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1、神经纤维在功能上是一个完整的整体。神经纤维柬的完整性是功能区重组的基础。D T I 非常突出的价值是可以提供个体化、特定神经纤维束的功能预后。例2 针刺左侧肢体运动相关的穴位右侧大脑半球包括额叶运动和感觉相关的功能区无激活，而在左侧大脑半球包括额叶运动功能区有散在的激活。根据我们以前报道的针刺脑功能成像结果，我们认为右侧大脑通过 内囊的传导纤维和弓状联络纤维以及投射纤维的广泛中断，导致左侧躯体所接受的针刺刺激不能够传递至大脑皮质。由于神经纤维的受累平面高，局限于大脑半球，而桥脑以下神经纤 维束未受累及，因此未交叉的神经纤维完好，左侧肢体的针刺刺激引起同侧大脑皮质功能区的激活。一方面进一步证实针
2、刺的神经作用机制，另一方面说明神经传导通路的完整性是针刺效应的神经作用机制的基础。D T I 和f M R I 联合应用在脑功能研究领域具有广阔的前景。兔V X 2 肿瘤介入治疗前后肿瘤血管生成的M S C T 灌注成像研究浙江大学医学院附属第一医院放射科( 3 1 0 0 0 3 )张景峰张敏鸣楼海燕近年来随着介人放射学的发展，介入治疗已成为恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分，但 是对其早期疗效的评价一直是影像学和肿瘤学领域关注的焦点。传统的影像学检查仅仅局限于病理解剖及形态学变化的观察，通常把治疗后肿瘤体积是否缩小作为治疗是否有效的重要 依据，这往往需要数周或数月，因此难以早期、准确地评价肿瘤
3、对治疗敏感与否而影响对迸一步治疗方法的选择。现代影像学的发展为早期评价肿瘤的治疗效果提供了可能。C T 灌注成像可以定量评价肿瘤血流灌注状态的改变从而能够早期、敏感地监测肿瘤对治疗的反应。目 前国内外均少见这方面的报道。本研究通过建立兔V X 2 软组织肿瘤模型并对其进行介入治疗，利用M S C T 灌注成像对介入治疗前后的肿瘤血管生成进行定量研究，初步探讨这一功能成像方 法对评价软组织肿瘤介入治疗后早期疗效的应用价值。材料与方法一、动物模型制作1 实验动物及麻醉方法：新西兰大白兔2 4 只，月龄2 3 个月，雌雄不限，体重1 6 1 8k g 。利用盐酸异丙嗪注射液( 5m g k g )
4、与盐酸氯胺酮注射液( 25m g k g ) 混合溶液肌肉注射麻醉。2 恶性软组织肿瘤模型制作：将带有V X 2 肿瘤的荷瘤兔肌注麻醉后，仰卧位固定，对肿 瘤部位皮肤进行剃毛、消毒，放置无菌洞巾，手术切开皮肤，剥离肿瘤，用双面刀片切取肿瘤边缘生长旺盛的淡红色鱼肉样组织，将其切成小于1m 的组织碎片后加人适量生理盐水制成肿瘤组织悬液备用。将2 4 只健康的新西兰大白兔肌注麻醉后，对其单侧大腿近段外侧皮肤 常规脱毛、消毒，用带有1 8 号注射针头的1m l 注射器抽吸配置好的V X 2 肿瘤组织悬液，然后分别刺入大腿股外侧肌内，各注入肿瘤组织悬液0 1m l 。模型兔即制作完毕。二、M S C T
5、 灌注扫描与图像后处理一侧大腿近段成功种植V X 2 肿瘤的2 4 只新西兰大白兔随机分成两组，介入组和对照组各1 2 只，于肿瘤种植后第1 4 天将模型兔肌注麻醉后仰卧位固定于事先制好的木板上，采用T O S H I B A1 6 层螺旋C T 扫描仪对兔大腿先行常规c T 轴位平扫( 8 0k V ，1 2 0m A ，矩阵5 1 2 5 1 2 ，视野1 6c mx1 6c m ，层厚、层间距5m m ) ，观察肿瘤生长情况。然后根据平扫选取肿瘤最大层面，应用M S C T 的“T o g g l i n g t a b l e ”技术进行灌注扫描( 8 0k V ，1 2 0m A ，
6、矩阵5 1 2 5 1 2 ，视野1 6c m x1 6c m ，电影采集0 5s 周，层厚5 姗) 。利用c T 自动高压注射器经兔耳缘静脉注入对比剂优维显后延迟5S 开始扫描，流率0 5m l s ，总剂量1 5m l k g ，总扫描时间5 0S 。将灌注原始图像传送至工作站，应用灌注软件中的体部肿瘤程序分析，计算并显示能够反映肿瘤组织血流灌注状态的伪彩灌注参数图像，包括血流量( b l o o df l o w ，B F ) 图、血容量( b l o o dv o l u m e ，B y ) 图、平均通过时间( m e a nt r a n s i tt i m e ，M T T )
7、 图和表面通透性( p e r m e a b i l i t yS H If a c e ，P S ) 图。在各灌注图像上用含4 0 一5 0 个像素的兴趣区( r e g i o no f i n t e r e s t ，R O I ) 测量肿瘤组织和邻近正常肌肉组织( 各选取5 个R O I ) 的相关灌注参数值。测量时应尽量避开邻近的血管和肿瘤中央的坏死组织。三、D S A 检查与介入治疗 将实验兔麻醉并仰卧位固定于事先制好的兔板上，对任意前腿腋窝部皮肤脱毛、消毒、放置无菌洞巾，分离并充分暴露腋动脉，利用s p 微导管在导丝引导下分别置于肿瘤供血动脉处行数字减影血管造影( d i g
8、 i t a ls u b t r a c ta n g i o g r a p h y ，D S A ) 检查。对比剂为优维显，注射流率0 5m l s ，总剂量3m l 。上述操作均在无菌条件下利用P H I L L I P s 血管造影机完成。然后将微导管超选择置于介入组肿瘤供血动脉开口处，注入明胶海绵颗粒适量，再次注射对比剂，直到肿瘤供血动脉大部或全部闭塞、肿瘤染色消失。邻近正常组织血供显示正常。四、病理和免疫组织化学检查第一次c T 灌注扫描后当日将各组模型兔随机处死6 只，取出肿瘤组织行病理学和免疫组织化学检查；然后于次日分别对介入组模型兔给予经导管动脉内灌注明胶海绵颗粒栓塞治疗。
9、 介入治疗后第3 天对各组剩余模型兔行第二次M S C T 灌注扫描，扫描结束处死所有模型兔，取出肿瘤组织行病理学和免疫组织化学检查。病理学采用H E 染色光镜下观察。肿瘤M V D 计数利用C D 34 单克隆抗体标记肿瘤微血管， 参照W e i d n e r 改良技术u 。，先在i 0 0 倍光学显微镜下浏览全片，寻找“热点”即肿瘤血管生成最密集区。然后在高倍视野( 2 0 0 倍) 下，每张切片随机观察5 个高倍视野的肿瘤血管， 计数每个视野的微血管数目，取平均值作为M V D 。任何染色的血管内皮细胞或血管内皮细胞簇，不论是否有血管腔，只要它们和邻近的微血管、肿瘤细胞及其他结缔组织不
10、相连，就可作为一个可计数的微血管。V E G F 表达水平定量检测采用H M I A S 一2 0 0 0 高清晰度彩色医学图文 分析系统对V E G F 平均光密度值进行测量。五、统计学分析采用S P S S l 2 0 统计软件包，对各组实验兔大腿V X 2 肿瘤组织第1 4 天、介人治疗后第3 天的B F 、B V 、M T T 、P S 值与M V D 值和V E G F 平均光密度值分别进行F 检验，检验水准取a = o 0 5 。同时分别对各c T 灌注参数值与肿瘤组织M V D 值和V E G F 平均光密度值进行P e a r s o n 相关分析。结果一、M S C T 平扫
11、与灌注表现肿瘤种植后第1 4 天，C T 平扫发现6 只模型兔瘤灶区域呈等密度改变，其余1 8 只均呈稍低密度改变，与邻近肌肉组织分界不清。经耳缘静脉注入对比剂后灌注扫描原始图像显示肿 瘤呈明显较均匀强化，其边界仍不清楚。灌注扫描发现2 4 只模型兔肿瘤均有异常灌注表现，其B F 、B V 、M T T 、P S 各组平均值与正常肌肉组织相比，均有极显著性差异，而各组模型兔肿 瘤的B F 、B V 、M T T 、P S 值之间无显著性差异。栓塞后第3 天，C T 平扫对照组肿瘤均呈异常稍低密度改变，增强后明显强化。栓塞组肿瘤均呈明显低密度改变且不均匀，增强后仅1 例出现肿瘤周边轻度强化，其余
12、均无强化。对 照组B F 、B V 、M T T 、P S 平均值与栓塞组相比，均有极显著性差异( 表1 ) 。表1 兔大腿V X 2 肿瘤介入治疗前后C T 灌注参数值测量( ? x s )1 9 5栓塞组种植后第1 4 天栓塞后第3 天二、D S A 表现兔V X 2 肿瘤为血供丰富的实体瘤，D S A 检查动脉期可见肿瘤外周有股动脉分出的滋养血管抵达肿瘤并绕行，呈“抱球状”改变。滋养血管迂曲不规则，其分支深入肿瘤内部。实质期肿瘤组织内网状、团片状染色勾画出肿瘤轮廓。栓塞后造影肿瘤染色大部或全部消失。三、病理学及免疫组化表现肿瘤种植后第1 4 天，大体标本肿瘤组织呈灰红色、鱼肉状，与周围肌
13、肉分界不清。切面观瘤体呈均质状，内部很少发生坏死。H E 染色肿瘤细胞呈巢状或弥漫状分布，胞核大而浓染，异型性明显，胞质量少。瘤巢问含有大量不成熟的毛细血管和丰富的纤维组织。C D 3 4 定位表 达于肿瘤血管内皮细胞上。经C D 3 4 单克隆抗体标记微血管后，免疫组织化学切片显示肿瘤微血管多而密集，呈大量棕黄色染色区域。V E G F 的表达主要定位于肿瘤细胞浆内，阳性表达呈 棕黄色细颗粒状，强阳性者部分细胞核也可见染色。介入治疗后第3 天，大体标本切面见肿瘤体积明显缩小，瘤组织呈灰黄色，与周围正常肌肉组织分界清楚，周边似有假包膜形成，瘤体中央可见大量黄白色凝固性坏死区。H E 染色示肿瘤
14、组织坏死明显，凝固性坏死区肿瘤细胞皱缩、体积缩小，细胞核固缩，部分细胞核溶 解、消失。肿瘤细胞V E G F 表达水平明显降低，仅部分胞浆内可见少量棕黄色细颗粒状物质。肿瘤微血管散在而稀少，M V D 值明显下降。四、M S C T 各灌注参数值与肿瘤M V D 值、V E G F 表达水平的相关性 利用S P S S l 2 。o 统计软件包对各组模型兔大腿V X 2 肿瘤介入治疗前后的M S C T 各灌注参数值与肿瘤M V D 值、V E G F 平均光密度值进行P e a r s o n 相关分析，结果表明：V X 2 肿瘤B F 、B v 、 P s 值与M V D 值、V E G
15、F 平均光密度值呈显著正相关；M T T 值与肿瘤M V D 值无明显相关性，而与V E G F 平均光密度值呈显著负相关( 表2 ) 。表2 兔V X 2 肿瘤介入治疗前后C T 灌注参数值与M V D 值、V E G F 表达水平的相关性过照组拴塞组B FB VP SM T TB FB VP SM T T注：表内数值为相关系数- t o ”P 0 0 1 ；+ P 0 0 5讨论肿瘤血管生成或新生是肿瘤生长与转移的先决条件，它可以反映肿瘤的生物学行为与特 点。一般而言，不论是原发性还是转移性恶性肿瘤，均是以新血管形成以及血管生成素活性增高为特征馏。因此，定量分析肿瘤血管生成以及肿瘤治疗前后
16、尤其是治疗后早期肿瘤血管 的变化，对于肿瘤治疗后早期反应的评价具有更重要的实际意义。目前定量评价肿瘤血管生成多采用肿瘤M V D 计数，但就临床应用来说，由于M V D 测定技术的有创性、对准确取材的依赖性且无法对肿瘤血管生成活性进行功能评价等缺点，它并不是一种理想的检查手段。因此，寻找一种无创、快捷、在活体上可重复实施、能显示肿瘤全貌的检查方法，用于评价肿瘤血 管生成、抗血管生成疗效和预测预后，具有临床实用意义。现代影像学的发展为肿瘤血管生成的评价提供了可能，目前可用于检测肿瘤m 管生成的功能成像技术包括S P E C T 、P E T 、吸人性氙气c T 扫描、M R 灌注成像以及新近发展的c T 灌注成像等。灌注成像技术代表着现代影像学从原来的主要反映解剖形态学改变向着既能反映宏观的大体形态、又能揭示微观的代谢和功能状态演变的这样一种发展态势。影像学技术的进步使c T 从单纯提供形态学信息逐渐发展到可以提供肿瘤的血流动力学信息，即c T 灌注成像。应用C T 灌注成像通过分析血液动力学参数的演变规律即可较为客观地评价肿
