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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 蛋白在胃癌组织中的表达及其意义蛋白在胃癌组织中的表达及其意义作者：胡跃云,吴宏菊,辛彦,赵晶 作者单位：沈阳，中国医科大学第一医院肿瘤研究所第四研究室 普通外科研究所肿瘤病理研究室【摘要】目的检测 HuR 蛋白在正常胃黏膜、癌前病变及胃癌中的表达，分析并探讨其与胃癌临床病理因素的关系及意义。方法 采用组织芯片和免疫组化 PV-9000 二步法检测 HuR 在 235 例胃癌及其癌前病变和部分配对正常胃黏膜在上述组织中的表达。结果 HuR 在胃癌组织、肠上皮化生和异型增生中的表达(分别为43.83%、40.00%和 40.74%)均显著高于正常胃黏膜(1
2、.60%)，均P5 cm 处正常胃黏膜 188 例，慢性萎缩性胃炎 37 例，肠上皮化生 85 例，异型增生 27 例。其中男164 例，女 71 例，年龄 3080 岁，中位年龄 55 岁;管状腺癌 199 例(高分化腺癌 13 例，中分化腺癌 68 例，低分化腺癌 118 例)，乳头状腺癌 3 例，未分化癌 4 例，印戒细胞癌 9 例，黏液腺癌 20 例;Borrmann 分型：型 11 例，型 35 例，型 175 例，型 14 例;有淋巴结转移 173 例，无淋巴结转移 62 例。2. 组织芯片构建：采用组织芯片制作仪(Microarrayer，Beecher Instruments，
3、USA)将 235 例及其配对正常胃黏膜构建在 7 张组织芯片上。3. 试剂与方法：采用 PV-9000 免疫组化二步法，鼠抗人HuR 单克隆抗体、PV-9000 二步法免疫组化检测试剂盒和氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购自北京中山金桥生物技术有限公司。严格按照试剂盒推荐的方法进行实验，用 PBS 代替一抗作阴性对照。4. 结果判定：HuR 蛋白在细胞质呈现清晰棕黄色颗粒的特异性免疫反应为阳性反应(在生理状态下 HuR 蛋白在正常胃黏膜、间质细胞、胃癌胞核均有表达，本研究未计数在胞核中的表达情况;KKME-专业医学搜索引擎 http:/ HuR 在不同组织中的表达均指在胞质中的表达情况)。由
4、两位观察者采用盲法观察，每个病例随机选择 2 个高倍视野，计数200 个细胞，按照阳性细胞数占同类细胞数的比例进行等级划分。结果采用半定量计分方法，根据细胞染色强度(A)和染色细胞所占的比例(B)乘积(AB)来判定。A：无特异染色=0、轻度染色(淡黄)=1、中度染色(棕黄)=2、强染色(深棕黄)=3;B：阳性细胞数75%计为 4 分。AB：0 分为阴性(-)、14 分为弱阳性(+)、58 分为中度阳性(+)、912 分为强阳性(+)。因 HuR 蛋白在胃癌中免疫反应较强，遂将中强度阳性(+)(+)归为高表达组，将阴性与弱阳性(-)(+)归为低表达组，高表达组用所占总数比例表示阳性表达率。5.
5、统计学处理：所有数据均采用 SPSS for windows 16.0 统计学系统软件处理，HuR 表达及其与胃癌的临床病理因素的分析采用行列表的 2 检验。P 0.05 为差异有统计学意义。结 果1. HuR 在正常胃黏膜、胃癌及其癌前病变中的表达(表 1，图 1)：HuR 蛋白在胃癌中的表达(43.83%)显著高于远癌正常胃黏膜的表达(1.60%)，2=99.203，P0.001。在肠上皮化生和异型增生中HuR 蛋白表达率分别为 40.00%和 40.74%，均显著高于正常胃黏膜(2=73.686、59.428，均 P0.001)，两者与胃癌表达相比，未见统计学意义(2=0.374、0.0
6、94，P=0.541、0.759)。在慢性萎缩性胃炎KKME-专业医学搜索引擎 http:/ P0.05)。HuR 蛋白在正常胃体腺胞质中多为阳性表达(+)，本文未计数，在胃窦腺胞质中多为阴性表达。2. HuR 的表达与胃癌临床病理因素的关系(表 2，图 1)：胃癌中 HuR 蛋白表达与细胞分化程度、Lauren 分型相关，其中高中分化组(51.85%)与低分化组(33.05%)比较，差异有统计学意义(P0.05);肠型胃癌(51.19%)与弥漫型胃癌(35.11%)比较，差异也有统计学意义(P0.05)。 表 1 HuR 在正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中的表达情况
7、表 2 HuR 蛋白表达与胃癌各临床病理因素讨 论HuR 是一种重要的 mRNA 结合蛋白家族 Hu 家族成员之一，Hu 家族是脑脊髓炎副癌综合征在血清中出现抗体的总称。Hu 家族有 4 个成员：HuB(Hel-N1)、HuC、HuD 和 HuR，前三个成员主要在终端分化的神经组织表达并与神经发育有关，而 HuR 是一种广谱mRNA 结合蛋白，在许多组织细胞中广泛表达。HuR 是连接于 3非翻译保守区(3UTR)含有 AREs(富含 A/U 或 AU 序列)的短寿命mRNA，AREs 可通过自体直接脱腺苷化作为基因表达的抑制因素，促使 mRNA 快速衰变降解。而 HuR 能延缓 mRNA 半衰
8、期，抑制其降解，从而增强其转录后翻译能力。在生理状态下，HuR 主要定位在细胞核，功能是与靶基因的 mRNA 结合形成复合物，穿梭到胞质，在此过程中 HuR 保护 mRNA 避免衰变降解6-9;在病理状态下，KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 在胞质表达增加，阻止含 AREs 靶基因脱腺苷化降解过程，延长 mRNA 的寿命，使其蛋白产物异常增加。本研究只针对 HuR 在胞质的表达进行分析探讨。近年来研究发现，HuR 在肿瘤细胞胞质表达水平升高，机制是与富含 AREs 的肿瘤细胞增殖相关的基因mRNA 结合，减少其降解率，延缓其半衰期，从而加强靶因子的翻译表达，继而对肿瘤的增殖分化、细胞凋
9、亡、侵袭转移、血管新生和免疫逃避发挥广泛作用，并且 HuR 目前研究已经证实 HuR 参与多种肿瘤的生成，如乳腺癌、肠癌、宫颈癌、肝癌等8,11,13-14。Kang 等7发现与正常胃黏膜相比，HuR 蛋白在胃癌中表达显著升高，主要定位在胞质，在进展期胃癌中的表达显著高于早期胃癌。本研究发现，从正常胃黏膜慢性萎缩性胃炎肠化生异型增生胃癌，阳性表达率逐渐升高，正常胃黏膜组与肠化生、异型增生、胃癌组分别比较均有统计学意义(P0.001);慢性萎缩性胃炎组与肠化生、异型增生、胃癌组分别比较均有统计学意义(P0.05);慢性萎缩性胃炎与正常胃黏膜比较差异有统计学意义(P0.001)，提示 HuR 在胃
10、癌的发生发展中起一定的促进作用，HuR 可能作为致癌因子参与胃癌癌变过程。本研究中，HuR 表达与 WHO 分型及 Lauren 分型相关，高中分化组胃癌的表达显著高于低分化组，肠型胃癌组显著高于弥漫型胃癌组(P0.05)，与 Mrena 等2运用 216 例胃癌采用同样实验方法研究发现 HuR 胞质表达与肠型胃癌有关相一致;此外在有无淋巴结转移的结果两研究结果一致，都为 HuR 表达与淋巴结转移无关，提示 HuR 可能是参与胃癌的早期事件之一，为进一步阐明KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 导致胃癌发生机制提供了有力证据。Mrena 等3又对 325 例胃癌中 HuR 与 cyclin
11、e A 的免疫组化结果进行了分析研究，发现在HuR 胞质阳性表达的病例中 cycline A 极少出现阴性表达，说明两者存在相关性，提示 HuR 通过对细胞周期的调控来促进胃癌生成。Wang 等15也在肠癌细胞培养中证实 HuR 表达减少时出现 cycline A 蛋白生成的下降。综上所述，作为公认的 mRNA 结合蛋白，HuR 可能参与胃癌发生发展的过程，可能是增强作用于 COX-2、cycline A、VEGF等 mRNA 的翻译能力从而加速致癌过程，运用实验技术阻遏 HuR胞质转移或者直接抑制 HuR 活性可能抑制胃癌发生，从而为指导临床分子靶向治疗提供新思路。(本文图片见光盘)【参考文
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