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1、1 五环医院操作规程 WH-MY-007乙型肝炎病毒表面抗体测定乙型肝炎病毒表面抗体测定五环医院检验科操作规程文件号：WH-MY-007版本：第 1 版 共 3 页2009 年 3 月 1 日起实施本规程每2年复审一次复审日期：2009 年 2 月 27 日复审人：雷凤珠规程编写者：王莉红审批者：王金成批准日期：2009年2月28日检验科主任：雷凤珠1 1、检验目的：乙肝表面抗体测定、检验目的：乙肝表面抗体测定2 2、检测原理、检测原理：本试剂在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗原(HbsAg), 配以酶标抗体（HBsAg-HRP）及 TMB 显色剂等其他试剂，采用双抗体夹心法原理检测人血清(或血浆
2、)中的乙肝表面抗体（HBsAb）.3 3、 试剂和仪器：试剂和仪器：3.1 试剂：上海科华生物技术有限公司3.2 试剂盒组成：1、HBsAb.酶标板 412 孔7、显色剂 B 液 3 ml1 瓶2 、HBsAb）阳性对照0.5ml1 管8、终止液 3 ml1 瓶3、HBsAb）阴性对照.0.5ml1 管9、自封袋 1 个4、HBsAb 酶标试剂3ml1 瓶10、封板膜 1 张5、浓缩洗涤液20 ml1 瓶11、说明书6、显色剂 A 液3 ml1 瓶3.3 试剂稳定性：原装试剂在 28避光保存，有效期 6 个月。3.4 仪器：3.4.1 TE-B 型定时微量振荡器（江苏泰县）3.4.2 37水浴
3、箱（上海山连）4 4、标本：、标本：2 五环医院操作规程 WH-MY-0074.1 静脉抽取空腹患者标本 3.0ml(真空采血管)，将血液放置在 37水浴箱中 30 分钟后，分离血清。4.2 样品后收到后不要急于分离血清，以免血块收缩不良造成结果假阳性。4.3 溶血标本不能用于检测，因溶血可造成假阳性结果出现。4.4 用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在 28冰箱中保存一周。4.5 样品放置一周后，逐管加入 1：50 的 84 消毒液，并放置 4 小时后，装入医疗垃圾袋由专人按医疗垃圾处理。5 5、操作、操作5.1 操作步骤：511 配液：将 20ml 浓缩洗涤液（20）用蒸馏水或去离子水
4、稀释至 400ml 备用。5.1.2 编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各 2 孔和空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同） ，51. 3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照 50ul。51.4 加酶：每孔加入酶标试剂 1 滴（50ul）,轻轻振荡混匀。51.5 温育：用封板模封板后置 37温育 30 分钟。51.6 洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液洗涤 5 遍，用吸引器吸干。5.17 显色：每孔加入显色剂 A、B 液各 1 滴（50ul）, 轻轻振荡混匀, 37避光显色10 分钟。6 6、结果判定：、结果判定：6.1 目测：在白色背景
5、下观察各孔显色情况，有明显蓝色者为 HBsAb 阳性；无色者为HbsAb阴性。6.2 酶标仪检测：每孔加入终止液 1 滴，轻拍混匀，用酶标仪（450nm 波长）测定各孔 OD值。6.3 临界值：（CUTOFF）计算：临界值阴性对照孔 OD 值2.1。 （阴性对照孔 OD 值低于0.05 者按 0.05 计算）6.4 阳性判定：样品 OD 值临界值（CUTOFF）者判为阳性。6.5 阴性判定：样品 OD 值临界值（CUTOFF）者判为阴性。7 7、注意事项：、注意事项：7.1 试剂盒从冷藏环境中取出时应室温平衡 1530 分钟后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存，7.2 酶标板洗涤时各孔需
6、加满洗液，防止孔口内有游离酶不能洗干净。应设定 3060 秒的洗液浸泡时间。7.3 滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀，并弃去 12 滴。滴加时瓶身应保持垂直，以保持滴量准确（注意：勿将试剂滴在孔壁上） 。7.4 所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为 2M 硫酸，使用时应注意安全。7.5 操作应按说明书严格进行，不同批次试剂不得混用。8 8、室内质控、室内质控: :3 五环医院操作规程 WH-MY-0078.1 试剂厂家提供的阴性和阳性对照品。8.2 每次试验做室内质控。测定过程是：每次测定均需做阴性和阳性对照，对照结果良好方可发出病人报告。对于 1、3、5 阳性或 1、4、5 阳性的标本必须复查 1 次，结果与第一次相同，方可发出报告。如果不同，重新采集病人样本进行检测或查 DNA 定量。9 9、室间质评、室间质评: : 每年参加三次西安市临床检验中心的质评。1010、临床意义、临床意义 抗 HBs 为 HBV 的中和抗体，有清除 HBV、防止再感染的作用。抗 HBs 一般出现于乙肝患者恢复期，提示感染已终止。此外，注射过乙肝疫苗的人，抗 HBs 也阳性。11、参考文献： 11.1 全国临床检验操作规程（第二版）中华人民共和国卫生部医政司11.2 原试剂说明书
