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1、一一.培养基培养基1.SS（生长抑素）培养基 适用范围适用范围适用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离培养 主要成分主要成分选择适于沙门氏菌、志贺氏菌生长的营养物质，添加抑制其它杂菌 生长的抗生素配制而成。 主要结构主要结构由葡萄糖、蛋白胨、琼脂等原材料灭菌后，浇注于无菌聚乙烯树脂 平皿而成。 操作步骤操作步骤 1、从冰柜中取出所需数量的培养基复温； 2、从溃疡处采集标本后尽快划线接种。 3、将接种好的培养基置 37培养 1824 小时 2.伊红美蓝培养基 培养基成分培养基成分 乳糖 1g 胰蛋白胨 0.5g NaCl 0.5g K2HPO4 2g2伊红溶液 2ml0.5美蓝溶 液 1ml 琼脂 1.5
2、2g 蒸馏水 100ml 自然 pH 或 pH 7.2 配制方法配制方法 （1）称量 称取培养基各成分所需量。 （2）溶化 在烧杯中加入约 2/3 所需水量，依次逐一溶化培养基各成分。 （3）定容。 （4）调 pH。 （5）按每 100ml 培养基加入 2ml 2伊红溶液和 1ml 0.5美蓝溶液。 （6）加琼脂 加热融化并补足失水。 （7）分装、加塞、包扎。 （8）高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 100Pa 灭菌灭菌 20min。 3.麦康凯培养基 成份：成份：蛋白胨 20 克 氯化钠 5 克乳糖 10 克 琼脂 20 克H2O 1000 毫升 1%中性红溶液 3-4 毫升1%结晶紫 01 毫升
3、PH74除中性红临时用时加入外，其余均高压灭菌备用除中性红临时用时加入外，其余均高压灭菌备用二二.细菌学个论细菌学个论1.革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌（1）葡萄球菌属 致病性葡萄球菌常引起各种化脓性疾病、败血症或脓毒败血症。 一般特征：一般特征：无芽孢，无菌毛，有的形成荚膜或黏液层。革兰氏阳性，但衰老、 死亡或被白细胞吞噬以及耐青霉素的菌株呈阴性。 分类分类：3 种，金黄色（致病性强） ，白色（致病性比较弱） ，柠檬色（不致病） 葡萄球菌。 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌蛋白抗原蛋白抗原：所有人源菌株都含有葡萄球菌蛋白 A（SPA） 。SPA 能与人，猴，猪， 犬及所有哺乳动物的免疫球蛋白的 F
4、c 段非特异性结合，结合后的 IgG 仍能与相 应抗原进行特异性的反应。 药物敏感性药物敏感性：对磺胺类、青霉素、土霉素、红霉素、新霉素等抗生素敏感，但 是易产生耐药性。 致病性及毒力因子致病性及毒力因子：常引起两类疾病，一是化脓性疾病。另一类是毒素性疾病， 被葡萄球菌污染的食物或饲料一起人或动物的中毒性呕吐、肠炎及人的毒素休 克症等。 主要的毒力因子是毒素及酶： a 毒素毒素，又叫 a 溶血素。属于穿孔毒素，是外毒素，经 CH2O 处理后成为 内毒素。 肠毒素肠毒素：是结构相似的一组蛋白质，耐热抗酸，能经受住 100 度 30min 或 胃蛋白酶的水解。 凝固酶凝固酶：凝固酶结合在菌体表面，
5、它们能使含有抗凝剂的家兔或人的血浆 凝固。检测葡萄球菌的凝固酶是鉴别菌株的重要指标，致病株多数是凝固酶阳 性，非致病株则为阴性，但近年来发现后者亦有致病性。 此外，还有杀白细胞酶杀白细胞酶和透明质酸酶透明质酸酶。 生物学诊断生物学诊断：1.生长现象。2.生化反应.3.毒素检查（小猫或是家兔） P204（2）链球菌属）链球菌属分类：按溶血能力分类： 型溶血链球菌型溶血链球菌：在菌落周围形成不透明的草绿色溶血环，红细胞未溶解，血 红蛋白变成绿色。这种细菌致病力不强，多为条件性致病菌。 型溶血链球菌型溶血链球菌：菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。这类菌 致病力强，常引起人及动物的各种疾病
6、。 （与葡萄球菌类似） 型溶血链球菌型溶血链球菌：菌落周围无溶血现象，一般为非致病菌。形态与染色形态与染色 一般致病性链球菌的链比较长，非致病菌株较短。而成双出现的是容易是葡萄 球菌。 特性 只有链球菌才能分解菊糖，而葡萄球菌能在高渗环境中生长。 致病性链球菌细胞壁上的脂磷壁酸（LTA）等与动物皮肤及黏膜表面具有 高度的亲和力，使细菌容易吸附于口腔，咽部的黏膜上皮。其荚膜成分、M 蛋 白等具有抗吞噬作用，均有利与细菌发挥致病作用。 微生物学诊断微生物学诊断 在链球菌败血症样、猪等动物组织涂片中，往往成双球状，具荚膜，以瑞氏 或姬姆萨染色比 G 氏染色清楚，与巴氏杆菌两极染色不同，而在腹腔或心包
7、液 等组织液中则呈长链，但荚膜不如组织涂片中明显。 （注意区别链球菌和巴氏杆 菌）2.肠杆菌科肠杆菌科沙门氏菌属是寄生与人和动物肠道内的无芽孢直杆菌，G 阴性，绝大多数发酵葡萄糖产酸产气，在三糖铁琼脂上常产生 H2S。并且绝大多数的沙门氏菌 对人和动物有致病性。 沙门氏菌耐高盐，在腌制品中可存活 2-3 个月，对氯霉素，土霉素较敏感。所有沙门氏菌不能发酵乳糖，而大肠杆菌可以。 沙门氏菌病是一种很重要的畜共患病：败血症，胃肠炎，以及其他部位局 部炎症。3.巴氏杆菌科巴氏杆菌科（1）巴氏杆菌属）巴氏杆菌属 多杀性巴氏杆菌：主要使动物发生出血性败血症或传染性肺炎。为球杆状 或短杆状，两段钝圆，单个存
8、在有时成双，瑞氏染色个美蓝染色呈典型的两极 着色，无鞭毛、芽孢，G 阴性，需氧或兼性厌氧。普通培养基上生长贫瘠，在 麦康凯培养基上不生长，37 度，PH7.2-7.4 在血清琼脂平板上培养得淡灰白色， 闪光的露珠状小菌落，无溶血现象，在血清肉汤中培养，开始轻度浑浊，4-6d 后液体变清朗，管底出现粘稠沉淀，震摇后不分散，表面形成菌环，触酶和氧 化酶实验均呈阳性，甲基红、VP 实验均为阴性，产生 H2S，氨。 致病性：急性型 出血性败血症亚急性 出血性炎症（在黏膜、关节等处）慢性 萎缩性鼻炎（猪羊） 关节炎 局部化脓性炎症4.G 阴性需氧杆菌阴性需氧杆菌布氏杆菌，又名布鲁菌，细菌呈球状，球杆状或
9、短杆状，新分离者呈球状， 多单在，很少成双，不形成荚膜和芽孢，无鞭毛，G 阴性，姬姆萨染色紫色， 专性需氧，初次分离培养需 5%-10%CO2，37 度，PH6.6-7.4。 主要侵害生殖系统，造成母畜流产，人畜共患病。 致病性：不产生外毒素，有毒性较强的内毒素（豚鼠最易感） 变态反应检查：本法适用于动物的大群检疫，主要用于绵羊和山羊，其次是猪。 凝集反应、补体结合反应、变态反应中，变态反应时间最长。5.G 阳性无芽孢杆菌阳性无芽孢杆菌丹毒丝菌属 猪丹毒丝菌属：直或稍弯的细杆菌，两端较圆，在普通琼脂培养基和普通肉汤 培养基上生长不良，血琼脂平皿上 37 度，PH7.2-7.6，24 小时可形成
10、湿润、光 滑、透明的灰白色、露珠样圆形小菌落并形成 溶血环。在麦康凯培养基上不 生长。在肉汤中中呈轻度浑浊，有少量白色粘稠沉淀，不形成菌膜和菌环。6.G 阳性产芽孢杆菌阳性产芽孢杆菌（1）炭疽芽孢杆菌）炭疽芽孢杆菌：惯称炭疽杆菌，为 G 阳性大杆菌，无鞭毛、不运动，芽 孢为椭圆形，位于菌体中央，芽孢囊不大于菌体，可形成荚膜，在动物血液中， 此菌单独或是呈 2-5 个相连的短链，菌体矢直，相连的细菌呈竹节状，围绕以 丰厚的荚膜。荚膜具有较强的抗腐败能力，当菌体因腐败而消失后仍有残留荚 膜显示，称之为“菌影” 。在培养基中常形成长链，培养 18-24h 后形成芽孢， 普通培养基上不形成芽孢。为需氧
11、菌，厌氧条件下也可生长，最适温度是 30-37 度，PH7.2-7.6。在普 通培养基上培养 24 小时后，强毒株形成灰白色不透明，大而扁平、表面干燥、 边缘成卷发状的 R 型菌落。无毒或弱毒菌株形成小而隆起的表面比较光滑湿润、 边缘较整齐的 S 型菌落。一般不形成溶血环，但个别会轻微溶血。 在普通肉汤中培养 24 小时，上部液体仍清朗，管底有絮状沉淀。明胶穿刺培养 中，整个生长物像倒立的雪松状，经 2-3d 后，明胶上部逐渐液化呈漏斗状。 在含青霉素 0.5IU/ml 的培养基中，幼龄炭疽杆因细胞壁的肽聚糖的合成受到抑 制，形成原生质体相互连接成串，称为“串珠反应” 。 发酵葡萄糖，产酸不产
12、气，VP+，吲哚-，不产生 H2S。 （2）肉毒梭菌）肉毒梭菌，一种腐生性细菌，多成直杆状，单在或成双，G 阳性，芽孢卵 圆，位于菌体近短，大于菌体直径。专性厌氧，6.5%NaCl、20%胆汁、PH8.5 一直其生长，在普通培养基上能生长。在血琼脂平板上形成不规则的菌落，常 常有斑状或花叶状的中心结构， 溶血。家畜中马最易感，猪最迟钝。 （3）破伤风杆菌）破伤风杆菌，引起人畜破伤风，以骨骼肌发生强直性痉挛的症状为特征， 故又称强直症，本菌为两端钝圆，细长，正直或略弯曲的杆菌，多单在，有是 成双，偶有短链，在湿润的琼脂表面上形成较长的丝状，无荚膜，具有周鞭毛， 在动物体外能形成芽孢，位于菌体一端，横径显著大于菌体，专性厌氧，37 度. PH7.0-7.5，在普通培养基上可生长，产生两种毒素：破伤风痉挛素和破伤风溶 血素。7.霉形体霉形体又称支原体，是一类无细胞壁的细菌，细胞柔软，高度多行性，能通过细 菌过滤器，能在无细胞的人工培养基上生长繁殖，含有 DNA，RNA，以二分裂 的方式繁殖。在固体培养基上能形成“煎荷包蛋状” 。霉形体的细胞膜有三层结 构，内外层主要是蛋白质，中间层是脂质，细胞膜具有多形性，可塑性，滤过 性。 G 阴性菌，核质是一个环状双股 DNA。 猪肺炎霉形体猪喘气病。
