《常见实验用溶液的配制方法 [1]》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常见实验用溶液的配制方法 [1]（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺（Spermidine）: 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L 精胺（Spermine）：溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定 容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加 100mg 的牛血清蛋白（组分 V 或分子生物学 试剂级，无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而
2、不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血 清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存 于-20。1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水，分成 小份贮存于-20。或转移 100mg 的二硫苏糖醇 至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（potassium acetate）：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水 定容到 100ml。1mol/L 氯化钾（KCl）：溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到 100ml。3mol/L 乙酸钠（so
3、dium acetate）：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中， 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形 成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA2H2O 和 20g 的 NaOH，并溶 于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH（6.8- 8.2），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中
4、。25mg/ml IPGT：溶解 250mg 的 IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于 10ml 水 中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl26H2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF：溶解 174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中， 定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中， 轻轻摇动，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分 装成小份贮存于-20
5、。10mg/mlRnase（无 DNase）（DNasefree RNase）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮 沸 15min，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 TrisHCl 调 pH 至 7.5，于-20贮存。 （配制过程中要戴手套）5mol/L 氯化钠（NaCl）：溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N 氢氧化钠（NaOH）：溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中（磁 力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：
6、称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧 杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终 体积为 100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水，用磁力搅 拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解 25mg 的 Xgal 于 1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100Denhardt 试剂（Denhardts regent）成分及终浓度配制
7、 100ml 溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400 型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（组分 V） 水 2g 2g 2g 加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮 存。10标准 DNA 连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 盐酸亚精胺（可选） 0.5mg/ml BSA（组分 V） （可
8、选） 水 5ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液，-80可贮存至少 6 个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP
9、水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二 醇 2.5mol/L 氯化钠 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯 化钠 补足 100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml，用磁力搅拌器搅拌 溶解。20SSC成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二 水）
10、 3mol/L 氯化钠 水 88.2g 175.3g 补足 1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约 0.9L 水中，加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为 7.0，用水补足体积至 1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1。在 37温浴至 少 12h，然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（deionized formamide） 直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用
11、磁力搅拌 器轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂 后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer） 按照下表所给定的体积，混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L 磷酸 氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢 钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解 138g 于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷 酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠 （ml）1mol/L 磷酸氢二钠 （ml）最
12、终 pH 值877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2TE（用于悬浮和贮存 DNA）成分及终浓度配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8ml Tr
13、is 缓冲液（Tris-HCl buffer） 将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中，再根据所要求的 pH（25下）加一定 量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱 1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml 的冰乙酸（
14、17.4 mol/L） 200ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足 1L 5Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱 445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足 1L 染料1溴酚蓝（bromophenol blue） 加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF（xylene cyanole FF） 溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 1
15、00ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide） 小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直 到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA 18聚蔗糖（400 型） 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青 FF 水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g 15mg 25mg 补足到 10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存
16、）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA 15聚蔗糖（400 型） 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g 补足到 10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青 FF 15聚蔗糖（400 型） 水 2.5ml 1溴酚蓝 2.5ml 1二甲苯青 FF1.5g 补足到 10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA 50甘油 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0
