的发病是一个复杂的过程，其中有多个因素参与了发病过程并在共同的作用下最后导致股坏死。其发病机制的研究已经有了更深层的发现。对于骨坏死的临床治疗主要依据患者的
14、发病分期分级，在不同的坏死分期中采用适当的治疗方式是治疗骨坏死减缓其发病进展的重要手段。3 3参考文献( 综述)【1 】【2 】2【3 】3【4 】【5 】5【6 】6【7 】【8 1 8【9 】9【1 0 】 1 1 】 1 2 】【1 3 】【1 4 】【1 5 1【1 6 】参考文献M a t s u oK ，H i r o h a t aT ，S u g i o k aY ，e ta 1 I n f l a e n c eo fa l c o h o li n t a k e ，c i g a r e t t e ，a n do c c u p a t i o n a ls t a t
15、 u so ni d i o p a t h i co s t e o n c r o s i so ft h ef e m o r a lh e a d J D i nO r t h o p ，1 9 8 8 ，2 3 4 ( 8 ) ：1 1 5 O r l iD ，J o v a n o v iS ，A n t i c e v iD ，e ta 1 F r e q u e n c yo fi d i o p a t h i ca s e p t i cn e c r o s i si nm e d i c a l l yt r e a t e da l c o h o l i c s J
16、 I n tO r t h o p ，1 9 9 0 ，1 4 ( 4 ) ：3 8 3 - 3 8 6 P a y n eJ W ，B e t t m a nJ R ，L a c eM E W h e nt i m ei sm o n e y ：D e c i s i o nb e h a v i o ru n d e ro p p o r t u n i t y - c o s tt i m ep r e s s u r e J N e wY o r k ：P l e n u mP r e s s ，1 9 9 3 ：1 3 1 孙洪江，张洪非创伤性股骨头缺血性坏死的I 临床病因分析【J 】中国矫形外科杂志，2 0 0 2 ，1 0 ( 1 1 ) ：1 0 6 6 - 1 0 6 8 W a n gY S ，W a n gY H Z h o n g h u aG u a n j i eW a i k eZ a z h i 2 0 1 1 ；5
