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1、实验四：细菌的接种、培养和分离技术实验四：细菌的接种、培养和分离技术 一、实验目的与要求： （1）掌握从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离培养细菌的方法，从而获得若干 种细菌纯培养技能 （2）掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法。 （3）掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等。 二、实验原理 在土壤、水、空气或人及动、植物体中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起， 当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的微生物类群中分离它，以得到只含有这 一种微生物的纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得某种微生物的纯培养。一般是根据该微生
2、物对营养、酸碱度、氧等条件要求 不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长，而抑制其他菌 生长的环境，从而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法 或平板划线分离法等分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 三、实验器材三、实验器材 1、牛肉膏蛋白胨培养基 2、盛 9ml 无菌水的试管，盛 90m1 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，1ml 和 5ml 无菌 吸管，无菌培养皿； 3、接种环，土样，酒精灯等。 四、操作步骤四、操作步骤1、倒平板 将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，并标明培养基的名称。2、贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接
3、种人姓名等。贴在 距试管口径 2-3 厘米的位置。3、点燃酒精灯。4、接种 取接种环 右手拿接种环(如握钢笔一样)、在火焰上将环端烧红灭菌，然后将有可能 伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。环冷却 将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触边壁，使其冷却。取菌种 待环冷却后轻轻沾取经稀释 10 倍的土壤悬液-环，然后将接种环移出菌种管， 注意不要使环的部分碰到管壁，取出后不可使环通过火焰。接种 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线。划线的方法很多，但无论哪 种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用的划 线方法有下列二种：用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先
4、在平板培养基的一边作第一次平行划线 3-4 条，再转动培养皿约 70角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部 分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次 平行划线部分作第四次平行划线(图 A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温室培养。将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线(图 B)。划线完毕后，盖上皿盖， 倒置温室培养。环灭菌 将接种环烧红灭菌。 5、挑菌 将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上，分别置 25和 28温室中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查 是否是单一的微生物，若有其他杂菌混杂，就要再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。四、注意事项四、注意事项1、实验操作过程中无菌操作。
