PCRPCR 设计引物时酶切位点的保护设计引物时酶切位点的保护切割率切割率% 酶酶寡核苷酸序列寡核苷酸序列 2 hr20 hrAcc IGGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG 0 0 00 0 0Afl IIICACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG0 >90 >900 >90 >90Asc IGGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA>90 >90 >90>90 >90 >90Ava ICCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA50 >90 >90>90 >90 >90BamH ICGGATCCG CGGGATCCCG CGCGGATCCGCG10 >90 >9025 >90 >90Bgl IICAGATCTG GAAGATCTTC GGAAGATCTTCC0 75 250 >90 >90BssH IIGGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA0 0 500 0 >90BstE IIGGGT(A/T)ACCC010BstX IAACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT0 25 250 50 >90Cla ICATCGATG GATCGATC CCATCGATGG CCCATCGATGGG0 0 >90 500 0 >90 50EcoR IGGAATTCC CGGAATTCCG >90 >90 >90 >90 CCGGAATTCCGG>90>90Hae IIIGGGGCCCC AGCGGCCGCT TTGCGGCCGCAA>90 >90 >90>90 >90 >90Hind IIICAAGCTTG CCAAGCTTGG CCCAAGCTTGGG0 0 100 0 75Kpn IGGGTACCC GGGGTACCCC CGGGGTACCCCG0 >90 >900 >90 >90Mlu IGACGCGTC CGACGCGTCG0 250 50Nco ICCCATGGG CATGCCATGGCATG0 500 75Nde ICCATATGG CCCATATGGG CGCCATATGGCG GGGTTTCATATGAAACCC GGAATTCCATATGGAATTCC GGGAATTCCATATGGAATTCCC0 0 0 0 75 750 0 0 0 >90 >90Nhe IGGCTAGCC CGGCTAGCCG CTAGCTAGCTAG0 10 100 25 50Not ITTGCGGCCGCAA ATTTGCGGCCGCTTTA AAATATGCGGCCGCTATAAA ATAAGAATGCGGCCGCTAAACTAT AAGGAAAAAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA0 10 10 25 250 10 10 90 >90Nsi ITGCATGCATGCA CCAATGCATTGGTTCTGCAGTT10 >90>90 >90Pac ITTAATTAA GTTAATTAAC CCTTAATTAAGG0 0 00 25 >90Pme IGTTTAAAC GGTTTAAACC GGGTTTAAACCC 0 0 0 0 25 50 AGCTTTGTTTAAACGGCGCGCCGG75>90Pst IGCTGCAGC TGCACTGCAGTGCA AACTGCAGAACCAATGCATTGG AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT0 10 >90 >90 00 10 >90 >90 0Pvu ICCGATCGG ATCGATCGAT TCGCGATCGCGA0 10 00 25 10Sac ICGAGCTCG1010Sac IIGCCGCGGC TCCCCGCGGGGA0 500 >90Sal IGTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC GCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCGG ACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCGGAA0 10 100 50 75Sca IGAGTACTC AAAAGTACTTTT10 7525 75Sma ICCCGGG CCCCGGGG CCCCCGGGGG TCCCCCGGGGGA0 0 10 >9010 10 50 >90Spe IGACTAGTC GGACTAGTCC CGGACTAGTCCG CTAGACTAGTCTAG10 10 0 0>90 >90 50 50Sph IGGCATGCC CATGCATGCATG ACATGCATGCATGT0 0 100 25 50Stu IAAGGCCTT GAAGGCCTTC AAAAGGCCTTTT>90 >90 >90>90 >90 >90Xba ICTCTAGAG GCTCTAGAGC TGCTCTAGAGCA CTAGTCTAGACTAG0 >90 75 750 >90 >90 >90Xho ICCTCGAGG CCCTCGAGGG CCGCTCGAGCGG0 10 100 25 75Xma ICCCCGGGG CCCCCGGGGG CCCCCCGGGGGG TCCCCCCGGGGGGA0 25 50 >900 75 >90 >90注释：注释：1 1．如．如果要加在序列的果要加在序列的 5 5’’端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的 5 5’’端加端加上相应的碱基（黑色），相同如果要在上相应的碱基（黑色），相同如果要在 3 3’’端加保护碱基，就在酶切位点识端加保护碱基，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的别碱基序列（红色）的 3 3’’端加上相应的碱基（黑色）。
端加上相应的碱基（黑色）2 2．切割率：正确识别并酶切的效率．切割率：正确识别并酶切的效率3 3加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基。