《兔肝VX一2瘤TACE后PCNA、BaX、nm23、Ecad表达及ADC值动态变化研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《兔肝VX一2瘤TACE后PCNA、BaX、nm23、Ecad表达及ADC值动态变化研究（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、以肺动脉为输人动脉的成像方案为好。兔肝V X 一2 瘤T A C E 后P C N A 、B a x 、n m 2 3 、E c a d 表达及A D C 值动态变化研究中南大学湘雅二医院放射科( 4 1 0 0 1 1 ) 肖恩华袁友红肝癌作为威胁人类生命最常见的恶性肿瘤之一，有关肝癌起源、发展中相关基因突变 或异常蛋白表达情况以及经导管动脉化疗栓塞( t r a n s c a t h e t e ra r t e r i a lc h e m o e m b o l i z a t i o n ，T A C E ) 后基因表达的变化已经有了大量的研究与报道。但是有关肝癌 T A C E
2、术后各基因表达的动态变化研究报道很少，作者采用兔肝V X 一2 瘤模型对肿瘤T A C E前后P C N A 、B a x 、n m 2 3 、E - c a d 表达及与扩散成像A D C 值的关系做了系统研究，现报道如下。材料与方法一、一般资料新西兰大白兔4 0 只，雄性2 2 只，雌性1 8 只，体重1 7 2 5k g ，所有兔月龄为5 6月，健康状况良好。以上动物均由中南大学湘雅二医院动物室提供。无菌条件下，采用开 腹块种植方法建立V X 一2 瘤模型，4 0 只兔种植5 5 个部位，种植成功4 7 只。V X 2 瘤株由第四军医大学提供。二、研究分组种植后2 1d 时按分层随机的方
3、法从4 7 只兔中选出4 0 只并将兔分成4 组，即：对照组非介入组；研究组介入术后1 6h 组、介入术后3 2h 组、介入术后4 8h 组。三、介入操作技术 V X 一2 瘤种植2 1d 并完成D W I 扫描后，对研究组3 0 只兔在中南大学湘雅二医院动物手术室给予开腹直视下经肝动脉插管行化疗栓塞术。方法：经耳缘静脉注射3 戊巴比妥钠( 1m l k g ) 麻醉后；备皮，腹部皮肤消毒3 次，铺巾，切开皮肤、腹直肌鞘，分离肌肉，最后切开腹膜进入腹腔；暴露肝门区结构，经辨认腹腔动脉、肝总动脉、肝固有动脉、胃十二指肠动脉及门静脉后，分离胃十二指肠动脉并夹闭其远端，再滴少量稀释普鲁卡因于胃十二指
4、肠动脉上，经塑胶穿刺针套插入微导管或直接用头皮针穿刺逆行插人胃十二指肠动脉，置尖端于肝固有动脉内，固定微导管或穿刺针，注入碘化油与表阿霉素。剂量：碘化油0 3 m l k g ；表阿霉素2 m g k g 。观察肝脏、腹腔无出血以后，分腹膜、肌肉、皮肤3 层 缝合。用青霉素粉涂伤口。 四、M R I 检查对所有研究组兔分别于介入术后6h 、1 6 h 、3 2h 与4 8h 及对照组行D W I 。扫描参数： 头部线圈、自旋回波平面成像( S E E P I ) 序列、3 戊巴比妥钠深度全麻控制呼吸、b 值分别以1 0 0 与3 0 0s m I D 2 、T R6 0 0 0m s 、T E
5、4 5m s 、视野( F O V ) 2 0 c m 1 5 c m 、激励次数( N E X )8 、层厚2m n 、间距0 5m m 、矩阵1 2 8 1 2 8 、带宽9 0 。D W I 肿瘤不同部分与肿瘤周围正常肝实质A D C 值测量方法：采用G E 工作站F u n c t i o n软件测定肿瘤A D C 值作为评价。各检测部位选择方法( 图1 ) ：( 1 ) 正常肝A D C 值( D ) ： 取不同位置的3 个兴趣区，面积为5 0m n , 1 2 ，测量其A D C 值，取3 次测量的平均值。( 2 ) V X 2瘤周围A l ：X 2 值( B ) 以肿瘤直径的2
6、5 作为兴趣区直径，在肿瘤外周取3 个兴趣区( 面1 8 3积为5 0m l n 2 ) 测量其A I X 2 值，取3 次测量的平均值作为肿瘤外周部分A D C 值。( 3 ) v x 2 瘤中央A D C 值( A ) 以肿瘤直径的2 5 作为兴趣区( 面积为5 0m l n 2 ) 直径，测定病灶 中心A D C 值作为肿瘤中央部分A D C 值。以上检测均采用双盲法d a - 位资深主治或以上医师合作完成。五、免疫组化检测 各组兔分别于T A C E 术前及T A C E 术后1 6 、3 2 、4 8h 完成D W I 扫描后立即经耳缘静脉注入过量3 戊巴比妥钠将兔处死。无菌条件下分
7、层制作标本并予以甲醛固定与石蜡封闭。分层方法见图2 。采用武汉博士德公司小鼠抗兔P C N A 、兔抗兔n m 2 3 、兔抗兔B a x 、兔抗兔E c a d ( 工作浓度1 ：1 0 0 ) 与长臂生物素标记山羊抗小鼠免疫球蛋白( 毡G ，用于P C N A ) 、长臂生物素标记小鼠抗兔免疫球蛋白( k G ，用于B a x 、E - c a d 、n r n 2 3 ) 链霉亲和素生物素酶复合物( S t r e p tA v i d i n - B i o t i nC o m p l e x ，S A B C ) 法检测各基因蛋白的表达。P C N A 、B a x 、E c a
8、d 采用 石蜡切片微波修复抗原染色程序；n m 2 3 采用酶消化程序。结果判断：( 1 ) 指标表达指数，即：阳性表达细胞数与镜下细胞总数的比值。( 2 ) 判断标准：P C N A 细胞核呈现棕黄色染色的细胞为阳性细胞；B a x 、n m 2 3 、E c a d 细胞浆呈现棕黄色染色的细胞为阳性细胞。( 3 ) 判断方法：在4 0 0 放大高倍镜下随机取 l o 个视野通过转换存于计算机；从各基因组图片中分别提取上述l O 个视野图像经与病理及基础医学专家共同选定2 张一致判为表达阳性但染色较淡者作为阳性最低标准设为桌面背景以便参照；采用盲法由两位非本研究组人员共同计算、统计阳性细胞数
9、与阴性细胞 数，以1 0 个高倍镜视野阳性细胞数与视野中总细胞数之比的平均值( 表达指数) 作为统计 分析指标值。阳性对照巾c N A 、B a x 、n m 2 3 采用已知乳腺癌标本；E - c a d 采用胰腺标 本，全部表达阳性。阴性对照用缓冲液代替一抗全部阴性。六、统计学处理采用S P S S l 2 0 统计软件进行多元方差分析、非参检验以及多元线性回归分析。P O 0 5 ) o非介入组、术后1 6h 、3 2h 、4 8h 组肿瘤周围部分P c N A 、r i m 2 3 表达差异有显著性=1 4 3 6 6 ，P O 0 5 ；，= 3 8 7 6 ，P O 0 5 ) 。
10、三、介入治疗前后肿瘤A D C 值表3 肿瘤及正常肝实质介入前后不同时期A D c 值( 均值4 - 标准差) l O - 3 m m 2 1 s肿瘤周围A D c 值正常肝A D c 值b = 1 0 0b = 3 0 0b = 1 0 0b = 3 0 0非介入组1 7 1 0 2 71 4 8 0 2 32 7 1 0 4 22 3 0 0 4 0介夕怵后1 6h1 2 4 0 2 21 1 2 0 2 02 1 0 0 5 41 6 5 O 3 7介入术后3 2 h1 4 8 0 3 71 2 3 士0 1 62 1 0 0 4 91 9 7 0 2 9介入术后4 8h1 5 7 0
11、2 31 4 04 - 0 1 82 4 3 士O 3 32 0 6 0 2 3四、扩散成像与基因表达对照研究b = 1 0 0 时，肿瘤周围正常肝P C N A 、r i m 2 3 、B a x 、E c a d 的表达与其A D C 值之间存在相关关系( 芦一0 5 0 ，P = O 0 0 1 ；卢一0 3 7 7 ，P = O 0 8 ；r = - 一0 2 7 4 ，P = O 0 4 4 ；芦一0 2 4 8 ；P - - O 0 4 2 ) 。 肿瘤周围正常肝P C N A 、n r n 2 3 的表达与对肝实质A D C 值之间存在线性相关关系且P C N A 、 n m 2
12、 3 的表达高低对肝实质A D C 值有影响，影响大小顺序为：P C N A 、n m 2 3 ( F = 8 1 4 8 ， P 0 0 5 ) ，E - c a d 在T A C E术后先有轻度增加然后表达下降但是差异亦无显著性意义( P 0 0 5 ) 。可见V X 一2 瘤在T A C E 术后4 8 内比较T A C E 术前总体表现为增殖活性增加。而本组肿瘤周围部分A D C 值，在b 值为1 0 0 与3 0 0 s m m 2 总体均表现为下降，而且介入术后1 6h 内A D C 值逐渐下降，至术后1 6h 达到最低，然后逐渐上升。通过介入治疗前后A D C 值与P C N A
13、 、n m 2 3 、E c a d 、B a x 的相 关与回归分析发现，肿瘤b 为1 0 0 与3 0 0 时A D C 值与相应部位P C N A 存在负相关关系。正 常肝实质内T A C E 术前后P C N A 、n m 2 3 、E c a d 、B a x 表达较术前均有不同程度的增加( P 0 0 5 ) 。而本组正常肝实质A D C 值，在b 值为1 0 0 与3 0 0 s m m 2 总体均表现为下降，而且介 入术后1 6h 内A D C 值逐渐下降，至术后1 6h 达到最低，然后逐渐上升，与肿瘤周围部分 A D C 值在T A C E 术后的动态变化趋势基本一致。统计分
14、析发现介入治疗前后A D C 值与P C N A 、n m 2 3 、E c a d 、B a x 表达存在相关关系( P 0 0 5 ) ，但在a 入= 0 1 aj I I = 0 1 5 水平下， 肿瘤b 为1 0 0 与3 0 0 时A D C 值均与P C N A 、n m 2 3 负相关，其中P C N A 的贡献起主要作用。可以认为，A D C 值在反映组织内水分子布朗运动的同时，也反映了细胞的增殖，正是由于肿瘤组织中细胞增殖的指数增加，导致水分子扩散运动的受限，从而引起A D C 值下降，而这 也证实了以往I c h i k a w a 【l 3 1 、Y a m a s h
15、i t a B 4 与K i m 等【l 习研究所表明的恶性肿瘤的A D C 值低于良性肿瘤的原因以及A D C 值在良恶性肿瘤中的鉴别诊断价值。r i m 2 3 、B a x 、E - c a d 在本组V X 一2 瘤中表达均非常低，且基因表达与A D C 值分析表明不存在相关关系，而正常肝实质 r i m 2 3 、B a x 、E c a d 表达明显高于V X 一2 瘤，其A D C 值与n m 2 3 、B a x 、E c a d 均相关，而且是程度不一的负相关，作者认为n m 2 3 、B a x 、E - c a d 表达对A D C 值影响可能通过间接影响细胞增殖有关，而与肿瘤的浸润与转移潜能等相关问题有待进一步的研究。1 8 6
