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1、注射用水微生物限度检查方法验证方案文件编码：项 目姓 名签 名日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份注射用水微生物限度检查方法验证目录1、注射用水微生物限度检查方法验证计划2、注射用水微生物限度检查方法验证小组名单3、注射用水微生物限度检查方法验证方案4、注射用水微生物限度检查方法验证培训记录5、注射用水微生物限度检查方法验证附属记录6、注射用水微生物限度检查方法验证报告7、注射用水微生物限度检查方法验证合格证书注射用水微生物限度检查方法验证计划根据我公司认证领导小组的要求及验证委员会的安排，对注射用水微生物限度检查方法进行验证，具体安排如下：一、年月日年月日，制定验证方案，由注射用水微
2、生物限度检查方法验证小组组长负责起草。二、年月日年月日，验证方案讨论、修改、审批和培训。三、年月日年月日，验证工作实施。 四、年月日年月日，根据验证情况与记录，书写验证报告。五、年月日年月日，验证报告审核批准，合格证发放。注射用水微生物限度检查方法验证小组名单组 长： 成 员： 注射用水微生物限度检查方法验证方案 页码： 1 / 3一、一、 目的目的中华人民共和国药典2010 版二部规定注射用水微生物限度检查采用薄膜过滤法，确认该方法适合于本公司注射用水中细菌、霉菌及酵母菌数测定。二、二、 适用范围适用范围本公司注射用水中细菌、霉菌及酵母菌的测定。三、三、 内容内容1. 概概述述 当建立微生物
3、限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌的计数方法验证 ，已确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 2. 验证项目及认可标准验证项目及认可标准对各试验菌的回收率逐一进行验证，试验组的菌回收率不得低于 70%（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）。3. 验证依据验证依据 中华人民共和国药典2010 版二部附录 XI J 微生物限度检查法。4. 验证方法与内容验证方法与内容 4.1. 验证方法 采用薄膜过滤法进行细菌、霉菌及酵母菌的测定。4.2. 验证试验分 3 组，
4、至少应进行 3 次独立的平行试验，并分别计算供试品组和对照组试验的菌回收率。4.3. 仪器设备4.3.1. TMQ.R-3870 型台式灭菌器 4.3.2. HPX-9272MBE型电热恒温培养箱 (3035)4.3.3. 单人净化工作台 4.3.4. MJ-160 霉菌培养箱 (2328)4.4. 培养基4.4.1. 营养肉汤培养基4.4.2. 营养琼脂培养基4.4.3. 玫瑰红钠琼脂培养基4.4.4. 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基注射用水微生物限度检查方法验证方案 页码： 2 / 34.4.5. 改良马丁培养基4.5. 验证过程与方法4.5.1. 取样：由质量部生测室检验人员负责取样。用灭
5、菌好的锥形瓶取注射用水（注A-0、注 A-7、注 B-8、注 B-0）取样点水样各 1500ml,立即送质量部生测室检验。4.5.2. 菌液制备 a. 取经 3536培养 1824 小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物 1ml 加入到 9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10 倍稀释至 10-610-7约 50100cfuml 的菌悬液备用。b. 取经 2425培养 2448 小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物 1ml 加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10 倍稀释至 10-5约为 50100cfuml 的菌悬液备用。c. 取经 2425培养一周的黑曲霉菌斜面培养
6、物，加 35ml 含 0.05%（mlml）聚山梨脂 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，然后吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集孢子悬液至另一无菌试管内作为菌原液，取此孢子悬液 1ml 加到 9ml 含 0.05%（mlml）聚山梨脂 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液中，10 倍稀释至 10-5约为 50100cfuml 的菌悬液备用。4.5.3. 菌液计数（每种菌液至少接种 2 个平皿）a. 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌各 1ml 分别接种至营养琼脂培养基，置 3035培养 48 小时计数；b. 取白色念珠菌、黑曲霉各 1ml 分别接种至玖
7、瑰红钠琼脂培养基，置 2328培养 72 小时计数；c. 取白色念珠菌 1ml 接种至酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基置 2328培养 72小时计数。d. 计数结果见验证记录4.5.4. 验证方法a. 试验组 取注射用水 100ml 和 50100cfu 试验菌，过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。每株试验菌平行制备 2 个平皿，按薄膜过滤法测定其菌数，每片滤膜上的菌落数应不超过 100cfu。b. 菌液组 取 50100cfu 试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，按平皿菌落计数法测定其菌数。c. 供试品对照组 取注射用水 100ml，过滤，取
8、出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养注射用水微生物限度检查方法验证方案 页码： 3 / 3基平板上培养。同法，细菌、霉菌及酵母菌各制备 2 个平皿，测定供试品本底菌数。d. 验证结果见验证记录。5. 组织实施组织实施5.1. 验证机构的组成5.1.1. 公司验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织、审批验证方案和验证报告、发放验证证书。5.1.2. 注射用水微生物限度检查方法验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调实施，负责验证样品检测，完成各项记录，根据检验和确认结果进行评定、完成验证报告。部门部门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写报告操作实施质量部取样、检验、出报告操
9、作实施方案审核验证 委员会方案审定、批准、实施、发 放验证合格证方案批准5.2. 实施时间为：年月日年月日。四、四、 附件及相关表格文件附件及相关表格文件注射用水微生物限度检查方法验证报告文件编码：项 目姓 名签 名日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份注射用水微生物限度检查方法验证报告页码：1/5一、一、 验证概述验证概述为保证药品质量，根据本公司验证工作领导小组的要求及验证委员会的安排，对 C/D 生产线注射用水系统进行微生物限度检查方法验证。1. 验证组织与实施1.1. 验证小组成员及职责分工部门部门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写报告操作实施 质量部取样、检验、出报告
10、操作实施方案审核验证 委员会方案审定、批准、实施、发放 验证合格证方案批准1.2. 本验证由质量部负责并由相关人员根据注射用水微生物限度检查方法验证方案所规定的方法与步骤实施。二、二、 各项目验证结论各项目验证结论1. 验证用培养基 2. 验证用菌株：来源于贵州省药品检验所名称生产厂家批号配制批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基验证菌株菌株代数增菌培养基培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌注射用水微生物限度检查方法验证报告页码：2/53. 各取样点菌落计数回收率 验证结果见下表独立试验一 ：各试验
11、组菌落计数（回收率%） 取样点 试验日期 年 月 日 报告日期 年 月 日验证菌株平皿号试验组CFU100ml菌液组CFU/ml供试品对照组CFU100ml试验组菌回收率（%）12大肠埃希菌(营养琼脂) 平均值12金黄色葡萄球菌(营养琼脂) 平均值12枯草芽孢杆菌(营养琼脂) 平均值12白色念珠菌(玖瑰红钠琼脂培养基)平均值12黑曲霉(玖瑰红钠琼脂培养基)平均值12白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）平均值结论： 试验人 复核人 独立试验二：各试验组菌落计数（回收率%） 取样点 试验日期 年 月 日 报告日期 年 月 日验证菌株平皿号试验组CFU100ml菌液组CFU/ml供试品对照组C
12、FU100ml试验组菌回收率（%）大肠埃希菌1注射用水微生物限度检查方法验证报告页码：3/52(营养琼脂)平均值12金黄色葡萄球菌(营养琼脂) 平均值12枯草芽孢杆菌(营养琼脂) 平均值12白色念珠菌(玖瑰红钠琼脂培养基)平均值12黑曲霉(玖瑰红钠琼脂培养基)平均值12白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）平均值结论： 试验人 复核人 独立试验三 ：各试验组菌落计数（回收率%） 取样点 试验日期 年 月 日 报告日期 年 月 日验证菌株平皿号试验组CFU100ml菌液组CFU/ml供试品对照组CFU100ml试验组菌回收率（%）12大肠埃希菌(营养琼脂) 平均值1金黄色葡萄球菌(营养琼脂)
13、2注射用水微生物限度检查方法验证报告页码：4/5平均值12枯草芽孢杆菌(营养琼脂) 平均值12白色念珠菌(玖瑰红钠琼脂培养基)平均值12黑曲霉(玖瑰红钠琼脂培养基)平均值12白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）平均值结论： 试验人 复核人 独立试验四 ：各试验组菌落计数（回收率%） 取样点 试验日期 年 月 日 报告日期 年 月 日验证菌株平皿号试验组CFU100ml菌液组CFU/ml供试品对照组CFU100ml试验组菌回收率（%）12大肠埃希菌(营养琼脂) 平均值12金黄色葡萄球菌(营养琼脂) 平均值12枯草芽孢杆菌(营养琼脂) 平均值1白色念珠菌(玖瑰红钠琼脂2注射用水微生物限度检查
14、方法验证报告页码：5/5培养基)平均值12黑曲霉(玖瑰红钠琼脂培养基)平均值12白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基）平均值结论： 试验人 复核人 三、三、 建议、结果分析和验证总结建议、结果分析和验证总结1. 建议1.1. 加强生测室检验人员的操作技能培训，使检验过程标准化，程序化。1.2. 当注射用水系统在日常微生物限度检测时出现异常的检测结果时，应进行实验室偏差处理或应再次进行注射用水微生物限度检查方法的再验证。2. 结果分析及验证总结2.1. 试验菌计数结果判定 各试验菌稀释后含菌量均达到 50100cfu/ml，符合试验要求。2.2. 根据验证结果， 4 个取样点水样本次试验各试验组的菌回收率均不低于 70%，按标准规定，本次试验结果符合规定。2.3. 根据上述验证过程及结果分析，本公司生测实验室采用薄膜过滤法对注射用水的微生物限度检查符合中华人民共和国药典2010 年版二部的要求，日常检测可以采用此检验方法进行注射用水的微生物限度检查。
