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1、 拟黑多刺蚁论文：拟黑多刺蚁拟黑多刺蚁论文：拟黑多刺蚁 acetylcholinesteraseacetylcholinesterase 基因基因的克隆的克隆 mRNAmRNA 水平表达及其与发育相关性研究水平表达及其与发育相关性研究【中文摘要】乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE, EC 3.1.1.7)在生物体内能特异性催化乙酰胆碱,终止神经递质对突触后膜的刺激作用,保证信号在生物体内的正常传递。随着研究的深入,越来越多的证据表明乙酰胆碱酯酶有着更为广泛的生理作用,如在非神经细胞中参与细胞的增殖、分化、细胞骨架的形成、促进神经细胞突触的生长、促进血小板和血细胞
2、的生成、参与细胞凋亡等。乙酰胆碱能神经元、神经纤维的减少与多种病变性疾病引起的认知障碍也有关系。拟黑多刺蚁隶属于膜翅目(Hymenoptera),蚁科(Formicidae),多刺蚁属(Polyrhachis),是一种典型的社会性昆虫,其群体具有多态现象,品级分化为工蚁、雌蚁和雄蚁,行为复杂、分工明确,因此它具有社会性的特征,具有高度复杂的神经系统,是研究昆虫发育、行为调控和神经功能方面很好的实验材料。本实验以拟黑多刺蚁为实验材料,采用 RT-PCR,5与 3RACE 技术,克隆了 ace的全长 cDNA 序列,利用生物信息学方法对其进行了序列分析、进化关系分析和功能预测；应用实时定量 PCR
3、 技术对 ace 在拟黑多刺蚁体内的 mRNA 水平表达进行了相对定量。所获实验结.【英文摘要】The functions of Acetylcholinesterase include the differentiation, migration and formation of synapses in nerve cells, proliferation and differentiation in hematopoiesis, as well as growth regulation in tumorigenesis. Usually the neurotransmitter acety
4、lcholine (ACh) can be hydrolyzed by Acetylcholinesterase (AChE, EC 3.1.1.7) and terminating neural excitement at postsynaptic membranes. The decrease in acetylcholine neurons and nerve fibers are related to cognitive impairment caused by variety of diseases.【关键词】拟黑多刺蚁 乙酰胆碱酯酶 RACE 实时定量 RT-PCR【英文关键词】P
5、olyrhacis vicina Roger acetylcholinesterase RACE Real-time quantitative RT-PCR 【索购全文索购全文】联系联系Q1Q1：138113721138113721 Q2Q2：139938848139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务. .保过包发保过包发【目录】拟黑多刺蚁 acetylcholinesterase 基因的克隆 mRNA水平表达及其与发育相关性研究 摘要 3-5 Abstract 5-6 第一章 前言 10-18 1.1 乙酰胆碱酯酶简述 10 1.2
6、 乙酰胆碱酯酶在动物体内的分布 10-11 1.3 乙酰胆碱酯酶的功能 11-13 1.4 乙酰胆碱酯酶的分子结构 13-14 1.5 乙酰胆碱酯酶的编码基因 14-15 1.6 拟黑多刺蚁简述 15-16 1.7 研究目的和意义 16-17 1.8 研究目标和整体路线 17-18 第二章 拟黑多刺蚁 Pv-ace 基因 cDNA 序列的克隆 18-39 2.1 材料 18-20 2.1.1 动物材料 18 2.1.2 仪器设备 18 2.1.3 主要实验试剂 18-19 2.1.4 常用溶液配置 19 2.1.5 琼脂糖凝胶的制备 19-20 2.2 方法 20-33 2.2.1 RNA 的
7、提取与鉴定 20-21 2.2.2 第一链 cDNA的合成 21-22 2.2.3 引物设计与合成 22-23 2.2.4 拟黑多刺蚁 Pv-ace 基因全长序列扩增 23-27 2.2.5 拟黑多刺蚁 Pv-ace cDNA 序列 5端的扩增(5RACE) 27-31 2.2.6 拟黑多刺蚁 Pv-ace cDNA 序列 3端的扩增(3RACE) 31-32 2.2.7 序列的拼接 32-33 2.3 结果与分析 33-39 2.3.1 总 RNA 的提取 33 2.3.2 拟黑多刺蚁 Pv-ace 基因全长 cDNA 序列的扩增 33-35 2.3.3 拟黑多刺蚁 Pv-acecDNA 序
8、列开放阅读框分析 35-39 第三章 拟黑多刺蚁 Pv-AChE 蛋白序列的生物信息学分析 39-50 3.1 分析方法与结果 39-50 3.1.1 蛋白序列的同源性分析 39-40 3.1.2 蛋白序列的系统进化分析 40-42 3.1.3 蛋白质的保守结构域分析 42 3.1.4蛋白质理化性质分析 42-45 3.1.5 疏水性分析 45 3.1.6 信号肽分析 45-47 3.1.7 蛋白质二级结构分析 47-48 3.1.8 蛋白质三维结构分析 48-50 第 4 章 荧光实时定量 PCR 技术检测拟黑多刺蚁Pv-ace 基因 mRNA 水平表达 50-60 4.1 实验材料和方法
9、50 4.1.1 生物材料 50 4.1.2 主要试剂与仪器 50 4.2 实验方法 50-53 4.2.1 总 RNA 的提取及第一链 cDNA 的制备 50-51 4.2.2引物设计 51 4.2.3 模板及引物质量检测 51-52 4.2.4 SYBRGreen 实时定量 PCR 实验 52-53 4.2.5 数据分析方法 53 4.3 结果与分析 53-60 4.3.1 引物的专一性检测 53-55 4.3.2 模板质量的检测 55-56 4.3.3 拟黑多刺蚁不同品级、不同发育阶段虫体 Pv-ace mRNA 的相对表达 56-60 第五章 讨论 60-64 5.1 关于 RNA 的提取 60 5.2 PCR 反应条件的选择和 RACE 技术 60-61 5.3 生物信息学技术的应用 61-62 5.4 Pv-ace 在拟黑多刺蚁不同品级和不同发育阶段之间的定量表达分析 62-64 第六章 总结 64-66 参考文献 66-76 致谢 76-77 攻读硕士学位期间的研究成果 77
