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1、奶牛隐性乳房炎病原菌的分离与耐药性分析陈德，张玲妮，刘玉华1 5 1溺铝飑瞧乳房爨巍原智均 势宿萄蔚窗螳菏折陈德，张玲妮，刘玉华( 青岛市畜牧兽医学会；胶南市畜牧服务中m ，青岛2 6 6 4 0 0 )摘要：从我市3 个奶牛场采集1 0 4 份隐性乳房炎乳样，经分离纯化，鉴定出9 3 株细茵，葡萄球菌、链球菌、肪杆菌是主要致病茵。选取8 株脯杆茵、1 0 株链球菌和1 6 椿葡萄球茼进行了药敏试验和溶血性试验。结果表明，3 种主要细茵对多种抗生素产生了耐药性。关键谰：隐性乳房爽 主要致病茼 耐药性 溶血性奶牛乳房炎是奶牛的一种常见性疾病，其一般可分为临床型乳房炎和隐性乳房炎两种类型。隐性乳房
2、炎由于无明显的l 临床症状，不易觉察，可在牛群中普遍流行“1 “，给奶牛业造成严重损失。因此，奶牛隐性乳房炎的防治具有重要意义。奶牛隐性乳房炎病因复杂，但致病菌的存在是引起乳房炎症的主要因素。因此，对隐性乳房炎致病菌的分析是防治奶牛隐性乳房炎的重要步骤。l 材料与方法1 1隐性乳房炎的检测从3 个奶牛场选取无临床乳房炎的奶牛，用S M T 法( 上海乳房炎检测法) 检测奶牛隐性乳房炎。1 2 奶样收集对患有隐性乳房炎奶牛的奶头，常规挤奶消毒后，再用7 0 酒精棉球消毒乳头和挤奶人员手指。每乳头废弃头3 把奶后，收集5m l1 0m l 奶于经高压灭菌的1 0m l塑料离心管中，低温运送至实验室
3、。3 次共采集1 0 4 份乳样。l - 3 病原茵的分离培养乳样摇匀后，每份乳样取0 0 5m 1 分别接种于麦康凯平板和7 兔鲜血平板，3 7 培养2 4h 4 8h ，根据菌落形态作纯化培养。每平板内不同形态的菌落超过三种以上的视乳样受污染。同一形态菌落超过1 0 0c f u m l 的进行纯化培养( d u 为菌落形成单位) 。1 4 痛原茵的鉴定纯化培养物做革兰氏染色、镜检，根据不同的形态特征确定鉴定的生化指标。革兰氏阳性、成串聚集的球状菌，按葡萄球菌鉴定，检测触酶、凝固酶，用葡萄球菌属细菌生化鉴定管做初步生化鉴定；链状排列的革兰氏阳性球菌，按链球属细菌鉴定，检测触酶，用七叶苷、水
4、杨苷、乳糖、血清菊糖、棉子糖、甘露醇、山梨醇、马尿酸盐、p H9 6 肉汤、4 0 胆汁肉汤生化鉴定管进行生化鉴定；革兰氏阴性杆菌，按肠杆菌鉴定，用肠杆菌科细菌生化常规鉴定管鉴定( 上述所用生化鉴定管均为杭州天和微生物试剂有限公司产品) 。其他细菌，依形态按文献 3 ，4 做一般鉴定。1 5 病原茼的药敏试验从3 个奶牛场分离的细菌中，选8 株肠杆菌、1 0 株链球菌、1 6 株葡萄球菌，采用K B ( 琼脂扩散敏感试验) 法，按文献 5 操作。链球菌用M H ( 水解酪蛋白) 琼脂加5 脱纤维绵羊血。革兰氏阳性细菌的药敏片：头孢唑啉、头孢他啶、氟哌酸、链霉素、头孢哌酮、万古霉素、头孢三嗪、复
5、方新诺明、青霉索、氯霉素、红霉素；革兰氏阴性细菌的药敏片：链霉素、复方新诺明、头孢三嗪、红霉素、呋哺妥因、四环素、氨苄青霉素、庆大霉素、卡那霉素、氟嗪酸、氟哌酸、万古霉素( 以上药敏片均购于杭州天和微生物试剂有限公司) 。试验结果依据产品推荐标准判定。 1 6 溶血性试验参照参考文献 6 。1 6 1 平扳检测将各菌株分别在5 绵羊鲜血平板画井字状线，3 7 培养2 4h4 8h 后观察结果。1 6 2 接触溶血细菌接种于T H B ( 一种细菌培养基) ，3 7 。C 培养1 8h ，取2m l 与等体积2 绵羊红细胞混合。3 7 作用1h 后，20 0 0g1 0r a i n 沉淀红1
6、5 2以人为本和谐发展青岛市第四届学术年会论文集细胞，取上清，60 0 0g 离心1 0m i n沉淀细菌，上清5 4 0k m 处测其吸光 值。未接种细菌的T H B 与2 绵羊红细胞混合作空白对照。2 结果2 1 病原茵的分离鉴定收集的1 0 4 份乳样中，9 5 份分离出细菌。除9 份样品未分离出细菌外，另有1 0 份乳样分离出一种在7 兔鲜血平板呈7 溶血的小圆隆起粗糙菌落，革兰氏染色阳性，生化鉴定结果均呈阴性。鉴定的9 3 株细菌中( 见表1 ) ，葡萄球菌占5 7 ，其中金黄色葡萄球菌1 4 株、凝固酶阴性葡萄球菌3 9 株 分离出2 2 株链球菌、1 3 株肠杆菌。青霉素敏感，对
7、链霉素、复方新诺明、红霉素产生较强的耐药性；肠杆菌对氟哌酸、氟嗪酸、卡那霉素敏感，对复方新诺明、红霉素、氨苄青霉素、古霉素、四环素、链霉素产生较强的耐药性。2 3 溶血性试验实验的8 株肠杆菌、1 0 株链球菌和1 6 株葡萄球菌，平板溶血与接触溶血的结果相差较大( 见表2 ) ，平板法检测细菌的溶血性表现更为灵敏。肠杆菌大多不溶血；链球菌即使是溶血的菌株，其溶血能力也很弱；葡萄球菌大多数菌株溶血，其中的1 4 株金黄色葡萄球菌都呈现较强的溶血活性。裹2 纲菌的溶血性和细胞表1 分离鉴定出的9 3 株细菌单位。株毒性试验结果单位：株2 2 药敏试验从3 个奶牛场分离的细菌耐药性相近，葡萄球菌对
8、先锋v 、氟哌酸、菌必治、氯霉紊敏感，而对复方新诺明、青霉素、氨苄青霉素产生较强的耐药性；链球菌对先锋v 、复达欣、先锋必、氯霉素、万古霉素、氨苄3 讨论奶牛乳房炎致病菌可分为接触 传染性致病菌和环境性致病菌”“。接触传染性病原菌包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌等，而环境性病原菌种类众多，常见的主要有凝固酶阴性葡萄球菌、乳房链球菌和肠杆菌等。本次分离的9 3 株细菌中，环境性病原菌多达5 9 株，其中凝固酶阴性葡萄球菌就有3 9 株。这表明，在3 个奶牛场中，环境性病原菌已成为引致隐性乳房炎的主要病原。史密斯( S m i t h ) 等认为”- ，采取有效控制接触性病原的措施对环境
9、性病原菌没有多大作用，控制环境性乳房炎应减少乳头与环境性病原的接触，提高奶牛对乳腺内感染的抵抗力。牛床垫料、粪尿、栏中的湿地或泥浆、奶牛活动场，或还有牧草，都有大量的环境性病原菌存在。保持环境的清洁、通风、于燥，可减少环境性病原生存与传染机会。提供适宜的生活环境和含有丰富的V e 和s e 的全价饲料，减少乳头损伤，都可增强奶牛对病原菌的抵抗力。病原菌对多种抗生素产生了耐药性，这可能与奶牛抗生素使用频繁有关。应加强奶牛场药物使用管理，使用多种不同成分药物，增多中成药物的使用，防止细菌产生耐药性。参考文献： 1 储明星奶牛隐性乳房炎的危害及其发生规律与防治 J 中国奶牛，1 9 9 9 ，( 4
10、 ) ：5 5 5 6潘虎t 刘纯传，张礼华等我国部分地区奶牛乳房提的病因及发病情况调查J 中国兽医科技，1 9 9 6 ，2 6 ( 3 ) ：1 6 - -1 7 陆承平兽医微生物 M 北京：中国农业出版杜9 0 0 i东秀珠常见细菌系统鉴定手册 M 北京：科技出版社，2 0 0 1王秀茹主编预防医学微生物学及检验技术E M 北京：人民卫生出版社，2 0 0 2高大庆，黄锡全，陆呈平等避缓爱德华菌溶血特性 J 中国人兽共患病杂志，2 0 0 0 ，1 6 ( 4 0 ) 5 3 5 5郝士海现代细菌学培养基和生化试验手册 M 中国科技出版社，1 9 9 2 F o xL K ，G a yJ
11、 M C o m a 断o t i s 丑s t t i s J V e t e r i n a r yC l i n i c so fN o r t hA m e r i c a - F o o dA n i m a lP r a c t i c e ，1 9 9 3 ，9 ( 3 ) ：4 7 54 8 7S m i t hK L ，H o g a nJ S E n v i r o m e n t a m a s t i t i s J V e t e r i n a r yC l i n i c so fN o r t hA m e r i c a F o o dA n l m a lP r a c t i c e ，1 9 9 9 ，9 ( 9 ) ：4 8 9 4 9 8
