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1、1 课题 1 微生物的实验室培养基础知识一、培养基1概念：人们按照微生物对_营养物质_的不同需求，配制出的供其_生长繁殖 _的营养基质。2.种类：按照培养基的物理性质划分（1）_液体 _培养基：配制成的_液体 _状态的基质。（2）_固体 _培养基：在 _液体 _培养基中加入 _凝固剂 _，如琼脂后，配制成的_固体 _状态的基质，是实验室中最常用的培养基之一，微生物在其上面生长，可形成肉眼可见的_菌落 _。3.组成成分： 各种培养基的具体配方_不同 _， 但一般都有 _水_、 _碳源 _、_氮源 _、 _无机盐 _，此外培养基还需要满足微生物生长对_PH _、_ _特殊营养物质_ 以及 _氧气
2、_的需求。 二、无菌技术获得纯净培养物的关键是_防止外来杂菌的入侵_。1消毒是指使用_较为温和 _的物理方法或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分_ _对人体有害 _的微生物 （不包括 _芽孢 _和_孢子 _） 。实验室常用的消毒方法有_煮沸消毒法 _、_巴氏消毒法 _、_化学药剂消毒法_。2.灭菌是指使用_强烈 _的理化因素杀死_物体内外所有_的微生物，包括_芽孢_和_孢子 _。 常用的灭菌方法有_灼烧灭菌 _、_干热灭菌 _、 _高压蒸汽灭菌_。3.实验操作中避免杂菌的污染，主要包括四方面的内容：（1）对实验操作的_空间 _、操作者的 _衣着和手 _进行清洁和消毒。（2）将用于微生物培养的_
3、器皿 _、_接种用具 _和_培养基 _等进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_酒精灯火焰 _附近进行。（4）实验操作时应避免_已经灭菌处理 _的材料用具与周围物品相接触。4.在实验室中， 切不可吃东西、 喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被 _微生物污染 _。 使用后的培养基丢弃前一定要进行_灭菌 _处理，以免污染环境。三、分离纯化大肠杆菌本实验使用的培养基为_牛肉膏蛋白胨_培养基。进行大肠杆菌的纯化培养，可分为_ _制备培养基 _和 _纯化大肠杆菌_两个阶段。1.制备培养基的一般步骤为：_计算 _、_称量 _、 _溶化 _、_灭菌 _、_倒平板 _。2.纯化大肠杆菌：
4、微生物接种最常用的方法是_平板划线法 _和_稀释涂布法 _。（ 1）平板划线法通过_接种环 _在琼脂固体培养基表面连续_划线 _的操作，将_聚集 _的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。（2）稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的_梯度稀释 _，然后将不同稀释度的菌液_分布涂布 _到琼脂固体培养基的表面，进行培养。3.菌落的概念：_由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体_。4.结果分析：（1）如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明_接种 符合要求 _；（2）若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中_有杂菌未消化 _；（3）未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中
5、若长出菌落，则说明_培养基灭菌_不彻底，实验失败。 四、菌种保存1.对于频繁使用的菌种，可以采用_临时保藏 _的方法。（ 1）过程：首先将菌种接种到试管的_固体斜面培养基上_，合适温度下培养，菌落长成后，放于 _4_冰箱中保藏，每隔3 6个月，都要将菌种从旧的培养基上转移到新的培养基上。（ 2）缺点：保存时间_短_，菌种容易被_污染 _或产生 _变异 _。2.对于需要长期保存的菌种，可以采用_甘油管藏 _的方法，将培养的菌液与等体积灭 菌后的甘油混匀于_-20_的冷藏箱内保存。随堂练习1用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(C) 可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进
6、行接种都可以用来计数活菌ABCD2下列有关微生物培养与应用的说法正确的是(C) A天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源3下列对灭菌和消毒的理解不正确的是(B) A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌实质上是完全相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法4用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是(C) A未接种的选择培养基B未接种
7、的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D接种了的选择培养基5下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是(A) A微生物培养前，需对培养基进行消毒B分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度C测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源6三个培养皿中分别加入10 mL 不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36 h 后，计算菌落数，结果如下表。下列选项正确的是(D) 2 培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖35 琼脂、葡萄糖、生长因子250 琼脂、生长因子0 A. 该实验采用的是液体培养基B该实验采用平板划线法接种C和对照，说
8、明大肠杆菌的生长不需要生长因子D和对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖7. 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( C ) A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B 计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D 计算、称量、灭菌、溶化、倒平板8. 有关倒平板的操作错误的是(C) A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置9. 有关平板划线操作正确的是(D) A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c将沾有菌种的接种环迅速
9、伸人平板内，划三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放人培养箱中培养 10. 关微生物营养物质的叙述中，正确的是( D )A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量 8下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答：试剂牛肉膏蛋白胨NaCl 琼脂水用量5 g 10 g 5 g 20 g 1000 mL (1)培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、_氮源 _和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是_牛肉膏和蛋白胨_。培养基配制完成以后，一般还要调节pH，并对培养基进行_灭菌 _处理。该培养基从物理性质上分类属
10、于_固体培养基 _。(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是_平板划线法 _和_稀释涂布平板法_。(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？(列举两项 ) _稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染。_。9.葡萄酒是具有多种营养成分的高级饮料。某同学制作葡萄酒的过程大致如下：将冲洗过并晾干的成熟葡萄捏烂，与糖按103 的比例放入发酵瓶，搅拌密封后发酵。初期，泡沫不断增多，随着时间的延长，泡沫逐渐减少，待基本不产生气泡后，结束发酵。根据上述过程，回答以下问题。(1)发酵所需的酵母菌菌种的来源是_葡
11、萄表皮上附着的野生型酵母菌_。(2)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种。若想筛选出这样的菌种，步骤如下：获得野生菌：从酵母菌的生存环境中获得野生菌；制备 _选择 _培养基：在基本培养基的基础上，注意添加_适量的糖 (蔗糖或葡萄糖)_并_调整pH_，灭菌后制成平板；接种：采用_稀释涂布平板(或平板划线 )_法将野生菌接种在平板上；培养：在适宜条件下培养一定时间；选种：从 _生长良好的菌落_中筛选出所需要的菌株。(3)增大接种量能缩短发酵时间。为增加菌种的量，在上述中获得所需菌株后，可以采取的措施是_扩大培养 (或多次培养 )_。(4)酿酒过程中，经检测发现活菌数量适宜却不产生酒精。
12、在酿酒初期应采取的措施是_隔绝空气(或加强密封 )_。(5)葡萄汁中加入糖的目的是_酵母菌提供碳源，促进发酵_。(6)密封发酵后泡沫增多，这时应该采取的措施是_松盖放气 _。(7)为研究发酵瓶中酵母菌的生长状况，常进行取样统计分析。一般用显微计数法测定酵母菌数量时常常需要借助一种特制的载玻片 _血球计数板 _来完成。13 (2009 上海卷 )氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下图所示的实验方案，筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表。表培养基的组成液体培养基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化钠硝酸铵无机盐(无碳 ) 蒸馏水号10g 5g 5mg 5g 1L 号50mg 5g 3g 适 量1L 号20-80mg 5g 3g 适量1L (1)配制号固体培养基时，除添加号液体培养基成分外，还应添加1%的_琼脂 _。(2)培养基配制时，灭菌与调pH 的先后顺序是 _先调 pH，后灭菌 _。(3)从用途上来说，号培养基和号培养基分别属于_基本 (通用 )_培养基和 _选择 _培养基。在号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_硝酸铵 _。(4) 在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为_芽孢 _。
