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1、参附注射液对大鼠重症急性胰腺炎肾损伤的影响参附注射液对大鼠重症急性胰腺炎肾损伤的影响王代宏 王伟 王芳元咸宁市中心医院普外科（437100） 摘要摘要：目的目的 观察参附(SF)注射液对重症急性胰腺炎(SAP)肾损伤的影响。 方法方法 将SD大鼠40只随机分为SAP组和SF组,每组20只,SAP模型制作采用4%牛磺胆 酸钠溶液逆行注射胰管内的方法,动态测定血浆BUN、Cr和TNF-、IL-6、LPS、 AT水平，观察胰腺和肾脏的病理学变化。结果结果 制模后SAP组血浆TNF-、IL- 6 、LPS、AT水平升高,SF组血浆TNF-、IL-6 、LPS、AT水平明显降低， 胰腺和肾脏的病理改变明
2、显减轻，肾功能明显改善，24h后改变更为明显。结论结论 细胞因子、内毒素和肾素血管紧张素系统的激活参与了SAP肾损伤的发生发展 过程，参附注射液降低免疫炎性反应和内毒素，减轻胰腺炎和肾损伤。关键词关键词：胰腺炎；肾损伤；参附Effects of Shen-Fu Injection on kidney Injury in severe acute pancreatitis ratsWANG Dai-Hong，WANG Wei, WANG Fang-YuanDepartment of General Surgery，XianNing Central Hospital, XianNing 43710
3、0, ChinaAbstract: objective To expore the protective effects of Shenfu injection(SF) on kidney Injury in severe acute pancreatitis rats. Methods SD rats were divided randomly into SAP group (n=20) and SF group (n=20). SAP animal model was devoloped in adult male rats by retrograde injection of 4% so
4、dium taurocholate 1ml/kg in biliopancreatiic duct。The plasma levels ofBUN、Cr and TNF-a, IL-6 , LPS, AT were measured at various time points.Morphology of pancreas and kidney were observed. Results The plasma levels of TNF-a, IL-6 , LPS and AT elevated significantly after SAP induction. Compared with
5、 SAP group, the plasma levels of TNF-a, IL-6 , LPS and ATgradually decreased, the renal function were improved, histological changes of pancreas and kidney were also relieved. The change was significant after hour 24. Conclusions Cytokines, LPS, and activated rennin-angiotensin system might be invol
6、ved in pathogenesis of the kidney injury following SAP. Shenfu injection could modulate immunity function, relieve the toxicity action of LPS, and alleviate pancreatitis and kidney injury .Key Word: Pancreatitis; Kidney injury ; Shenfu injection 重症急性胰腺炎（Severe acute pancreatitis、SAP）早期可引起多器官 功能障碍综合征
7、（MODS）的发生。在胰腺外脏器损伤中，肾损伤的发生率仅次 于肺损伤。我们通过制作大鼠重症急性胰腺炎模型，动态观察血浆细胞因子、 内毒素、血管紧张素的变化和胰腺、肾脏的病理学改变，探讨参附注射液对S AP并发肾损伤的影响及可能机制。1、材料与方法 1.1 材料： 雄性健康SD大鼠40只，体重200-250g，牛磺胆酸钠由Sigma公 司提供，鲎试剂盒购自上海市医学化研所，TNF-和IL-6 ELISA试剂盒由深圳 晶美生物工程有限公司提供，血管紧张素试剂盒由北京北方生物技术研究所 提供。 1.2实验分组和动物模型的制备: 将雄性健康SD大鼠分为SAP组（n=20）和S F组（n=20）。各组动
8、物于6、24、48、72h各分批活杀5只。SAP模型制作采用4% 牛磺胆酸钠溶液逆行注射胰管内的方法。腹腔注射2%戊巴比妥钠（40mg/kg）， 胆总管近端采用小动脉夹暂时夹闭，逆行穿刺总胆胰管，将4%牛磺胆酸钠恒速 向胆胰管推注（0.1ml/min），剂量为1ml/kg，5分钟左右，可见胰腺出血，快 速拔针，全层缝合关闭腹腔，SF组采用微量泵经股静脉恒速输注参附注射液， 速度为8mlkg/h,SAP组给予等量生理盐水（NS）。 1.3 检测指标 1.3.1 血浆TNF-和IL-6含量测定：制模后各相应时间点抽取腹主动脉血 ，采用酶联免疫法（ELISA法）测定。 1.3.2 血浆血管紧张素（A
9、T）含量测定：制模后各相应时间点抽取腹 主动脉血，采用放射免疫分析法测定。 1.3.3 血浆中内毒素（LPS）测定：制模后各相应时间点抽取门静脉血，采 用偶氮显色鲎试验法测定。 1.3.4血浆肌酐（Cr）、尿毒氮（BUN）含量检测：制模后各相应时间点抽 取腹主动脉血，采用全自动生化分析仪测定。 1.3.5病理学改变 腹腔内肉眼所见，将肾脏和胰腺组织制成石腊切片后行H E染色，光镜下观察胰腺和肾脏组织学改变。 1.4 统计学处理采用SPSS16.0统计软件包，所有数据均以S表示，作重复测量方差分X析，同时作Spearman，s相关性分析。 2、结果 2.1病理学变化 2.1.1肉眼所见：6h时S
10、AP组胰腺充血，水肿，局部坏死；SF组胰腺水肿有 所减轻。 24h后SAP组胰腺大片或全部坏死，腹腔有大量血性腹水，皂化斑增多 ，肾淤血水肿，有局部坏死灶和散在出血点；SF组胰腺水肿明显减轻，灰褐色 变浅，皂化斑消失，肾脏淤血水肿明显减轻。 2.1.2光镜所见：6h时SAP组主要表现胰腺间质和腺泡水肿，肾脏无明显变 化；SF组腺泡水肿减轻，炎性细胞浸润减少。24h后SAP组胰腺出现弥漫性出血 及大片胰腺坏死，间质和腺小叶可见大量炎性细胞浸润，胰周出现脂肪坏死， 肾小管上皮细胞变形水肿，部分坏死，血管充血，肾小管可见大量管型形成， 肾小球间质水肿，可有少量散在炎性细胞浸润；SF组胰腺坏死范围有所
11、缩小， 间质充血和出血减轻，可有少量炎性细胞浸润，肾小球淤血水肿明显减轻，肾 小管有少量管型形成。 2.2血浆TNF-和IL-6水平变化：见表1. 2.3门静脉血浆内毒素（LPS）水平的变化：见表1。 2.4血浆血管紧张素（AT）水平的变化：见表1。2.5血浆肌酐（Cr）、尿毒氮（BUN）含量的变化：见表1。表1 血浆细胞因子、LPS、AT及BUN、Cr水平的动态变化（h）指标组别6244872TNF-SAP组327.5613.67467.7313.67526.5113.05443.8213.19(pg/ml)SF组281.3111.90*343.4612.84396.3513.11360.1
12、312.91*IL-6SAP组194.4517.05316.5124.75347.0227.28296.5723.50(pg/ml)SF组179.2116.63263.3519.74*276.4521.32*239.6219.06*LPSSAP组0.2230.0270.3560.0340.4310.0430.3670.032Eu/mlSF组0.2080.0210.2830.029*0.3690.032*0.3050.029*ATSAP组376.4377.11537.89117.56593.57131.54578.41119.58(pg/ml)SF组301.2560.05*331.2070.36
13、361.1671.34348.5770.68CrSAP组117.0431.23170.4242.75197.3545.12183.2143.08(mol/l)SF组103.1927.16122.3733.77*139.4632.34*133.4831.43*BUNSAP组16.231.7721.562.0423.312.4320.672.12(mmol/l)SF组12.681.56*16.451.79*17.762.03*16.811.65*注：SF组与SAP组相应时间点比较，t0.05，t2.306 *P3.355 P0.013 3 讨论：讨论：3、1 重症急性胰腺炎早期由于胰酶的异常激活导
14、致机体超强炎症反应，引 起全身炎症反应综合征（SIRS），造成组织器官损伤，引起肾损害,同时内毒素 血症本身加重肾损害的蓄积,导致SAP早期多器官功能障碍综合征的发生1。肾 脏作为代谢产物最终排泄器官，炎症介质和细胞因子的过度释放使肾脏发生血 流动力学改变，引起肾脏本身过度炎症反应及肾功能损害2；另一方面通过炎 症及免疫反应，对肾组织造成直接损伤，肾小管上皮细胞变形和坏死。通过试 验我们发现，制模后SAP组大鼠血浆BUN、Cr水平和TNF-、IL-6、LPS水平均升 高，24h升高明显，48h达到高峰，说明在重症急性胰腺炎早期内毒素和细胞因 子参与了肾损害的发生；并且随着胰腺炎病情的发展，肾损
15、害不断加重、血浆 细胞因子和内毒素的水平不断升高，三者呈高度正相关，我们认为重症急性胰 腺炎时肾损害与胰腺病变、细胞因子和内毒素血症是密切相关的，共同参与了 肾损害的发生发展过程，加重肾损害的蓄积。 3、2 目前认为胰腺组织存在完整而独立的肾素血管紧张素系统（RAS） ，胰腺炎后胰腺的血管内皮和上皮细胞RAS的相关基因及合成蛋白表达增加2， 胰腺血管AT水平升高，胰腺微血管痉挛，导致胰腺微循环障碍，加重胰腺炎 症3。另一方面重症急性胰腺炎时，机体处于应急和休克状态，RAS被激活，血 液中AT水平升高，引起肾血管收缩，肾血流量减少，肾小球滤过率下降，肾 小管吸收功能降低，造成肾皮质和肾髓质微循环
16、障碍，导致肾功能受损。通过 试验我们发现，制模后血浆AT水平升高，与胰腺和肾脏的病理学改变以及肾 损害相一致，说明SAP早期存在RAS的激活，引起胰腺缺血，加重胰腺损伤；同 时RAS的激活和血浆血管紧张素水平升高引起肾内血流动力学失控，导致肾损 害。 3、3 参附注射液对胰腺病变和肾损伤的影响参附注射液的主要成分为人参 皂甙和乌头碱，在防治各种休克、MODS方面体现了其“天然化学库”及“多靶 作用”的独特优势。实验结果显示，与SAP组比较，SF组胰腺和肾脏的病理改变 明显减轻，血浆TNF-、IL-6、 LPS 和AT水平明显下降，肾功能明显改善， 提示参附注射液能够有效降低血浆细胞因子和内毒素水平，抑制RAS系统的激活和AT水平升高，减轻了肾脏和胰腺的病理损害，改善肾功能。我们认为其机 制可能通过调整免疫功能使促炎抗炎因子达到平衡，阻止过度炎性
