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1、20.微生物平板接种方法有哪些？哪些方法可用于微生物计数、分离或纯化？答：有倾注法、涂布法、划线法等。倾注法、涂布法可用于微生物计数和分离；划线法可用于微生物分离和纯化。21.试述样品稀释时的注意事项？答：无菌操作；无菌吸管的使用；更换吸管。22.试述微生物接种时的注意事项？答： 1）物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随后关闭排气阀继续加热，加热结束切断热源后，要使温度自然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸；2） 在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；3
2、） 培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染；4） 接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；5） 接种后，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种后的培养基表面，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落23.试述微生物培养时的注意事项？答：将接种的平板倒置在恒温培养箱中；细菌在 37下培养1-2 天，放线菌和真菌在28下培养 2-3 天，观察结果。24.菌落？答：由单个细菌 （或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落25.微生物菌落特征包含哪些内容？答：包括大小、形
3、状、颜色、边缘、质地、透明度、光泽、隆起、湿润度等26.四大类微生物个体形态与菌落特征比较细菌酵母放线菌霉菌细胞形态形状球状或近球状球状或近球状丝状丝状大小小大小大分散程度分散分散紧密紧密菌落特征厚薄薄厚薄厚干湿程度湿湿干干大小小大小大27.涂片为什么要固定?固定时应注意什么问题？答：固定的目的有三个：）杀死微生物，固定细胞结构。）保证菌体能更牢的粘附在载玻片上，防止标本被水冲洗掉。）改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。28.试述革兰氏染色的流程、所用试剂和结果？29.试述革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞壁化学组成与结构上的差异？革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌壁厚层次肽聚糖脂质
4、磷壁酸脂多糖厚少多少有无薄多少多无有30.试述革兰氏染色的原理？ 答： G+ 细菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使得网孔缩小再加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫和碘的复合物牢牢留在壁内，使得其保持紫色。反之， 革兰氏阴性细菌因其细胞壁较薄，外膜层内酯含量高，肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜迅速溶解， 这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出，因此细胞退成无色。这时， 再经沙黄等红色燃料复染，就使革兰氏阴性细菌呈现红色。而革兰氏阳性细菌则保留最初的紫色。31.哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性
5、，其中最关键的环节是什么? 应如何掌握？答：1)革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如果脱色过度， G+菌也可被脱色而被误判为G菌。如果脱色时间过短，G菌也会被误判为G+菌。涂片厚薄以及脱色乙醇用量也会影响结果。2)染色过程中， 染色液应覆盖整个涂面，染色液不能过浓，水洗后轻轻甩去载玻片上 的残余水珠，以免稀释染色液而影响染色效果。3)要严格控制菌龄，菌体衰老时，G+菌常呈 G反应。32.微生物的特殊构造有哪些及各自的功能？答：1)荚膜：抵抗干燥，荚膜为细菌体外贮藏养料2)芽胞：细菌营养物贮库3)鞭毛：细菌的运动器官33.影响发酵产物生产的因素，其中在发酵生产中能被实时控制的因素有哪些？ 答：1)
6、营养物质的浓度、种类、比例2)溶解氧浓度3)氧化还原电位4)CO2 5)发酵液黏度6)温度7)pH 值8)泡沫9)酶和代谢产物10)此外，还包括菌体浓度、生长速率、死亡速率、细胞状态等生物学因素。其中在发酵生产中能被实时控制的因素有：溶解氧浓度、温度、pH 值、泡沫34.细菌生长曲线分哪几个时期？各时期有何特征及在工业发酵中的应用。【答案】延滞期, 指数期 , 稳定期 , 衰亡期（1）延迟期：菌数没有增加，细胞大量合成细胞物质，准备分裂。生产上要尽量缩短该时期，如应用处于对数期的菌体接种，适当增大接种量，培养基成分尽量与种子培养基一致；（2）对数期：菌数以指数增加。是研究微生物生理、遗传的好材
7、料，是作菌种的好材料，是噬菌体的适当宿主；(3) 稳定期：菌体生长速度和死亡速度相等，菌体量达到最大。以培养菌体为目的时，可结束培养；开始积累次级代谢产物，以生产次级代谢产物为目的时，应通过调pH值，补加新鲜培养基等方式，延长该时期；(4) 衰亡期：菌数以指数下降。要及时放罐，避免菌体自溶，不利后处理。2pH 值对微生物生长有何影响？环境中的酸碱度通常以氢离子浓度的负对数即pH值来表示。 环境中的pH值对微生物的生命活动影响很大，主要作用在于： 引起细胞膜电荷的变化，从而影响了微生物对营养物质的吸收；影响代谢过程中酶的活性；改变生长环境中营养物质的可给性以及有害物质的毒性。每种微生物都有其最适
8、pH值和一定的pH范围。在最适范围内酶活性最高，如果其他条件适合，微生物的生长速率也最高。大多数细菌、藻类和原生动物的最适pH为6.5-7.5，在 pH 4-10 之间也可以生长；放线菌一般在微碱性即pH7.5-8 最适合；酵母菌、霉菌则适合于pH5-6 的酸性环境，但生存范围在pH1.5-10 之间。有些细菌甚至可在强酸性或强碱性环境中生活。微生物在基质中生长，代谢作用改变了基质中氢离子浓度。随着环境pH值的不断变化，微生物生长受阻，当超过最低或最高pH值时，将引起微生物的死亡。为了维持微生物生长过程中pH值的稳定， 配制培养基时要注意调节pH值，而且往往还要加入缓冲物以保证pH在微生物生长繁殖过程中的相对稳定。强酸和强碱具有杀菌力。无机酸杀菌力虽强， 但腐蚀性大。 某些有机酸如苯甲酸可用做防腐剂。强碱可用作杀菌剂，但由于它们的毒性大， 其用途局限于对排泄物及仓库、棚舍等环境的消毒。强碱对革兰氏阴性细菌与病毒比对革兰氏阳性细菌作用强。
