《Cap43在肺癌血清中的表达及干扰mTOR信号途径调控Cap43基因在肺癌中表达机制的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Cap43在肺癌血清中的表达及干扰mTOR信号途径调控Cap43基因在肺癌中表达机制的研究（77页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、争爹中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：王兰兰垒日期：中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 ，本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后
2、，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。，论文作者签名：至耋苎指导教师签名：舀三丝日期：麴! 芏型! 蟹删川l l f I I fl l l l f T l l l l l f l l T I T r f l f l l l r rr l f l Y 2 0 9 2 0 4 6 nu H I目录一、摘要中文论著摘要l英文论著摘要6二、英文缩略语1 3三、论文
3、IBIO00 1 4论文一1 4前言2 0月U 舌Z U材料与方法2 0实验结果2 2讨论0OO OQQ 2 9结论3 0论文二3 l前言OOglO IOQ ImO IOO OO OO O0O 3 1日U 百3 l材料与方法3 2实验结果3 6讨论3 9结论4 1论文三4 2前。言4 2刖吾4 Z材料与方法4 2实验结果4 7讨论OB ”gO O O00 5 3结论5 5四、本研究创新性的自我评价5 6五、参考文献5 7六、附录综j 苤? 6 3在学期间科研成绩7 2致谢7 3个人简介7 4中文论著摘要C a p 4 3 在肺癌血清中的表达及干扰m T O R 信号途径调控C a p 4 3
4、基因在肺癌中表达机制的研究目的钙激活蛋白4 3 ( c a l c i u ma c t i v a t e dp r o t e i n4 3 ，C a p 4 3 ) 基因又名N - m y c 下游调控基因一l ( N - m y ed o w n s t r e a mr a g u g l a t e dg e n e1 , N D R G l ) ，是美国纽约大学M a xC o s tA 研究组Z h o uD 与S a l n i k o wK 于1 9 9 8 年在研究镍化合物致癌机理中发现的人类新基因，其m R N A 大小为3 0 0 0 b p ，编码3 9 4 个氨基
5、酸残基，相对分子质量为4 3 0 0 0 。C a p 4 3 基因，由镍化合物特异性诱导，其蛋白表达于胞浆，具有镍特异性结合位点片断。C a p 4 3 基因表达水平的高低与镍化合物作用的时间及作用剂量的强度有时问剂量上的依赖性。C a p 4 3 基因在镍化合物所诱导的肺癌细胞系中转录、表达水平超过正常细胞3 0 倍，其m R N A 非常稳定，并且为肺癌发生、发展的早期事件之一；C a p 4 3 蛋白在肺癌细胞或组织中呈高度稳定表达，而在正常细胞或组织中不表达或呈极低表达。P 1 3 K A k t m T O R 是与细胞增殖和细胞凋亡关系最密切的信号传导通路之一，在肿瘤发生、发展中
6、发挥重要作用。干扰P 1 3 K A k t m T O R 信号传导途径可以影响肿瘤细胞的转移和浸润，这一途径中的任一关键分子都可以作为潜在的治疗靶点。P 1 3 K ( 磷脂酰肌醇3 羟基激酶p h o - p h m i d y l i n o s i t o l3k i n a s e ) 是一个酯酶，其上游存在着R T K s ( 受体酪氨酸激酶，r e c e p t o rt y r o s i n ek i n a g e ) R a s ( 大鼠肉瘤，r a ts a r c o m a ，原癌基因C r a s 的表达产物) 信号通路，当细胞受生长因子等刺激因子刺激后，细胞
7、内P 1 3 K 活化，进而磷酸化其底物P I P 2 ( 3 ，4 二磷酸磷脂酰肌醇，p h o s p h a t id y l i n o s i t o l 一3 ，4 一b i p h o s p h a t e ) ，使其转化为P I P 3 ( 3 ，4 ，5 三磷酸磷脂酰肌醇，p h o s p h a t i - d y l i n o s i t l o3 , 4 ，5 一t r i s p h o s p h a t e ) ，并可活化下游A k t 。A k t ( 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶，p r o t e i n s e r i n e t h r e o n i n
8、 e ) ，又称P K B ( 蛋白激酶B ，p r o t e i nk i n a s eB ) ，通过血小板白细胞C 激酶同源区和P I P 3 结合，并通过P D K I 、P D K 2 ( 磷脂酰肌1醇依赖性蛋白激酶，p h o s p h o i n o s i t i d e D e p e n d e n t p r o t e i nk i n a s e , P D K ) 使第3 0 8 位上的苏氨酸位点( n 3 0 8 ) 和第4 7 3 位上的丝氨酸位点( S e r 4 7 3 ) 磷酸化而被激活。活化的P D K A k t 可能是通过T S C l T S
9、C 2 复合物( t u b e r o u ss c l e r o s i sc o m p l e x ，T S C )进一步激活其下游分子m T O R 。m T O R ( 哺乳动物雷帕霉素靶向基因，m a m m a l i a nt a r g e to fr a p a m y c i n ) 又称F R A P ( F K 5 0 6 - b i n d i n gp r o t d n12a n dr a p a m y c i na s s o c i a t e d p r o t e i n ) ，是一种不典型的丝氨酸苏氨酸激酶，由于其羧基末端与P 1 3 K催化区高
10、度同源，m T O R 被认为是P 1 3 K 相关的蛋白激酶家族成员。m T O R 可随后磷酸化它的两个下游分子，即翻译抑制分子e l F 4 E ( 真核翻译起始因子4 E ，e u k a r y o t i ct r a n s l a t i o ni n i t i a t i o nf a c t o r4 E ) 结合蛋白1 ( 4 E B P l ) 和p 7 0 S 6 K 磷酸化后激活其功能，同样促进蛋白质的合成。因此，P 1 3 K A k t m T o R 被认为是蛋白质合成的主要信号调节通路，参与细胞增殖、分化、迁移等的调节。亦有研究结果显示，P 1 3 列A
11、k T O R 信号传导通路可能参与对H I F 1 ( 缺氧诱导因子，h y p o x i ai n d u c i b l ef a c t o r 1 ) 表达和活性的调控，但在不同的细胞类型以及不同的实验条件下又存在一定的差异。如果抑制m T O R 的功能，理论上应该消除P 1 3 K A k t 通路介导的增殖信号，使细胞周期阻滞，抑制肿瘤生长：针对镍特异诱导C a p 4 3 高表中H I F 1 所起的作用，如果抑制r o T O R 的功能，将使H I F 1 表达下降，因而C a p 4 3表达也应下降或极低表达。R N A 干扰( R N Ai n t e r f e
12、r e n c e ，R N A i ) 也称转录后基因静默( p o s tt r a n s c r i p t i o n a lg e n es i l e n c i n g P T G S ) ，是由双链R N A 诱导的、能在细胞内有效地抑制有互补序列内源性基因的现象。它主要通过2 1 2 3 n t 的双链或发夹状R N A 与特异性m R N A 的结合导致靶基因的降解，进而导致目的蛋白表达下调。目前在研究哺乳动物细胞的基因功能方面，所产生R N A i 效应主要应用两条途径：一是通过体外转录或化学合成小分子干扰R N A ( s m a l li n t e r f e r
13、 e n c eR N A ，s i R N A ) 介导R N A i 作用；二是通过短发夹式R N A ( s h o r th a i r p i nR N A ，s h R N A ) 表达载体转染细胞后所表达的s h R N A 诱导R N A i 作用。化学合成的s i R N A 抑制作用时间短，成本昂贵，并且易被R N A 酶污染降解；而s h R N A 表达载体转染细胞后所表达s h R N A 成本较低，可在细胞内R N A 酶的作用下被切割成与体外合成的s i R N A 相同的序列与结构，诱导R N A i 。同时，由于它可自身复制，所以它可以稳定持续地表达，使R N A i 作用2时间更长、更稳定。慢病毒载体是一种复制缺陷型逆转录病毒载体，用慢病毒载体介导R N A i 作用持久，并可以扩大载体感染细胞的范围，因此近年来慢病毒载体作为基因治疗载体被广泛应用。显然，用s h R N A 技术敲低r o T O R 的表达，比用对m T O R 有较强特异性抑制作用的R a p a m y c i n 、C C I 7 7 9 和R A D 0 0 1 等药物抑制m T O R 的表达更有安全性和科研意
