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1、竖塑至匿堂苤查! 塑! 笙! 旦箜! ! 鲞箜! 塑苴旦全至重蕉垦兰堡堡童塞L P S 对肺微血管内皮细胞p - A R 及肛A R 激酶的影响肖贞良杨大春向可翠王英( 6 1 0 0 8 3 成都成都军区总医院I C U )摘要为探讨脂多糖( L P S ) X 寸肺微血管内皮细胞p _ 受体( p _ A R ) 及p 受体激酶的影响，在体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞( R P M V E C ) 的基础上，采用放射性配基结合法检测I 。P S 作用后R P M V E Cp - A R 的变化，并用W e s t e r nb l o t 检测L P S 作用后p 受体激酶G R K
2、 2 和G R K 3 的改变。结果发现，正常对照组p A R 的最大结合容量B m a x 为5 5 8 3 _ + 0 3 0 6 ，I P S 组的B m a x 显著低于正常对照组( P 0 0 5 。提示L P S 组和L ，P S + 山莨菪碱组G R K 2 表达较正常对照组显著增加，但L P S 组和I P S + 山莨菪碱组间G R K 2 表达无显著差异。W e s t e r nb l o t 检测G R K 3 结果重复3 次均为阴性。3 讨论1 9 8 4 年S t e i n b e r g 报道血管内皮细胞存在降A R E ，并用 1 2 5 I 一I C Y P
3、 检测出每个牛主动脉内皮细胞 的| A R 结合位点为2 15 0 0 29 0 0 ，K d 值为1 0 9 2 6 p m o l I 。D a s 等嘲用 3H 一D H A 检测到牛肾上腺髓S1 6 6 解放军医学杂志2 0 0 6 年6 月第3 1 卷第6 期首届全军重症医学论坛专集质的毛细血管内皮细胞存在着两类亲和力不同的pA R ，其K d 值分别为0 2 7 0 0 9 和2 9 6 0 3 1 n m o l L ，认为这两类受体分别为一A R 和1 3 2 一A R 。本研究用 3H - D H A 检测到R P M V E Cp A R 的B m a x 为5 5 8 f
4、 m o l 1 0 5 细胞，K d 值为0 2 7 0 0 3 n m o l L ，证明R P M V E C 存在高亲和力的| A R 。本研究用单点法检测发现，L P S 组p A R 的B m a x 显著低于正常对照组和 L P S + 山莨菪碱组，表明L P S 可引起R P M V E Cp A R下调而山莨菪碱对L P S 引起的p A R 下调有一定的抑制作用。近年来的研究显示，与肛A R 内化密切相关的主要有两类分子。即G R K s 和p 抑制蛋白。G R K s 是一类与G 蛋白偶联受体密切相关的分子，有G R K l G R K 7 共7 种亚型，其中与l A R
5、 内化有关的是G R K 2 和G R K 3 ；二者中G R K 2 起主要作用，G R K 3 是G R K 2 的同工酶 7 。本实验蛋白电泳结果提示在7 9 k D a 处存在一清晰条带，W e s t e r nb l o t 结果证实为G R K 2 ，表明 R P M V E C 有G R K 2 表达。而电泳结果在7 0 k D a 处没有蛋白条带，W e s t e r nb l o t 结果也为阴性，表明R P M V E C 不表达G R K 3 。p A R 是一种G 蛋白偶联受体，本实验中L P S 作用后p A R 出现明显下调。G R K 2 是一种与p A R
6、内化 密切相关的激酶；本实验发现L P S 组G R K 2 的表达较 正常对照组显著增加。G R K 2 表达增加可促进p A R与| 抑制蛋白的结合，从而促进p A R 的内化，这可能是R P M V E C p A R 下调的重要机制 8 。我们曾报道内毒素性A U 大鼠肺组织1 3 - A R 出现下调 2 3 ；由于肺血管 内皮细胞约占肺组织各种细胞的3 0 2 ，推测肺微血管内皮细胞的p _ A R 下调乃是引起肺组织l A R 下调 的主要因素。有报道p A R 激动剂治疗A L l 有效，因而推测肺微血管内皮细胞p A R 下调与A L I 的发生有着必然的联系。本实验还发现，
7、山莨菪碱可以抑制I P S 引起的伊A R 下调，但不能抑制L P S 引起的G R K 2表达增加。提示山莨菪碱不是通过抑制G R K 2 表达增加而是通过其他机制抑制L P S 引起p A R 下调。参考文献1肖贞良，孙耕耘，钱桂生肺循环灌注对大鼠肺微血管内皮细胞分离和培养的影响中国病理生理杂志，1 9 9 9 ，1 5 ( 1 1 ) ：1 0 5 32孙耕耘，毛宝龄，吕宝璋内毒素致大鼠肺损伤的肺组织8 受体的变化与膜磷脂代谢的关系中国应用生理学杂志，1 9 9 4 ，1 0 ( 1 ) ：6 73肖贞良，孙耕耘，夏前明等过氧化氢诱导肺微血管内皮损伤的实验研究中国药理学通报，2 0 0
8、0 ，1 6 ( 3 ) ：2 7 44J 萨姆布鲁克，EF 弗里奇，T 曼尼阿蒂斯著金冬雁，黎孟枫等译分子克隆实验指南第2 版1 9 9 6 ：8 8 8 - - 8 9 75S t e i n b e r gS F ，J a f f e E A ，B i l e z i k i a nJ Pe t a l E n d o t h e l i a lc e l l sc o n t a i nb et aa d r e n o e e p t o r s N a u n y n - S c h m i e d e b e r g sA r c hP h a r m a c o l ，1 9
9、8 4 ，3 2 5( 4 ) ：3 1 06I ) a sS K ，M u k h e r j e eS ，B a n n e r j e eD K A d r e n o c e p t o r so fm u l t i p l ea f f i ni t i e si nad o n a lc a p i l l a ye n d o t h e l i a lc e l ll i n ea n di t sf u n c t i o n a li m p l i c a t i o n M o la n dC e l lB i o c h e m ，1 9 9 4 ，1 4 0 ：4
10、 9 5 47P e n e l aP ，A l v a r e zD o l a d oM ，M u n o zAe ta 1 E x p r e s s i o np a t t e r n so ft h er e g u l a t o r yp r o t e i n sGp r o t e i n - c o u p l e dr e c e p t o rk i n a s e2a n dl a r r e s t i n ld u r i n gr a tp o s t n a t a lb r a i nd e v e l o p m e n t E u rJB i o c h e m ，2 0 0 0 ，2 6 7( 1 4 ) ：4 3 9 08S t e p h e nS C - F E v o l v i n gc o n c e p t si nGp r o t e i nc o u p l e dr e c e p t o re n d o c yt o s i s ：t h er o l ei nr e c e p t o rd e s e n s i t i z a t i o na n ds i g n a l i n g P h a r m a c o lR e v ，2 0 0 3 ，5 3 ( 1 ) ：1
