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1、桂皮酸透皮吸收影响因素的研究桂皮酸透皮吸收影响因素的研究 王海艳*，季宇彬，李文兰，扈正婷，于莹莹 (1.哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究中心 哈尔滨 150076，2.国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心 哈尔滨 150076) 摘摘 要要 目的：目的：通过对桂皮酸在不同药物浓度、接收液、pH 值、温度、转速和促渗剂时透皮吸收效果的考察，筛选出桂皮酸透皮吸收效果最佳的条件。方法：方法：采用改良的 Franz 扩散池，以离体大鼠皮肤为透皮屏障，用高效液相色谱法测定各透皮吸收影响因素对桂皮酸的累积渗透量、透皮吸收速率、透皮时滞等体外透皮吸收动力学参数的影响。对氮酮(Azone)、丙二醇(P
2、G)、油酸(OA)、月桂酸甘油酯(GL)、乙醇(Ethanol)5 种透皮吸收促进剂单独应用和合用的促渗效果进行考察。结果：结果：在接收液为 10%乙醇-生理盐水，药物浓度为 200g/mL，37水浴恒温，pH=7，转速为 300r/min 时桂皮酸的透皮吸收效果最佳，以1%Azone+0.5%OA+10%GL+10%PG、0.5%OA+10%GL+10%PG、10%GL+10%PG 为复合促进剂时吸收速率显著提高，其中以 1%Azone+0.5%OA+10%GL+10%PG 促渗作用最强。结论：结论：通过考察各影响因素对桂皮酸透皮吸收的影响，为研究其透皮给药提供了参考依据。关键词：关键词：桂
3、皮酸；透皮吸收；促渗剂；HPLCStudy on influencing factors of percutaneous absorption of cinnamic acidWANG Hai-yan JI Yu-bin LI Wen-lan HU Zheng-ting YU Ying-Ying (Center of Research on Life Sciences and Environmental Sciences, Harbin University of Commerce, Harbin China 150076,；Engineering research center of nat
4、ural anticancer drugs, ministry of educatuion, Harbin China 150076)Abstract Objective: Studied the percutaneous absorption effects of cinnamic acid at different concentration, receiving solution, pH value,temperature, rotational speed, and penetration enhancer. Screened the optimum condition of perc
5、utaneous absorption. Methods: Improved Franz diffusion cell was adopted as the apparatus for in vitro rats skin permeation. Kinetic parameters of percutaneous absorption, such as permeability amount, penetration rate and percutaneous time-delay, were determinated by HPLC. Futher more, azone, propyle
6、ne glycol, oleic acid, glyceryl monolaurate and ethanol were investigated in percutaneous absorption effects for single or combined use. Results: The optimum condition is 10% 基金项目：基金项目：黑龙江省科技厅攻关项目(GC05C31601)；黑龙江省教育厅振兴老工业基地项目 （1151gzd25） ；黑龙江教育厅科学技术研究项目（10551089）作者简介：作者简介：王海艳(1981 年-)，女，黑龙江省肇州县，研究生，
7、研究方向为中药学， Tel:13845093054, E-mail: ethanol in saline as receiving solution, administration concentration is 200g/mL,37,pH value is 7, rotational speed is 300r/min. When (1%Azone,0.5%OA,10%GL and 10%PG), (0.5%OA,10%GL and 10%PG) and (10%GL and 10%PG) are chosed as compound penetration enhancer, penet
8、ration rate were increased significantly, and, the first one had the best effect. Conclusion: The research will provide experimental data for skin administration of cinnamic acid through investigated these influencing factors.Key words: cinnamic acid; percutaneous absorption; penetration enhancer; H
9、PLC透皮给药(TTS)又称经皮给药(TDS )，是指药物以一定的速率通过皮肤，经毛细血管吸收进入循环而产生药效的一类给药方式。具有其它给药方式所不具备的优点：它可避免肝脏首过效应，免去人体胃酸和酶对药物的破坏和降解；毒副反应小，出现不良反应时可随时中断治疗；接近于靶器官，药物以恒定的速率进入体内，病人易于接受1。正因为这些优点，透皮给药是目前药物研究的热点之一。桂皮酸(cinnamic acid)是中药肉桂的有效成分之一，也可来源于钻山风，枸杞根皮，苏合香，茴香叶等中草药，具有抗炎与抗真菌作用，且还具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞侵袭的作用2-3。肉桂有补火助阳，引火归源
10、，散寒止痛，活血通经等功效，在金匮要略中，以肉桂为主要药物组成的方近三十首，是中药外用治疗关节炎使用频率较高的一味中药。因此，我们对桂皮酸透皮吸收各影响因素进行了实验研究，旨在为所有含桂皮酸的药物经皮给药制剂提供依据。1 材料材料1.1 仪器岛津 HPLC（LC-10AT 泵，SPD-10A 检测器，微量进样器，N-2000 双通道色谱工作站） ；改良的 Franz 扩散池（上海锴凯科技贸易有限公司提供） ；恒温磁力搅拌器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司） ；pH 计（北京赛多利斯仪器系统有限公司） ；电子天平（美国奥好斯科技有限公司） 。1.2 药品桂皮酸：(中国药品生物制品检定所，批号 111
11、302-200504，纯度 98)1.3 试剂氮酮；油酸；1，2-丙二醇；乙醇；月桂酸甘油酯；双蒸水；甲醇（色谱纯） ；冰醋酸（色谱纯）以上化学试剂均为国产。1.4 动物Wistar 大鼠(22520)g 购自长春国家生物产业基地实验动物中心 合格证号SCXK-(吉)2003-0004。2 2 方法与结果方法与结果2.1 离体皮肤样品的制备与保存大鼠断颈处死后用电动剃须刀将其背部毛剃干净，立即剪取背部皮肤，将取下的皮肤平铺于干净的玻璃板上，角质层朝下，仔细剥离皮下脂肪层和结缔组织，用生理盐水反复冲洗干净，置于生理盐水中浸泡，于低温冰箱保存备用，实验前自然解冻，并用生理盐水浸泡 0.5h，于 1
12、 周内进行实验。每次实验前目视检查皮肤的完整性，不能有任何破损。2.2 桂皮酸色谱条件的建立色谱柱：岛津 C18（1504.6mm ，5m） ；流动相：1冰醋酸水溶液-甲醇（55:45） ；检测波长：285nm；流速：0.8mL/min。2.3 标准曲线绘制精密称取桂皮酸标准品 4mg，用甲醇定溶于 10mL 容量瓶中，配制成浓度为0.4mg/mL 的桂皮酸标准品溶液。再以适量的甲醇将其分别稀释为80、40、20、10、5、2.5、1.25g/mL 的标准品溶液。过 0.45m 微孔滤膜，分别进样 16L，以峰面积对浓度进行线性回归，求出桂皮酸标准曲线方程为：Y=5106X+11028 R=0
13、.9999， （n=3）表明桂皮酸在 0.011.28g/mL 范围内线性关系良好。2.4 方法学考察2.4.1 精密度实验 精密吸取桂皮酸标准品溶液（0.04 mg/mL） ，连续 5 次进样16L，测定峰面积，RSD 为 0.35%，表明精密度良好。2.4.2 回收率实验 取已知含量的样品溶液 6 份，分别加入桂皮酸标准品溶液（0.04mg/mL）0.5，0.5，1.0，1.0，1.5，1.5mL，在上述色谱条件下测定桂皮酸的含量，计算其平均回收率为 99.53%，RSD 为 1.07%（n=6） 。2.4.3 稳定性实验 将桂皮酸标准品配制成浓度为 0.04mg/mL 的水溶液，置于 3
14、7的水浴中加热，分别于 2，4，6，8，10，12，24h 取样，测定桂皮酸含量，以峰面积计算 RSD 为 0.83%，结果表明供试品溶液在 24h 内稳定。2.5 桂皮酸透皮吸收实验取出冷藏备用大鼠背部皮肤，自然解冻，将皮肤固定于改良 Franz 扩散池上(供给室和接收池直径为 2cm，面积为 3.14 cm2)，使角质层面向上，用弹簧夹固定，在供给池中加入 2mL 渗透促进剂溶液，接收池中加入 7mL 生理盐水作为接收液，夹层以 37水浴恒温，磁力搅拌子以 100r/min 的速度搅拌，分别于 2，4，6，8，10，12，24h 取出接收室中 1mL 接收液，立即补加等量的预温 37的新鲜
15、接收液。取出的接收液过0.45m 微孔滤膜，用高效液相色谱法测定桂皮酸含量。并按下列公式计算累积渗透量（Q） 。式中，Cn：第 n 个取样点测得的药物浓度(g/mL)；Ci：第 i 个取样点测得的药物浓度(g/mL)；A：渗透面积(cm2)；以累积渗透量 Q 对时间 t 进行线性回归所得方程即为 Higuchi 方程，根据直线方程可以求出稳态流量（P）和滞后时间（Tlag） ，渗透系数（Pm）等于药物的稳态流量除以供药池中药物溶液的浓度；增渗比(EF)的计算以对照组桂皮酸的稳态流量为参比而得。2.5.1 接收液对桂皮酸透皮吸收的影响 400g/mL 桂皮酸水溶液为供给液，37水浴恒温，100r
16、/min 的速度搅拌条件下，考察以生理盐水、10%、20%（v/v）乙醇-生理盐水为接收液时桂皮酸透皮吸收情况，讨论接收液对桂皮酸透皮吸收的影响。透皮速率常数和 Higuchi 方程见表 1。表表 1 1 不同接收液时桂皮酸透皮速率常数和不同接收液时桂皮酸透皮速率常数和 HiguchiHiguchi 方程（方程（s，n=5）x接收液 Higuchi方程 R P/ g/(cm2h) Tlag/h生理盐水 Q=0.0665t+0.3195 0.9442 0.06650.0189 4.803.52 10%乙醇-生理 Q=0.1101t+0.0889 0.9714 0.11010.0129 0.810.74 20%乙醇-生理 Q=0.0849t+0.1330 0.9675
