《10高检~20 功能成分测定(3)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《10高检~20 功能成分测定(3)（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 北京一北京一轻轻高高级级技技术术学校教案学校教案任课教师：任课教师： 吴昊吴昊 科科 目：目： 食品检验技术食品检验技术 编号：编号： 20 审 批 签 字授 课 章节 名 称第六章 食品中功能性成分的测定 6.3 自由基清除剂 SOD 活性的测定授课班级10 检高（1） （2）授课时数2授课时间第十三周（2）授课方法归纳法、复习法、讲授法教 具多媒体教学目的 及 要 求1、了解 SOD 的定义、特点和分类。2、掌握 SOD 测定的方法和原理。教学重点、 难点 重点：SOD 测定的测定方法难点：SOD 测定的原理作业P194 4教 学 过 程【复习提问复习提问】1、分别试述活性寡糖和活性多糖
2、的生理功能。2、在功能性多糖的测定中如何进行检测成分的提取和精制？ 【引入新课引入新课】自由基清除剂在清除机体自由基，保护机体免受氧化损害中起重要作用。因此，近年来对自由基清除剂的研究备受关注，超氧化物歧化酶(SOD)是目前研究得最深入,应用得最广泛的一种酶类自由基清除剂。本节课我们来共同研究 SOD 的测定。教 学 后 记第 2 页 共 7 页教 案 纸教学内容、组织、教法、要求说明【新课】 第三节第三节 自由基清除剂自由基清除剂 SOD 活性的测定活性的测定 一、自由基一、自由基 1、自由基的定义、自由基的定义又叫游离基，是由单质或化合物的均裂而产生的带有未成对电子的原子或基团。2、特点、
3、特点（1）具有强烈的配对倾向，倾向于以各种方式与其他原子基团结合。（2）它是人体生命活动中各种生化反应的中间代谢产物，具有高度的化学活性。是机体有效的防御系统，若不能维持一定水平则会影响机体的生命活动。但自由基产生过多而不能及时地清除，它就会攻击机体内的生命大分子物质及各种细胞器，造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。3、分类、分类（1）氧自由基。大约占自由基总量的 95，包括超氧阴离子（O2-） 、羟自由基（OH，是最活泼的自由基，也是毒性最大的自由基，它可和活细胞中的任何分子发生反应而造成损伤，而且反应速度极快，被破坏的分子包括糖类、氨基酸
4、、磷脂、核苷和有机酸等） 、过氧化氢分子（H2O2） 、氢过氧基（HO2-） 、烷过氧基（ROO） 、烷氧基（RO） 、氮氧自由基（NO） 、过氧亚硝酸盐（ONOO-）,氢过氧化物（ROOH）和单线态氧（1O2）等。（2）非氧自由基。主要是氢自由基（H）和有机自由基（R）等。4、自由基的产生、自由基的产生人体细胞在正常代谢过程中或机体受到外界条件的刺激（如高能辐射、抗菌剂、杀虫剂、空气污染等作用） ，会刺激机体产生活性氧自由基。自本部分要求了解自由基的定义、自由基产生和对人体的生理功能的影响。第 3 页 共 7 页由基反应包括引发、增长和终止阶段。教 案 纸教学内容、组织、教法、要求说明第 4
5、 页 共 7 页二、自由基清除剂（自由基清除剂（scavenger）1、定义、定义指能清除自由基或能阻断自由基参与的氧化反应的物质。自由基清除剂大多为抗氧化剂，但也不都是抗氧化剂，有些系统并未进行氧化作用。2、分类、分类（1）酶类清除剂。包括超氧化物歧化酶（SOD） 、过氧化氢酶（CAT） 、谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）等。（2）非酶类清除剂。包括黄酮类、多糖类、维生素 C、维生素E、-胡萝卜（bo）素和还原型谷胱甘肽（GSH）等活性肽类。3、自由基清除剂发挥作用的条件：、自由基清除剂发挥作用的条件：（1）要有一定的浓度。（2）必须在自由基附近，并且能以极快的速度抢先与自由基结合。因为自由基活
6、泼性极强，一旦产生马上会与附近的生命大分子起作用。（3）在大多数情况下，清除剂与自由基反应后会变成新的自由基，这个新的自由基的毒性应小于原来自由基的毒性才有防御作用。4、超氧化物歧化酶、超氧化物歧化酶(SOD)（1）来源：）来源：存在于几乎所有靠氧呼吸的生物体内，包括细菌、真菌、高等植物、高等动物和人体中。其中含铜锌金属辅基的 CuZn-SOD 是最为常见的一种酶。（2）理化性质：）理化性质：SOD 属酸性蛋白酶，对 pH、热和蛋白酶水解等反应比一般酶稳定。（3）生理功能）生理功能（4）应用：）应用：化妆品、医疗、食品（主要是各种饮料） 。（5）SOD 应用的局限性应用的局限性半衰期短。半衰期
7、短。SOD 在体内半衰期为 6-8min，体外半衰期（25时）为 9-10d。因此，体内注射表现为多次数、少浓度，体外涂抹表现概述自由基 清除剂清除 自由基的作 用原理，及 作用的条件。对超氧化物 歧化酶的来 源、物化性 质和生理功 能进行分组 讨论，并由 有学生进行 总结。教师 再进行补充。教 案 纸第 5 页 共 7 页教学内容、组织、教法、要求说明为高剂量、低效应。代谢速率快。代谢速率快。SOD 在体内代谢速率极快，注射 6h 后，90以上的大分子 SOD 经降解为小分子而随泌尿系统排泄。酶相对分子质量大，酶相对分子质量大，均在 32000 以上。因此，透皮或透膜吸收困难，体内或细胞内作
8、用弱。酶制剂不宜口服，酶制剂不宜口服，口服易被胃酸变性，胃蛋白和胰蛋白酶水解破坏。大分子异性蛋白，大分子异性蛋白，不宜大剂量、长时间使用，否则会不可避免地出现某些过敏性变态反应，呈现明显的不良反应性变化。对靶细胞或靶部位的亲和力低对靶细胞或靶部位的亲和力低，药用趋向性不明显。酶的稳定性不高，酶的稳定性不高，对理化因素较为敏感，过高温度、过大剂量辐射、过长时间超声波、过强酸碱度、过多变性剂、还原剂等均易导致 SOD 分子结构改变，酶活性丧失，形成不可逆性变化。药物作用单一性大，药物作用单一性大，常规剂量单独使用疗效欠佳。5、自由基清除剂的应用、自由基清除剂的应用 SOD 生理功能生理功能抗衰老；
9、 提高机体对多种疾病的抵抗力 ；增强机体对外界环境的适应力 。具有生物活性的 SOD 可从动物血液（如猪、牛、马血）的红细胞中提取，也可从牛奶、细菌、真菌、高等植物（小白菜叶）中提取。 在食品工业应用在食品工业应用作为保健食品的功效因子或食品营养强化剂；抗衰老、抗疾病、抗辐射、抗疲劳、保健强身。如蛋黄酱、牛奶重点讲授SOD 的生理功能，及在食品中的应用。教 案 纸第 6 页 共 7 页教学内容、组织、教法、要求说明制作各种剂型的 SOD 或复合型食品；胶 、片剂、口服液等。用作抗氧化剂。罐头食品、果汁、啤酒；水果蔬菜的保鲜剂。 三、测定方法三、测定方法1、黄嘌呤氧化酶细胞色素、黄嘌呤氧化酶细胞
10、色素 C 法（法（550nm）法；）法；（国际公认的（国际公认的 SOD 活性测定方法之一）活性测定方法之一）原理原理：在有氧的条件下，黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤发生氧化反应生成尿酸，与此同时产生 O2-，O2-氧化型细胞色素 c 还原为还原型细胞色素 C，后者在 550nm 处有最大吸收。存在 SOD时，O2-被催化而歧化，细胞色素 C 还原反应速率则降低。根据细胞色素 C 在加入 SOD 前后被 O2-还原的速率变化测定SOD 活性。测定方法测定方法 ：PH78，03M 磷酸钾缓冲液 05ml(含06mlEDTA)，610 M 氧化型细胞色素 C 液05ml，03ram 黄嘌呤液 05ml，1
11、3ml 重蒸水，在预保温10 分钟，最后加入 1710umgport 的黄嘌呤氧化酶02ml，并立即计时，速率变化在 2 分钟内有效，控制黄嘌呤氧化酶浓度，使其在 550nm 的吸光度为 025min，测定SOD 活性时，加入 03mlSOD 被测液，重蒸水相应减少到10ml，根据抑制程度，计算活性。教师重点讲教师重点讲授授 SOD 的测的测定方法，对定方法，对测定原理概测定原理概述，要求学述，要求学生对测定的生对测定的原理了解即原理了解即可。可。第 7 页 共 7 页教 案 纸教学内容、组织、教法、要求说明第 8 页 共 7 页2、微量邻苯三酚自氧化法（、微量邻苯三酚自氧化法（325nm 法
12、）法） ；（国内普遍采用的方法之一）（国内普遍采用的方法之一）原理：原理：邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出 O2 -，生成带色的中间产物，反应开始后反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。这里测定的是邻苯三酚自氧化过程中的初始阶段，中间物的积累在滞留 3045s 后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在 4min 的范围内，中间物在 420nm 波长出有强烈光吸收。当有 SOD 存在时，由于它能催化 O2 -与 H+结合生成 O2 和 H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过计算即可求出 SOD 的酶活性。 酶活力单位定义酶活
13、力单位定义：在 25恒温条件下，每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯酚自氧化率达 50%的酶量定义为 1 个酶活力单位。 3、氮蓝四唑法（、氮蓝四唑法（NBT 法）法） ；（1）原理）原理利用核黄素（VB2 ）在光激发下产生超氧阴离子（O2- ） ，O2-可使 NBT 还原生成蓝色的蓝甲，蓝甲在 560nm 波长处有最大的吸收值。当加入 SOD 提取液时，O2-被 SOD 清除而抑制了 NBT 的还原，于是在 560nm 处的吸光度（A）值降低，酶活性此方法是测定 SOD的经典方法，要求学生重点理解酶活力单位的意义。教 案 纸第 9 页 共 7 页教学内容、组织、教法、要求说明越强，光密度值就减少得越多，一般以抑制 NBT 还原 50时，定义为一个酶活力单位。注意：注意：所采用的测定方法、测定条件及对单位的定义不同，测定结果也不同，不能直接比较。在各种测定条件下受主客观因素的影响，重复测定仍有较大误差。【小结小结】通过本节课的学习，同学们了解了食品功能性成分的分类、发展的历史、发展的趋势、存在的问题以及食品与药品的区别等等，对功能性成分的检测做出了很好的铺垫。【作业作业】1、简述 NBT 比色法测定 SOD 活性的原理？【板书板书】 黑体部分为板书设计黑体部分为板书设计老师以提问的方式与学生共同总结整节课的主要内容和重要知识点布置作业
