大豆异黄酮的测定方法

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1、大豆异黄酮的测定方法本方法适用于大豆制品中大豆异黄酮的测定。本方法大豆异黄酮染料木素的最低检出限为 10ng；大豆苷元的最低检出限为30ng。1、方法提要大豆异黄酮（soybean isoflavones，简称 ISO）是一类以大豆中分离提取的具有抗氧化、抗肿瘤、改善心血管功能的主要活性成分。目前发现的大豆异黄酮包括游离型苷元和结合型的糖苷两类共有 12 种，染料木素（Genistein，G）和大豆苷元（Daidzeiu，D）是其中两种重要化合物。本法用 80%乙醇作为溶剂，提取样品中的染料木素、大豆苷元，以反相高效液相色谱分离，在紫外检测器260nm 条件下检测其峰面积，以染料木素和大豆苷元

2、两项含量之和计算大豆异黄酮含量。2、仪器（1）LC 高效液相色谱仪，CRIB 色谱处理机。（2）检测器：SPD2AS 紫外检测器。（3）离心机。（4）超声波振荡器。3、试剂（1）甲醇（色谱纯） 。（2）乙醇（优级纯） 。（3）双重蒸馏水。（4）大豆异黄酮标准品：染料木素与大豆苷元标准品（美国 Sigma 公司产品） ，以染料木素和大豆苷元两项之和作为大豆异黄酮含量计算。（5）大豆异黄酮标准溶液：准确称取染料木素标准品 5.0mg，大豆苷元标准品3.2mg，各自用流动相“甲醇水（6040） ”定容至 100mL，配制成 50g/mL 的染料木素和 32g/mL 的大豆苷元标准溶液。4、测定步骤（

3、1）样品处理：a、固体样品：准确称取一定量固体粉末样品于 100mL 容量瓶中，定量加入 80%乙醇，经超声振荡 5min，加水补足至刻度，待提取液略澄清后经离心分离（3000r/min，5min） ，取上清液经 0.45m 滤膜过滤后待进样。b、液体样品：准确吸取 2.0mL 液体样品，加入 80%乙醇摇匀并定容 100mL，澄清后同上述步骤。 （2）色谱分离条件：色 谱 柱：ShimPack CLCODS，6mm150mm，5m。流 动 相：甲醇水（6040） ，临用前用超声波除气。流 速：05min 为 1.0mL/min；510min 为 1.6mL/min。柱 温：40。检测波长：UV260nm。灵 敏 度：0.016AUFS。进 样 量：10L。（3）样品测定：准确称取样品处理液和标准液各 10L（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间进行定性，利用峰面积求出样液中待测物质的含量。5、计算结果S1cVX= S2m 式中:X样品中染料木素/大豆苷元的含量（g/g） ；S1样品峰面积；c标准溶液浓度（g/mL） ；S2标准溶液峰面积；V样品定容体积（mL） ；m试样质量（g） 。样品中大豆异黄酮含量 X（g/g）XgXd（Xg、Xd 分别为样品中染料木素及大豆苷元的含量）