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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 在膀胱上皮癌中的表达及意义在膀胱上皮癌中的表达及意义作者：李朝争 赵金媛 张祥宏 王华玖 白 杰 关 伟 贾文平 作者单位：(1.河北邢台矿业集团总医院泌尿外科,河北 邢台 054000;2.河北医科大学第二附属医院病理科,河北 050000)【摘要】 目的： 探讨细胞周期蛋白 Skp2 表达与膀胱移形细胞癌生物学行为的关系。方法： 对 73 例膀胱移形细胞癌进行组织学分级及分期，另取 22 例正常膀胱组织作为对照，采用免疫组织化学方法 SP 法检测各例组织中 Skp2 蛋白表达水平，并分析其表达水平与临床病理特征的关系。结果： Skp2 蛋白阳性表达
2、率为50.7%(37/73)， Skp2 蛋白表达与肿瘤组织学分级、病理分期显著相关。结论： Skp2 是评估膀胱移形细胞癌恶性程度，估计预后有价值的指标。【关键词】 膀胱移行细胞癌;Skp2;免疫组织化学;表达The Expression and Significance of Skp2 in Bladder Transitional Cell CarcinomasLI Chaozheng1, ZHAO Jinyuan1,ZHANG Xianghong2,et al1.Department of Obstetrics and Gynecology,General Hospital of Xi
3、ngtai Mining Company,Xingtai,054000,Hebei,China;2.Department of Pathology,Hebei Medical University, Shijiazhuang,050000,Hebei,ChinaKKME-专业医学搜索引擎 http:/ Objective: To investigate the significance of the protein expression of Skp2 in the progression and prognosis of bladder transitional cell carcinoma
4、.Methods: The pathological stage and histological grade were assessed in the 73 cases with surgically resected bladder transitional cell carcinoma. The normal bladder tissue of twentytwo cases was used as control.The expression of Skp2 was tested by immunohistochemical method, and the related clinic
5、al phase and its expression were analyzed.Results: The expression rate of Skp2 was 50.7%. Skp2 expression was related with histological grade and pathological stage of tumors closely.Conclusion: Skp2 are important prognostic factors for patients with bladder transitional cell carcinoma.【KEY WORDS】 B
6、ladder transitional cell carcinoma; Skp2; Immunohistochemistry; Expression膀胱移行细胞癌(BTCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,具有生长缓慢、多发性、复发性等临床特点。它的发生发展受多种基因的调控，在细胞周期中，G1S 期转换的调控是一关键点， Skp2 和 P27 是近年来新发现细胞周期调控基因，主要参与G1S 期调控，是细胞从 G1S 期转换的主要限速因子之一。Skp2 是 Fbox 蛋白家族中重要的一员，通过泛素化降解P27 蛋白，参与细胞周期调控，与肿瘤发生发展和预后密切相关1。本实验采用免疫组化技术对 P27
7、和 Skp2 在膀胱移行细胞癌及其癌旁或正常膀胱粘膜组织中的表达水平及相互关系，探讨 Skp2 与临床病KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 材料与方法1.1 一般资料收集我院 19982004 年间手术切除后经病理确诊为膀胱移行细胞癌具有完整临床病理资料及组织标本共 73 例(TURBt 51 例、膀胱部分膀胱部分切除 15 例、根治性膀胱切除 7 例)病例。另外，选用 22 例非肿瘤粘膜供对照研究(其中 12 例为距肿瘤 2cm 以上的癌旁正常粘膜，另 10 例为正常膀胱粘膜)。全部标本均进行P27 和 Skp2 蛋白检测。1.2 试剂与方法Skp2 鼠抗人单克隆抗体(克隆号 1G12
8、E9),P27 鼠抗人单克隆抗体(克隆号 DCS72.F6)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。标本采用链霉卵白素过氧化物(SP)法，具体操作按说明书进行，切片常规脱蜡至水，微波修复抗原，3%过氧化氢处理10min，抑制内源性过氧化物酶活性。正常羊血清处理 15min 减少非特异性背景。Skp2 和 P27 单克隆抗体(抗体稀释比 150)，一抗 4孵育过夜，二抗处理 15min 链霉菌抗生素蛋白过氧化物酶复合物处理 15min，DAB 显色来自水冲洗终止反应，苏木精复染、脱水、透明、封化。用磷酸盐缓释液替代一抗作为阴性对照，用已知乳腺癌作为阴性对照。1.3 结果判定Skp2、P27 以细胞核
9、出现棕黄色颗粒为阳性细胞2，在KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 倍光镜下观察 10 个视野，计数 1000 个肿瘤细胞计算阳性细胞百分率。1.4 统计分析采用 SAS 统计分析软件，进行单因素方差分析临床病理资料与免疫组化结果以及 Skp2 和 P27 之间相关性，检验水准 为0.05，P0.05 为统计学差异有显著性。2 结果2.1 Skp2 在正常膀胱粘膜与膀胱移行细胞癌组织中的表达情况在正常 22 例粘膜中 Skp2 阳性表达率 13.6%(3/33)。在 73例膀胱移行细胞癌组织中，Skp2 蛋白阳性表达率 50.7%(37/73)，显著高于正常粘膜(P0.05)。2.2 Sk
10、p2 蛋白表达与膀胱移行细胞癌临床病理的特殊关系Skp2 蛋白表达与膀胱移行细胞癌肿瘤组织分级显著相关(2=11.55, P0.05), 与临床分期显著相关(2=10.5,P0.05), 有淋巴转移组 Skp2 蛋白水平显著高于无淋巴转移组(P0.05)。3 讨论P27 是调节细胞周期的周期素激酶抑制因子，P27mRNA 在正常细胞周期中是恒定的，蛋白水平在 G0，G1 期最高，在 S、M期较低。P27 对细胞周期 G1S 节点有重要的调控作用，抑制细胞的增殖。当肿瘤细胞受到癌性生长信号刺激时，P27 水平降低促进 G1 期的进展，增加细胞增殖的速度，促进肿瘤的发生发展。KKME-专业医学搜索
11、引擎 http:/ P27 已在多种肿瘤中观察到，如：淋巴瘤、乳腺癌、结肠癌、食管癌、前列腺癌、肝癌等。在非小细胞肺癌、口腔磷状细胞癌、大肠癌和前列腺癌以及乳腺癌的研究中证实，P27 水平越低预示着肿瘤预后越差37。Skp2 基因染色体 5p113，是 Fbox 蛋白家族中成员之一，在泛素蛋白酶体途径中能特异性识别底物，并与之结合使之进入泛素化降解。Skp2 通过对多种靶蛋白的泛素化降解与细胞周期调控及肿瘤发生发展和预后密切相关。目前研究发现 P27 蛋白水解主要是通过泛素化-蛋白水解体途径完成8，P27 的水平取决于 Skp2 依赖的蛋白水解，细胞由静止状态进入增殖状态需要 P27 的降解。
12、Skp2是正常或异常细胞进入 S 期必须的， Skp2 首先在 G1S 期之间出现，在 SG2 期升高，在 M 期快速下降。吕增会等9用免疫组化方法，在对 69 例胃癌组织 28 例正常胃粘膜组织检测Skp2 的表达水平时发现正常粘膜组织中 Skp2 表达水平极低，而在胃癌组织中表达水平明显增加。两者有显著差异(P0.05)， 且 Skp2高表达患者预后较差。Yang 等10发现 Skp2 在正常的前列腺腺上皮和基底细胞中较低，而在癌前病变和前列腺癌标本中显著增高，且Skp2 的表达与临床分期、转移正相关。郑祥毅等11应用同样方法检测 41 例前列腺癌和 20 例良性前列腺增生组织 Skp2
13、表达情况亦有同样发现。本研究发现 Skp2 在正常膀胱粘膜中呈低表达，在膀胱移行细胞癌组织中呈高表达，与肿瘤分级、临床分期呈正相关，差异有显著性。浸润型、有淋巴转移组中 Skp2 表达明显高于表浅型和无KKME-专业医学搜索引擎 http:/ Skp2 与膀胱癌的发生有关，检测其蛋白表达水平对判断肿瘤恶性程度、转移情况、估计预后有一定意义。本研究结果发现在 BTCC 中 P27 表达随 Skp2 的上升而降低，两者呈负相关。两者在细胞周期进展中的平衡失调，导致膀胱移行细胞癌发生发展。联合检测其蛋白表达水平对判断肿瘤恶性程度、转移情况、估计预后具有重要意义。靶向 Skp2 的抗癌治疗预防膀胱癌复
14、发具有广泛前景。表 1 Skp2 在 BTCC 和正常膀胱粘膜组织中的表达表 2 Skp2 在、BTCC 中的表达【参考文献】1 Carrano AC,Eytan E,Hershko A,et al.Skp2 is required for ubiquitin mediated degradation of the CDK inhibitor P27J.Nat Cell Boil,1999,1(4):1931992 Yang G, Agala G, Marzo AD, et al. Elevated Skp2 protein expression in human prostate cance
15、r;association with loss of the cyclindependent kinase inhibitor P27 and PTEN and with reduced recurrencefree survivalJ.Clin Cancer Res,2002,8(11):341934263 吴灵，沈镇宙，邵志敏.乳腺癌表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物 P27kip1 的预后意义J.中华肿瘤杂志， 1999, 21(4):2652684 Tam P,Cavalla P,Piva R,et al.P27/kip1 expression in mastocarcionma and its possible prognostic roleJ.Cancer Res,1997,57(6):1259KKME-专业医学搜索引擎 http:/ Loda M,Cukor B,Tam S W,et al.Iincreased proteasomedependent degradation of the cyclindependent kinase inhibitor p27 in aggressive colorectal carcinomasJ.Nat Med,1997,3(2):2316 Esposito V,Baldi A,
