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1、辛中斜强大滓博士学位论文树突状细胞治疗膀胱肿瘤的实验研究申请人姓名：刘红耀指导教师：叶章群教授学科专业：泌尿外科研究方向：膀胱肿瘤论) 魄止时问：2 0 0 3 年4 月至2 0 0 5 年3 月同济医学院研究卑都蠢，、j = o g 饕5 驴j “芬+ “j华中科控大学同济医学院博一卜学位论义中文摘要第一部分：F 3 4 4 大鼠膀胱肿瘤模型的制备与检测目的：通过膀胱灌注N 甲基亚硝基脲( M N u ) 诱导F 3 4 4 大鼠膀胱肿瘤模型。方法：选取F 3 4 4 大鼠4 0 只，随机分为两组；第1 组膀胱灌注生理盐水，第2 组膀胱灌注M N U ，每2 周1 次，共s 次；于第1 2
2、周处死动物，取血清测干扰素( I F N y ) ，膀胱肿瘤组织测M H C 1 分子表达及病理观察。结果：M N U 组均出现膀胱肿瘤，对照组无1 例肿瘤；对照组血清I F N Y 为( 9 6 2 07 2 5 6 ) p m l ，实验组为( 0 8 9 8 0 3 2 3 ) p g m l ，两组相比有统计学意义( P肿瘤抗原组 未致敏D C 组 P B S 组；C D 3 + C D 8 + C D 2 8 + T 细胞在各组之间，除P B S组与未致敏D C 组之间无差别外。其余各组之旧1 均有差别，其中致敏D C 组血液中的C T L 明显高于其他3 组，即可以认为致敏D C
3、组免疫功能明显好于其他3组，且有统计学意义；肿瘤抗原组的C T L 的比例低于致敏D C 组，高于未致敏D C 组和P B S 组，可以认为该组的免疫功能介于他们之间，认为单纯肿瘤抗原皮下注射，有一定疗效。这是由于正常情况下皮下有A P C 存在，当肿瘤抗原进入机体后，抗原成分被A P C 摄取，并将其呈递给C T L ，从而诱导机体杀伤肿瘤细胞的作用；未致敏D C 组与P B S 组之间无差别，可以认为未致敏D C s 对免疫功能无影响。I F N Y 又名免疫干扰素( i m m u n o i n t e r f e r o n ) ，主要由活化的T 细胞( 包括T 1 1 0 、T H
4、 l 细胞和几乎所有的c D 8 + T 细胞) 和N K 细胞产生。与特异性受体( I F N -YR ) 结合，显示独特的功能。I F N Y 的潜在免疫学活性包括抑制肿瘤细胞的增殖1 1 1 】，促进C r L 的成熟及其活性：促进T n 0 细胞分化为T a t 细胞，并抑制T 2细胞的增生；上调肿瘤细胞M H C I 和M H C I I 的表达，增强N K 和巨噬细胞的活性，可通过干扰索诱导蛋白1 0 抑制血管的发生f 1 2 , 1 3 | 。我们的研究结果显示：血清I F N Y 在各组之间有差别，其中致敏D C 组高于其它3 组，且有显著性差异。1 L - 2 是由C D 4
5、 + T 细胞分泌的，其主要作用是诱导C T L 的成熟。实验结果显示除未致敏D C 组与肿瘤抗原组之间有差别外，其他各组之间均无差异。但从实验结果来看，各组均数之间差别太小，无实际意义，可以认为各组之间均无差异。其原因有待进一步研究。T c 细胞( 杀伤性T 细胞) 在体内是以非活化的前体细胞( p T c ) 形式存在，华中科技人学同济医学院博卜学位论文需要经抗原激活并在C D 4 * T H 细胞辅助下才能分化为效应T c 细胞。它的活化需要双信号：T C R 特异性识别靶细胞膜上的M H C I 类分子抗原肽复合物所产生的第一活化信号，以及把细胞表面的粘附分子对( 如C D 2 s B
6、 7 ) 相互作用所产生的协同刺激信号。此外还需要C D 4 + T 细胞分泌的1 L - 2 ，I F N Y 及I L - 1 2 等的作用。M e l i e f f l 4 等研究结果显示C T L 的诱导，扩增及维持需要C D 4 + T 细胞，D C 及C D R +细胞共同协作来完成。D C s 表达4 - 1 B B 配体( C D l 3 7 L ) 与并相互作用对于维持C T L 的数量是很重要的1 1 5 l 。C a n n o n s 1 6 1 等研究结果显示：C D 2 8 在原始T 细胞的分裂过程中起重要作用，而4 - 1 B B 4 1 B B L 对于维持C
7、 D 4 和C D s T 细胞的反应与加强细胞分裂和效应子作用起重要作用。K i my J 1 7 l 等研究认为存在C D 2 8 “ C T L ，同时认为4 - 1 B B ( C D l 3 7 ) 在记忆型C T L 分化过程中起重要作用。同时实验研究表明4 - 1 B B ( C D l 3 7 ) 阳性，而C D 2 8 阴性的C T L 也具有杀伤靶细胞的功能【1 4 。17 1 。4 - 1 B B ( C D l 3 7 ) 的发现使得必须对C T L 的定义进行重新界定，对C D 2 8 。C T L 的作用需要进一步研究。有关4 - 1 B B ( C D l ”)
8、的研究本次实验没有涉及，我们将在以后的工作中进一步完善。D C s 根据其表碰分子及其功能的不同分为未成熟D C s 与成熟D C s ，未成熟D C s 的功能是摄取抗原，并随着它的成熟，该功能逐渐减退，而刺激T 细胞的功能逐渐加强，并最终成熟。成熟D C s 的作用通过呈提特异性抗原刺激C D 4 + 辅助性T 细胞，同时刺激C D 8 + 细胞毒性T 细胞识别肿瘤特异性抗原，杀伤肿瘤细胞【1 8 l 。实体瘤中D C s 含量与肿瘤患者预后有关联I ”1 。在对多种肿瘤研究的结果显示，肿瘤组织中的D C s 含量有治疗学意义 2 0 - 2 3 1 。致敏D C s 通过刺激C D 4
9、+ T 细胞中的T H l 细胞，使其分泌I F N Y 的量增加，而1 F N y 又可以使T H O 细胞向T H l细胞转化，并抑制T H 2 细胞的增殖：同时又可以促进C T L 的成熟和上调肿瘤细胞的M H C I 的表达。肿瘤细胞作为C T L 细胞的靶细胞，其M H C 1 分子必须与C T L 的C D s + 分子相结合，才能发挥杀伤作用。该模型膀胱肿瘤M H C I 表达较高( 5 8 6 0 一9 3 8 0 ，前文已做详细解释) ，与M a s a t o s h i l 2 4 瞎报道一致，同时他还研究了M B T 2 ( m u r i n eb l a d d e
10、 rc a r c i n o m a 2 ) 的M H C I I 的表达几乎为零。总之，从该实验结果来看，可以认为经体外培养并经肿瘤细胞碎片致敏的树突状细胞，经皮下注射治疗大鼠膀胱肿瘤是有效的；但仍然存在许多问题，如乍中科技人学同济医学院博士学位论文D C s 致敏的擐佳方法，D C s 治疗的最佳剂量，D C s 治疗的最佳途径等，有待我们继续研究。4 结论1 ) 应用致敏D C s 经皮下注射治疗大鼠膀胱肿瘤可减低肿瘤的病理分期及病理分级：2 ) 单纯回输未致敏D C s 治疗大鼠膀胱肿瘤无效；单纯回输肿瘤抗原治疗大鼠膀胱肿瘤效果不佳。3 ) D C s 治疗肿瘤可能是通过呈递抗原并激
11、活C T L ，同时提高I F N Y 的表达等而起到免疫杀伤作用的。参考文献：1 G i r o l o m o n iGR i c c i a r d i - C a s t a g n o l iED e n d r i t i cc e l l sh o l dp r o m i s ef o ri m m u n o t h e r a p yJ 。I m m u n o lT o d a y1 9 9 7 ；1 8 ：1 0 2 1 0 42 Q i nZ ，S a l a z a r O n f r a yF C h a r oJ ，e ta lD o w n r e g u l
12、 a t i o no ft h ee x p r e s s i o na n df u n c t i o no ft h et r a n s p o r t e ra s s o c i a t e dw i t ha n t i g e np r o c e s s i n gi nm u r i n et u m o rc e l ll i n e se x p r e s s i n gI L - 1 0 J I m m u n o l1 9 9 7 ；1 5 9 ( 7 ) ：3 1 9 5 - 2 0 2 6 3 H a n e lE GX i a oZ ，W o n gK
13、K , e ta 1 An o v e li n t r a v e s i c a lt h e r a p yf o rs u p e r f i c i a lb l a d d e rc a n c e ri na no r t h o t o p i cm o d e l ：o n c o l y t i cr e o v i r u st h e r a p y 【J 】t h eJ o u r n a lo fU r o l o g y 2 0 0 4 ，1 7 2 ( 5 ) ：2 0 1 8 2 0 2 2 4 C h a n gC A ，T a iK F , R o f f
14、 l e rS ，e ta 1 T h ei m m u n i z a t i o ns i t eo fc y t o k i n e - s e c r e t i n gt u m o rc e l lv a c c i n e si n f l u e n c e st h et r a f f i c k i n go ft u m o r - s p e c i f i cTl y m p h o c y t e sa n da n t i t u m o re f f i c a c ya g a i n s tr e g i o n a lt u m o r s 【J 】JI
15、 m m u n o l2 0 0 4 ，1 7 3 ( 1 0 ) ：6 0 2 5 6 0 3 2 5 E s u m iT ，l n a b aM ，I c h i o k aN ，e ta 1 S u c c e s s f u la l l o g e n e i cl e gt r a n s p l a n t a t i o ni nr a t si nc o n j u n c t i o nw i t hi n t r a - b o n em a r r o wi n j e c t i o no fd o n o rb o n em a r r o wc e l l s
16、 J 】T r a n s p l a n t a t i o n2 0 0 3 ，7 6 ( 1 1 ) ：1 5 4 3 - 1 5 4 8 6 Y a n gT W i t h a mT F , V i l l aLe la 1 G l i o m a a s s o c i a t e dh y a l u r o n a ni n d u c e s华中科技人学同济医学院博士学位论文a p o p t o s i si nd e n d r i t i cc e l l sv i ai n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s e ：i m p l i c a t i o n sf o rt h eu s eo fd e n d r i t i cc e l l sf o rt h e r a p yo fg l i o m a s 【J 】C a n c e rR
