《COX2抑制剂影响人舌鳞癌Tca8113细胞血管生成素（Angs）蛋白的表达研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《COX2抑制剂影响人舌鳞癌Tca8113细胞血管生成素（Angs）蛋白的表达研究（34页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号 密级一19 0 3 1 3 6单位代码学号C O X - 2g l J 帛t J ：f l t J 影响人舌鳞癌T c a 8 113 细胞血管生成素( A n g s ) 蛋白的表达研究研究生：指导教师：申请学位门类级别：专业名称：研究方向：所在学院：1 0 1 1 42 0 0 3 1 1 6奎堕征武亟重到塾握区生亟日睦监废医堂旦筐摧医遁曲厦固丛墓随渔山西医型盔堂旦膛医堂瞳2 0 0 6 年5 月2 3 日山西医科大学砸：L 学位论文C O X - 2 抑制剂影响人舌鳞癌T c a 8 113 细胞血管生成素( A n g s ) 蛋白的表达研究捅晏目的：通过观察人舌鳞癌T c a
2、 8 1 1 3 细胞，前列腺素E - - 2 ( P G E 2 ) 分泌水平的改变，及血管生成素一1 ，2 ( A n g l ，A n 9 2 ) 蛋白表达的变化，探讨C o x 一2 及其选择性抑制剂N I M ，对人舌鳞癌生物学行为影响的可能机制。方法：体外培养人舌鳞癌T c a 8 1 1 3 细胞，加入不同浓度的N I M ( 0 ，2 5 ，5 0 ，1 0 0 ，2 0 0 1 t m o l L ) 进行干预，分别作用2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后，采用放射免疫法，检测细胞培养上清液中，人舌鳞癌T e a 8 1 1 3 细胞分泌的P G E 2 水平的改变，反
3、映N I M 对C o x 2 活性的影响，采用免疫细胞化学( S A B C ) 方法，检测人舌鳞癌T c a 8 1 1 3 细胞内A n g l 和A n 9 2 蛋白表达的变化情况。结果：不同浓度的N I M 干预人舌鳞癌T c a 8 1 1 3 细胞2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后，( 1 ) N I M 各处理组与对照组的五组之间及三个时间组P G E 2 水平分别进行比较，均数问差异显著，均有统计学意义( P 0 0 5 ；P G E 2 水平和A n 9 2 蛋白表达呈现正相关性，其相关系数r = 0 5 7 9 ，p O 0 5 ) a n dt i m e( P
4、 O 0 5 ) ，( 2 ) T h ev a r i a t i o n a lt e n d e n c yo fP G E 2a n dA n g lw a sn o tc o r r e l a t i o n ，r = 一O 3 6 4 ，P 0 0 5 ；T h ev a r i a t i o n a lt e n d e n c yo fP G E 2a n dA n 9 2w a sc o r r e l a t i o n ，t h ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n to f P G E 2a n dA n 9 2w a
5、sO 5 7 9 ，P 0 0 5 ) ：三个时间组的比较，均数之问差异不显著无统计学意义( F = O 9 7 3 ，P = 0 3 8 2 0 0 5 ) 。还不能认为A n g l 蛋白在人舌鳞癌T c a 8 1 1 3细胞中的表达受N 1 M 的抑制。二N I M X , - J 人舌鳞癌T e a 8 1 1 3 细胞A n 9 2 蛋白表达的影响：21光镜下A n 9 2 蛋白表达的染色图像：A n 9 2 蛋白在人舌鳞痛T c a 8 1 1 3 细胞中的表达，受N I M 作用抑制明显：A n 9 2 蛋白表达的比较，如N I M 2 0 0 b t m o l L 组( 见
6、图3 ) 及对照组( 见图4 ) 。在人舌鳞癌T e a 8 1 1 3 细出嚣黩辩大学颤士学氆论文胞中A n 9 2 蛋白表达在胞浆中，A n 9 2 蛋白阳性染色呈棕黄色颗粒物。2 2A n 9 2 蛋白表达的统计分析：N I M 处理舞及对照缰俸鼹不丽时阉A n 9 2 蛋白的表达结巢，A n 9 2 蛋白的表达量用显色反应的分析结槊平均光密艘值( A O D ) 的大小代表，以( i 士s ) 表示。裘三不同N I M 浓度作用不同时闻A n 9 2 蛋白的表达( A O D ) ，A O D 以( i s ) 表泳注；+ 表示N I M 不同浓度组与对照组的比较，相：P 0 0 5
7、，P G E 2 分泌水平与A n g l 蛋白表达无直线相关性。42P G E ：分泌水平与A n 9 2 蛋白表达的相关关系( 如图八) ：经P e a r s o n 直线相关性检验，在N I M 作用下，P G E 2 分泌水平与A n 9 2 蛋白表达的相关系数r = 0 5 7 9 ，p = 0 0 2 4 l m m 时，肿瘤血管内皮细胞己强表达A n 9 2 ，当肿瘤细胞出现坏死时，在坏死中央的肿瘤血管见A n 9 2强表达，但在肿瘤边缘区亦可见A n 9 2 均呈强表达A h m a d ”等应用A n 9 2e D N A 转染H T 2 9 的直肠癌细胞建立小鼠荷瘤模型，
8、发现A n 9 2 转染的肿瘤体积明显增大，血管密集，内皮细胞的增殖指数增加。S f i l i g o i ”等研究发现，A n 9 2 在乳腺癌的肿瘤细胞和内皮上均有表达，A n 9 2m R N A 的表达水平与淋巴结转移呈显著相关，并和肿瘤微血管密度密切相关。A n 9 2 的表达是肿瘤血管新生起始的强化因素，与肿瘤血管生成的数目、肿瘤的大小和肿瘤的侵袭转移密切相关。选择性C o x - 2 抑制剂N I M 对A n g l ，A n 9 2 蛋白表达的影响本研究选择尼美舒干l J ( n i m e s u l i d e ，N i m ) 作为干预药物，N I M 是国外开发的一
9、种甲磺酰苯胺类非甾类抗炎药( N S A I D s ) ，N I M 是第一个选择性环氧化酶一2 ( C O X 一2 ) 抑制剂。C o x 2抑制剂可显著抑制肿瘤组织的血管生成及血管生成因子的表达 2 3 1 。P i e h i u l e 呓4 1 的实验证实，低氧条件能诱导A n 9 2 的表达，但证明并- ：t l q 氐氧诱导因子1 ( H I F 1 ) 所致，同时发现C o x 2 的表达及其产物P G E 2 及P G l 2 都呈剂量依赖性增加，C o x 2 的抑制予及反意m R N A 链都能降低低氧条件时A n 9 2 表达，由此推断C o x 一2 能调控A n
10、 9 2 的表达。本次实验结果显示，使用不同浓度N I M 处理人舌鳞癌T c a 8 1 1 3 细胞，作用不同时间，A n 9 2 蛋白表达下调，并呈浓度和时间依赖性( 如图五) 。表明受选择性C o x 2 抑制荆N I M 作用，人舌鳞癌T c a 8 1 13 细胞C o x 一2 位点受到抑制，A n 9 2 蛋白表达下调，由此推钡J l C o x 一2 可以调控A n 9 2 蛋白的表达。此次实验结果与X 1 N G ”等的结果有类似之处。S a l e s ”等人通过W e s t e r n 定量结果显示，选择性C o x 一2 抑制剂N s 一3 9 8 可以抑带l J
11、b V G F 、V E G F 、A n 9 1 和A n 9 2 表达，也支持上述结果。X I E ”等人的实验证实塞来昔布( c e l e c o x i b ) 用于裸鼠，V E G F 表达的抑制率为4 0 6 ，移植瘤生长曲线低平，体积和质量较对照组均明显减少，抑瘤率为5 1 ，6 ，证实c e l e c o x i b 对肿瘤的生长有抑制作用。C o x 2 调控A n 9 2 的表达，可能是N I M 作用于C o x 2 位点，抑制其活性，通过C o x - 2 倚赖性的促血管生成机制起作用，抑制I f L 管生成因子的释放，降低A n 9 2 蛋白的表达。研究表明C o
12、 x 2 与肿痛血管生成密切相关，它对肿瘤血管生成的调控涉及多因素、多环节，并与多种向管生成因子存在复杂的相互作用机制。C o x 一2 在肿瘤细胞中高表达，许多良性癌前病变和恶性肿瘤中均有C o x 2 基因的扩增及其蛋白的高表达”。大量临床研究证实，在胃癌2 帅、结肠直肠癌、乳腺癌川、卵巢癌3 ”、非小细胞肺癌( N S C L C ) 1 3 3 1 、膀胱癌、胰腺癌1 、1 2 1 腔癌3 6 1 、头颈鳞癌n 7 1 等都存在C o x 一2 表达，且均存在与C o x 一2表达相关的V E G F 高表达, n 或肿瘤微血管密度( M V D ) 的增加及预后不良。D a v i
13、e s “”等山西医科大学顾= I ：学位论文对乳腺癌的研究中，免疫组化结果显示，C o x 一2 的表达与标记新生血管的C D 3 1 之间存在显著的直线相关关系，这就直接证明了C o x 2 的表达与血管生成之间的关系。C i a n c h i B ”等对3 l 例结肠直肠癌病人的外科手术切除标本及癌旁F 常粘膜的研究中，免疫组化显示C o x 2 ( P = 0 0 2 ) 和V E G F ( P = 0 0 0 2 ) 的表达都与微血管密度( M C D ) 显著相关，C o x 2 与V E G F 之间也存在显著的相关性( P = O 0 0 4 ) ；与正常对照组相比，C o
14、 x 2 与V E G F 的基因在肿瘤组织中呈现过表达；在转移的肿瘤中前列腺素E 一2 ( P G E 2 ) 的水平比未转移的肿瘤明显要高，验证了C o x 2 与肿瘤血管生成的相关性。本实验的免疫实验结果还显示，N I M 干预人舌鳞癌T c a 8 1 1 3 细胞，不同处理组与对照组比较，N I M 浓度对A n g l 蛋白表达影响不明显，没有统计学意义( P 0 0 5 ) ；不同作用时问比较，N I M 对A n g l 蛋白表达影响同样不明显，没有统计学意义( P 0 ，0 5 ) 。X I N G 2 5 等在人肺腺癌A 5 4 9 细胞实验中发现：N I M 干预后，A
15、5 4 9 细胞V E G F 及A n 9 2 基因表达明显下降，呈浓度倚赖性；而A n g l 表达在N I M 干预后无明显变化，结论类似于本实验。而S a l e s“”实验表明，选择性C o x 2 抑制剂N s 3 9 8 可以抑帝l J A n g l 蛋白表达，这不同于本次实验结果。选择性C o x 2 抑制剂导致的不同结果，是与所选不同药物有关，还是有其他原因，等待进一步的研究给以证实。选择眭C o x - 2 9 P $ 0 剂M 对P 6 E ：分泌水平的影响放射免疫检测P G E 2 分泌水平的实验结果显示，使用不同浓度N I M 处理人舌鳞T c a 8 1 1 3细
16、胞，作用不同时间，P G E 2 分泌受到抑制而减少，P G E 2 水平呈浓度和时问依赖性( 如图六) 。环氧台酶2 ( C o x 一2 ) 是催化花生四烯酸转化为前列腺素( P G s ) 的关键限速酶，选择性C o x 一2 抑制剂N I M 抑匍J P G E 2 分泌推；贝, U C o x 2 可调控P G E 2 的表达。本次实验结果与在其他细胞研究如人肝肿瘤细胞H e p G 2t 3 8 1 ，人肺腺癌A 5 4 9 细胞25 1 ，人胰腺癌细胞J F 3 0 5 9 1 等实验中P G E 2 水平的变化相一致。据此推N P G E 2 释放水平可以反映C o x 2 的活性变化情况。C o x 2 及其产物P G s 对于肿瘤内新生毛细血管生成及血管倚赖性实体肿瘤的生长和转移起了重要作用。王 4 0 , 4 1 1 等实验结果显示，随着C e l e b r e x 作用浓度
