总多酚的测定

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1、一、实验原理多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。多酚类物 质含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如 甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。由以 上溶剂直接提取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液）， 不同的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有:酒石酸亚铁比色法、 FD 法、FC 法、普鲁士蓝法等。其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应 生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅

2、与溶液中多酚含量成正比。 测定总多酚 时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含 量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时， 则以没食子酸作标准物较合适。二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g硫酸亚铁（ FeSO4 7H2O）和 5.00g酒石酸 钾钠(C4H4O6NaK4H2O）混合后加蒸馏水溶解定容到1000mL （2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取60.20g Na2HPO4 12H2O 和 5.00g NaH2PO4 12H2O 混合后加蒸馏

3、水溶解定容到1000ml。三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用 标准曲线的制作参照GB-8313-87茶茶多酚测定方法。为简化操作，可用 在一定操作条件下吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL” 这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。1.福林试液的配制：取钨酸钠 10g 与钼酸钠 2.5g，加水 70ml、 85磷酸 5ml 与盐酸 10ml,置 200ml 烧瓶中 ,缓缓加热回流 10 小时，放冷，再加硫酸锂15g、 水 5ml 与溴滴定液 1 滴煮沸约 15 分钟， 至溴除尽，放冷至室温，加水使成 100ml。 滤过,滤液

4、作为贮备液。置棕色瓶中,于冰箱中保存。临用前，取贮备液2.5ml，加水稀释至 10ml，摇匀，即得。用 10mL 乙醇溶液溶解 0.5000g没食子酸， 定容至 100mL，分别移取 3.0mL 到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容。加入福林 薛卡多（ Folin-Ciocalteu）试剂显色，在 765nm 波长下测定吸光度。每个浓度 做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。取样品溶液 1mL，按照上 述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样品 中的多酚含量。反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生 成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关

5、，在波长760 nm左右 有最大吸收。 2. 酒石酸亚铁比色法。其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色 络合物。用分光光度法测定其含量。 茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品0.2500g,加水溶解定容至 250mL,混匀,即 为每毫升含 1mg 提取纯品的标准溶液 (mg/mL) 。茶多酚的含量。茶多酚 标准曲线的绘制。 分别吸取茶多酚标准溶液1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL 于 4 个 50mL 容量瓶中 ,各加水至 10mL,再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入 pH 为 7. 5 的磷酸缓冲液至刻度 ,混匀后用 1比色皿 ,以空白试剂作参比 ,于波长 540nm处测 定吸光度 (A) ,绘制出标准曲线。