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1、茶多酚治疗膜性肾小球肾炎机理的探讨中药药理与临床 1999 年第 5 期第 15 卷 实验研究作者：董 群 吴敏毓 曲卫敏 刘 辉 孙瑞元单位：董 群 吴敏毓 曲卫敏 刘 辉 皖南医学院 微生物学教研室；孙瑞元 药理学教研室 芜湖 关键词：关键词： 茶多酚；免疫功能；SOD；GSH-PX提提 要要 目的：目的：探讨茶多酚治疗肾炎的机理。方法：方法：小鼠灌胃茶多酚 7 天后测其免疫功能和抗氧化酶的活性。结果：结果：茶多酚可明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞及其因子 IL-1 的活性和 NO 的生成；抑制小鼠脾细胞产生抗体的能力和血清 CIC 的含量；抑制小鼠脾细胞增殖反应和总 T 细胞花环和 TH花环的形
2、成。茶多酚还可增强小鼠红细胞 SOD 和血中 GSH-PX 的活性，抑制血清中 LPO的生成。结论：结论：茶多酚抑制小鼠免疫功能、增强小鼠抗氧化酶的活性可能是其治疗肾炎的机理之一。StudyStudy ofof thethe MechanismMechanism ofof CuringCuring Anti-membraneAnti-membrane GlomerulonephritisGlomerulonephritis byby TeaTea PolyphenolPolyphenolDong Qun, Wu Minyu, Qu Weimin, Liu Hui, Sun Ruiyuan（De
3、partment of Microbiology,Wannan Medical College, Wuhu 241001）ObjectObject: To study the mechanism of curing anti-membrane glomerulonephritis by Tea Polyphenol (TP).MethodMethod: Given orally TP of different dosage to mice for 7 days, the mice immune function and enzyme activity correlating anti-oxyg
4、enation were detected.ResultResult: TP could decrease the activities of peritoneal M and IL-1, and the formation of nitric oxide (NO). TP could inhibit the antibody formation of spleen cell and the content of CIC in sera, and evidently decrease the percentage of the rosettes of T cell and TH cell, a
5、nd proliferative reaction of spleen cell. TP could increase the activities of SOD in RBC and GSH-PX in blood, decrease the content of LPO in sera.ConclusionConclusion: TP could inhibit immune function of mice and promote the enzyme activities of anti-oxygenation.KeyKey wordswords Tes Polyphenol;immu
6、ne function;SOD;GSH-PX已有报道茶多酚可治疗家兔 Masugi 肾炎1，本实验从单核细胞的免疫功能、抗氧化酶的活性两方面探讨了茶多酚治疗肾炎的机理。1 1 材料和方法材料和方法1.11.1 试验药物试验药物 茶多酚粉剂(含量99%)，浙江农业大学茶学系提供，溶于蒸馏水中灌胃。1.21.2 实验动物实验动物 昆明小鼠 812 周龄，雌雄随机，体重 212g，中国药科大学动物供应科供应。许可证号：苏动(质)95036。1.31.3 试剂试剂 RPMI 1640 培养粉为美国 Gibco Lab 产品，批号 14-4-97。MTT、硫代巴比妥酸(TBA)、四乙氧基丙烷、5，6-二
7、硫-对二硝基苯甲酸(DTNB)均为 Sigma 公司。Tris-NH4Cl 中的 Tris 购自华美生物工程公司，批号 830227。茶碱购自上海试剂二厂，批号830310。1.41.4 实验方法实验方法 小鼠随机分组后 ig 蒸馏水或药液 0.2ml/10g 连续 7 天后，次日上午眼眶取血，常规分离血清，另取腹腔液、脾备用。1.4.1 腹腔巨噬细胞(M)活性及分泌因子的测定 小鼠给药至第四天，腹腔注射 6%淀粉肉汤 1.5ml/只一次，再连续用药至第七天，无菌取腹腔液测 M 活性2及白介素1(IL-1)3和一氧化氮(NO)4的活性。1.4.2 免疫功能的测定 (1)小鼠脾细胞抗体生成能力采
8、用薛昭华等5方法，于413nm 处测 OD 值。(2)小鼠血清循环免疫复合物(CIC)含量的测定采用 PEG 沉淀法6，在450nm 处测 OD 值。(3)小鼠脾细胞增殖活性见文献7。(4)小鼠 T 细胞亚群用茶碱法。1.4.3 血中抗氧化酶活性和血清中过氧化脂质的含量测定 用邻苯三酚自氧化法测定小鼠红细胞 SOD 活性；用 DTNB 显色法测血中谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-PX)含量；用硫代巴比妥酸比色法测血清中 LPO 含量。2 2 结果结果2.12.1 茶多酚对小鼠腹腔茶多酚对小鼠腹腔 MM 活性的影响活性的影响 茶多酚可明显抑制小鼠腹腔 M 的活性和IL-1 的活性，各实验组间差别不显
9、著。中剂量与大剂量茶多酚可抑制 NO 的产生，见表 1。表表 1 1 茶多酚对小鼠腹腔巨噬细胞茶多酚对小鼠腹腔巨噬细胞(M)(M)的活性和介质的影响的活性和介质的影响 ( s)组 别只M 活性(OD570nm)IL-1（OD570nm）NO（molL）蒸馏水 100.7770.3290.3500.0409.6171.175茶多酚(小)130.4820.090*0.3000.023*9.1830.351茶多酚(中)80.3980.080*0.2900.038*6.6010.889*茶多酚(大)110.3290.066*0.2900.019*6.0110.656*地塞米松 140.3560.110
10、*0.2890.015*6.2410.523*与蒸馏水组相比 * P0.05, * P0.01；与地塞米松组相比 P0.01；茶多酚小、中、大剂量分别为 128mg/kg、255mg/kg、510mg/kg，下同 2.22.2 茶多酚对小鼠脾细胞产生茶多酚对小鼠脾细胞产生抗体能力和血清抗体能力和血清 CICCIC 含量的影响含量的影响 大剂量茶多酚可以明显抑制小鼠脾细胞产生抗体的能力，中剂量组小鼠血清 CIC 的含量低于蒸馏水组，见表 2。表表 2 2 茶多酚对小鼠脾细胞产生抗体的能力和血清茶多酚对小鼠脾细胞产生抗体的能力和血清 CICCIC 含量的影响含量的影响 ( s)组 别只QHS 法(
11、OD413nm)CIC（OD450nm）蒸馏水 100.2910.0450.4250.015茶多酚(小)130.2510.0480.4010.082茶多酚(中)80.2510.0420.3560.012*茶多酚(大)110.2100.055*0.3250.045*地塞米松 140.2230.061*0.3150.011*与蒸馏水相比 * P0.05, * P0.012.32.3 茶多酚对小鼠脾细胞茶多酚对小鼠脾细胞 ConAConA 增殖活性、总增殖活性、总T T 细胞花环率和细胞花环率和 T TH H花环率的影响花环率的影响 茶多酚可抑制小鼠脾细胞对 ConA 增殖活性，且随剂量增加抑制作用
12、增强。茶多酚也可抑制小鼠总 T 细胞花环形成和 TH花环的形成，见表 3。表表 3 3 茶多酚对小鼠脾细胞茶多酚对小鼠脾细胞 ConAConA 增殖活性、增殖活性、T T 细胞花环率和细胞花环率和 T TH H花环率的影响花环率的影响组 别只增殖活性(OD570nm)总 T 细胞花环率(%)TH细胞花环率(%)蒸馏水 90.3360.08926.302.8066.426.67茶多酚(小)130.2510.09619.002.08*59.2310.00茶多酚(中)80.1930.076*18.881.54*54.6510.41*茶多酚(大)110.1450.053*11.731.76*50.74
13、7.66*地塞米松 140.1570.072*14.502.80*46.428.38*与蒸馏水组相比 * P0.05, * P0.012.42.4 茶多酚对小鼠血中抗氧化酶和血清中过茶多酚对小鼠血中抗氧化酶和血清中过氧化脂质含量的影响氧化脂质含量的影响 茶多酚可增强小鼠血中 SOD 和 GSH-PX 的活性，降低小鼠血清中 LPO的含量，见表 4。表表 4 4 茶多酚对小鼠茶多酚对小鼠 SODSOD、GSH-PGSH-PX X活性和活性和 LPOLPO 含量的影响含量的影响 ( s)组 别只SOD(U/ml)GSH-PX(mol/L)LPO(mol/L)蒸馏水 9758742646217.26
14、2.53茶多酚(小)13745692864415.392.37*茶多酚(中)87828631323*13.451.86*茶多酚(大)1182592*34545*12.122.13*地塞米松 14798832973511.793.16*与蒸馏水组相比 * P0.05, * P0.01；与地塞米松组相比 P0.053 3 讨论讨论Masugi 肾炎模型的病理变化类似膜性肾小球肾炎。目前已知膜性肾小球肾炎的发生机理与抗体的不断形成、免疫复合物的局部沉积、细胞免疫功能障碍、T 细胞亚群的异常有关。本实验结果提示茶多酚有类似于地塞米松的作用，可抑制小鼠腹腔 M 的活性，抑制M 分泌的炎性介质 IL-1
15、和 NO 的生成。茶多酚抑制小鼠脾细胞产生抗体，使血清中抗原抗体复合物(CIC)减少，沉积到肾小球基底膜上的免疫复合物也会相应减少，病情减轻。茶多酚能抑制小鼠脾细胞的增殖，降低总 T 细胞花环、TH细胞花环的形成率。茶多酚还可增强 SOD 和 GSH-PX的活性，可保护细胞和细胞膜，缓解炎症。明显抑制 LPO 的生成，减少LPO 对细胞结构及功能的严重损害，有利于炎症的恢复。本实验的结果显示，茶多酚可通过抑制小鼠的免疫功能，增强小鼠血中抗氧化酶的活性来达到治疗肾炎的目的。参考文献参考文献1 桂常青，洪宗元，杨解人，等.茶多酚治疗家兔 Masugi 肾炎模型.中国药理学通报，1998；14(5)4672 陈哲生.噻唑蓝比色法用来研究人淋巴细胞和小鼠巨噬细胞的活性.上海免疫学杂志，1992；12(5)2693 杨贵贞，主编.免疫生物工程纲要与技术.长春：吉林科技出版社，19912014 丁传林，胡晓玲，马思才，等.小鼠腹腔巨噬细胞诱生一氧化氮的实验研究.上海免疫学杂志，1998；18(1)285 薛昭华，刘延兵，蔡昌学，等.中药“抗炎 6 号”注射液抗感染作用机理的实验研究.武汉医学院学报，1984；25(5)3446 沈玉清主编.免疫学和免疫检验学.北京：中国医药科技出版社，19893287 钱玉昆主编.实用免疫学新技术.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，199311
