细菌的革兰氏染色法

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1、实验二实验二 细菌的革兰氏染色法细菌的革兰氏染色法1 1、实验目的实验目的学习细菌的革兰氏染色原理和方法。二、实验原理二、实验原理单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它 的特殊构造等。复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别 染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。革兰氏染色机制：由于 G肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶 剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出， 经沙黄复染呈红色。而 G细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小

2、，通透 性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。3 3、实验材料实验材料大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（24h 培养物） 、革兰氏染色液一套4 4、实验步骤实验步骤1. 涂片2. 固定3. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染 1 分钟，倾去染液，流水冲洗至无 紫色。4. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面 1 分钟，后水洗。5. 脱色：除去残水后，滴加 95%酒精进行脱色约 15-20 秒，后立即用流水冲洗。6. 复染：滴加番红染色液，染 35 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 7. 镜检：观察染色结果并绘图。五、实验结果五、实验结果记录所观察到的两种菌革兰氏染色颜色的差别，并绘图。

3、如图所示，被染为紫色的部分即为金黄色葡萄球菌，红色部分即为大肠杆菌。6 6、问题与讨论问题与讨论要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？哪一步是关键？Why?按照操作顺序来看 1、首先，必须强调的是实验过程中全程的无菌操作：玻片的消毒、接种环的杀菌以及实验 所用材料试管的无菌使用； 2、其次，是金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌的刮取过程中，它们的量一定要适中，以免过多 影响后期观察结果； 3、再者，涂片操作结束后，通过酒精灯的烘烤将细菌固定，要注意控制烘干的程度，防止 细菌全被烧死； 4、接下来的染色过程中，注意各染色剂染色的时间长度，尤其是 95%乙醇脱色的时长，18 秒为适宜时长； 5、最后

4、，就是吸干水分，注意油镜的使用，先在低倍镜下找视野，再转成高倍镜、油镜。关键步骤：我认为是 95%乙醇脱色的这一步。因为如果脱色过度，会使革兰氏阳性菌呈 假阴性，以致观察时整个视野都是红色；如果脱色不够，会使革兰氏阴性菌呈假阳性，以 致观察时整个视野都是紫色，影响观察结果，干扰实验。7 7、实验小结实验小结这次实验让我真真正正感受到了做实验的乐趣。每一个操作步骤都必须精准地完成，少 有偏差，就会对实验结果产生很大影响，就比如我第一次试验就是脱色时间较长，用了 20 秒，以致油镜观察时，视野全是红色；第二次试验则是脱色时间较短，只能依稀看到一点被染成红色的大肠杆菌；第三次则吸取教训，把握每一步，最后看到了紫红相间的视野。 期待下一次实验课。