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1、1 实验四永久制片的制作材料的脱水和透明一实验原理材料经过固定液作用后，内部渗入很多固定液，一定要把渗入里面的固定液洗去，否则留在材料中的固定液有的会妨碍染色，有的会发生沉淀或结晶， 影响观察，有的继续作用，使材料变坏等。所以材料中的固定液必须彻底洗净。材料经过洗涤后含有大量水分， 必须用脱水剂脱尽里面的水分， 以利于材料的透明和制片的保存，因为水在里面能使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的，只有在完全无水的情况下， 透明剂才能完全透入。 材料在脱水以后， 所用的大多数脱水剂（酒精、丙酮等）不能和石蜡相混合，而透明剂既可与脱水剂混合又能和石蜡相混合， 因而可通过透明剂的作用把脱水剂替换出来，
2、使石蜡能顺利地进入材料中。二 实验目的通过教学要求学生掌握材料的脱水和透明的原理；掌握常用脱水剂的种类及应用；掌握组织自动脱水处理三 实验仪器、材料和试剂脱水用小瓶（青霉素小瓶）或试剂瓶；已固定的材料；乙醇/正丁醇系列脱水剂。四 实验过程（一）脱水前的冲洗：1、冲洗的作用：除掉固定液，利于切片的染色和观察。一般原则是水溶液的固定剂用水冲洗，酒精溶液的用同浓度的酒精溶液冲洗。2、脱水的作用除尽水分才能使包埋剂和封固剂渗透到组织中。3、脱水剂应具备的两个条特性：（1）能与水混溶（2）与其它有机溶剂混溶2 （二）常用的脱水剂：可分两类：非石蜡溶剂的脱水剂：如乙醇和丙酮石蜡溶剂的脱水剂：如正丁醇、叔丁
3、醇、氯化二乙烯、二氧六烷。其中最为常用的是乙醇和正丁醇/乙醇系列（三）脱水剂的配制：乙醇系列： 30%，50%，60%，70%，80%，90%，100%。优点：脱水速度快；缺点：不易操作，材料易收缩及变软或变脆。乙醇/正丁醇系列：乙醇：正丁醇：水40ml 10ml 50ml 50ml 20ml 30mkl 50ml 35ml 15ml 40ml 55ml 5ml 25ml 75ml 100ml 优点：很少引起组织块的收缩和变脆。（四）脱水时应注意下列几点：1 在低浓度酒精或正丁醇 /乙醇系列中，每级停留不能太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。2 在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长
4、，否则可使组织收缩变脆，影响切片。3 脱水应彻底干净， 否则与二甲笨混合后， 将呈乳白色混浊， 甚至影响渗蜡。4 如需过夜，应停留在70%酒精中。5 在每级中停留的时间依材料的大小，性质以及固定液的性质而定，但并不十分严格。（五）透明的作用：（1）使材料透明干净；（2）使包埋剂和封固剂易于进入组织；如果脱水剂是石蜡溶剂的脱水剂，则可省略此步。3 （3）切片的透明目的是利于光线透过，便于显微镜的观察。（六）脱水与透明操作：每一梯度的脱水剂中停留2h, 进入透明剂后，每一梯度停留时间可适当延长。常用透明剂： 正丁醇（butylalcohol ）；二甲苯（xylen 或 xylol ） ；甲苯（toluene） ；苯（benzene ） ；氯仿（ chloroform） ；丁香油（ clove oil） ；香柏油（ cedar oil） 。本实验用正丁醇作为透明剂。注意：1 脱水和透明用药品系有毒物品，同学们操作时要注意安全，避免大量吸入或用手直接接触。2 回收所有实验药品，严禁直接倒如水槽，以免污染环境。五 作业1 试述脱水和透明过程的操作规范。2 为什么在材料脱水过程中脱水剂要有一定的浓度梯度？脱水开始时的浓度取决于什么？3 材料脱水前的洗涤的目的是什么？选用洗涤液的依据是什么？
