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1、骨髓活检切片制作技术 、取材 1 术前准备：取 1.5EP 管，放入 Bouin 氏液或 2.5%3.8%戊二醛固定液 7080ML。载玻片 6 片 2 穿刺 一步法 二、固定Bouin 固定液：苦味酸饱和水溶液 75ml福尔马林（40%甲醛） 20ml冰醋酸 5mlBouin 氏液固定 30-60 分钟，若组织块大或增生活跃的标本可适当延长时间，但不宜超过 3 小时。 三、脱水 1 取出固定液中组织块，放入清水中漂洗（去除血块，若骨髓组织少并且带有血块可不去 除，一面破坏组织块） ，与写好的标签一同放入一块小纱布，大头针固定，放入清水漂洗 2-3 次。 2 脱水 （1）留置固定 10 分钟：
2、水浴箱内 组织块 +60%乙醇+70%乙醇，45水浴，10 分钟。（2）组织块移入 60%（一次）乙醇瓶内，依次 70%（一次）80%（一次）95/96%（二次） 100%（二次）乙醇，45,10 分钟。注：乙醇可重复使用。 3 包埋（使用塑胶包埋法）（1）经脱水处理后的组织块用针头挑入特制的聚乙烯模具中，用滴管吸取 Hemapun865 甲液滴入模具中，装满模具(约 20ml)，4冰箱中浸入 1-2 小时。（2）先取出组织块。用 8 号针管吸取 Hemapun865 乙液，滴三滴入模具，迅速将甲乙两 液搅匀，后将组织块摆在模具底部中央。（3）放入-20冰箱，或者室温静置 20 分钟，或 4冰
3、箱静置 40-60 分钟，待其自聚.（4）在包埋块顶部尚湿润时贴上标号标签。 四 切片每份标本切 3 微米：用于 HGF、HE 染色，切片备用。5 微米：用于 Gomori 染色。一般先切 5 微米，每种染色放三条。1 先用钢锉休整聚合块底部两侧，使之尽量锉至组织块，随即装入轮转式切片机，调节 所需厚薄度，切除底部聚合块无组织块部分。2 一般先切 5 微米。均匀摇动切片机，右手用弯头镊子轻轻钳牢已切割下来的组织片，左 手用毛笔协助将其取下，用镊子轻轻使每张切片充分平坦于水面。3 贴片 选择完整且无皱褶的组织片，左手拿玻片垂直入水，去贴附切片，右手拿镊子帮 助推动，使组织片贴附玻片三分之一处。一
4、般每张玻片贴附 3 条。4 放在 60-80的电热板或自制烤片架上充分烘干，或过夜，后染色。 五 染色1 HGF 染色（1）切片充分干燥后，Harris 苏木素染色 2-3 分钟，流水冲洗，热水浸一下，干燥。 （2）Gimesa 染液染 2-3 分钟，流水冲洗，热水浸一下，干燥。 （3）1%酸性品红液染色，10-20s，流水冲洗，干燥。（4）载玻片上加中性树胶一滴，加盖玻片。2 Gomori 染色 （1）试剂含氨银溶液：10%硝酸银溶液 10ml（4 份）+10%氢氧化钾水溶液 2.5 ml（1 份） ，立即发 生灰黑色沉淀，然后一滴一滴加入 26%-28%氨水，随时不停摇动容器，直至沉淀粉完
5、全溶 解，即停止滴入氨水。再逐滴谨慎加入 10%硝酸银溶液，至溶液稍浑浊，出现振摇后易消 失的沉淀物为止。最后在此液内加入二倍量蒸馏水。0.5%过锰酸钾溶液 过锰酸钾 0.5 克+蒸馏水 100ml 2%偏重亚硫酸钾溶液 偏重亚硫酸钾 2 克+蒸馏水 100ml2%硫酸铁氨（铁明矾）溶液 硫酸铁氨 2 克+蒸馏水 100ml 20%福尔马林溶液 甲醛液 20ml+蒸馏水 80ml 0.2 %氯化金溶液 储存氯化金溶液 20 ml+蒸馏水 80ml 2%硫代硫酸钠 硫代硫酸钠 2 克+蒸馏水 100ml （2）步骤 A.切片用 0.5%过锰酸钾溶液氧化 1 分钟. B.流水洗 2 分钟，干燥。 C.2%偏重亚硫酸钾水溶液脱水 1 分钟. D.流水洗 2 分钟，干燥。 E.2%硫酸铁氨（铁明矾）溶液敏化 1 分钟。 F.流水洗 2 分钟，完全干燥。 G.蒸馏水漂洗 30s，2 次。完全干燥。 H.浸于含氨银溶液 2-3 分钟。 I.蒸馏水漂洗 20s. J.浸于 20%福尔马林溶液内还原 2-3 分钟。 K.流水洗 3 分钟，干燥。 L.浸于 0.2 %氯化金溶液调色 10 分钟。 M.蒸馏水漂洗 30s。干燥。 N.载玻片上加中性树胶一滴，加盖玻片。
