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1、一 如何获得目的菌株( 1) 普鲁兰酶产生菌的初筛。取10g 土样加入到装有90mL 无菌水和玻璃珠的三角瓶中, 振荡 30min, 使样品充分打散后, 吸取 1.0mL 于富集培养基中, 在35下振荡培养48h。 取培养液稀释涂布于以普鲁兰糖为唯一碳源的平板分离培养基上, 35 温箱中培养48h。将平板倒置 , 注入 10mL 无水乙醇 , 室温放置 24h, 观察菌落并挑出周围出现透明圈的菌落, 于斜面培养基上进行培养。( 2) 菌种纯化。用接种环从斜面培养基上挑取少量菌株接入平板固体培养基, 采用平板划线分离法对菌株进行纯化, 将产生透明圈的单菌落接入斜面培养基, 供菌种复筛用。( 3)
2、 摇瓶培养法复筛。将斜面保存的菌种接入种子培养基中, 35振荡培养 24h 后, 制得菌悬液 , 将菌悬液以 4% 接种量接入菌种筛选摇瓶培养基, 35 振荡培养 48h 后, 测定发酵液中普鲁兰酶活力。二 目的产物的检测方法三 目的菌产酶条件的优化四 纯酶的获得以及酶学性质研究方案酶的初步纯化酶的部分纯化普鲁兰酶的部分酶学性质。( 1) 最适温度及热稳定性。将普鲁兰酶液分别于不同温度下测其活力, 以活力最高者为100% 对照 , 测试其最适反应温度。在不同温度下, 将普鲁兰酶液分别保温1h 后, 测定残余酶活力, 以活力最高者为100%对照 , 试验温度对普鲁兰酶稳定性的影响。( 2) 最适
3、 pH 值及 pH 值稳定性。将普鲁兰酶液分别于不同pH 值下测其活力, 以活力最高者为100% 对照 , 测试其最适反应pH 值。将普鲁兰酶液在不同pH 值缓冲液中于室温保持24h 后, 测定残余酶活力, 以活力最高者为 100% 对照 , 试验 pH 值对普鲁兰酶稳定性的影响。( 3) 金属离子对普鲁兰酶活性的影响。将不同的无机盐溶液与等量普鲁兰酶液混合, 并使混合液中的无机盐最终浓度达到0.5mmoL/ L, 按1.2.3 的方法测定酶活力, 设不加金属离子组为对照组 , 测定金属离子对普鲁兰酶活力的影响。五 对该酶的改性方案（基因工程手段，酶分子修饰，固定化）基因工程手段六 酶的产业化（酶反应器，产业化生产中需要注意的问题）
