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1、1幽门螺杆菌感染及环氧合酶2 表达与 胃癌变的关系【摘要】 目的： 探讨胃黏膜幽门螺杆菌(helicobactor pylori, H.pylori)感染、环氧合酶2(COX2)的表达与胃癌发生、发展的关系. 方法： 胃癌(GC)标本 80 例，非典型增生(Dys) 40 例，萎缩性胃炎(CAG) 30 例，肠上皮化生(IM) 30 例，浅表性胃炎(CSG) 30 例，应用免疫组化方法测定 COX2 蛋白的表达，用亚甲兰染色检测H.pylori. 结果： CSG，GC 中 H.pylori 阳性和阴性病例 COX2 表达差异无统计学意义(P0.05),但在 CAG，IM，Dys 中的 H.py
2、lori 阳性病例中 COX2 表达高于 H.pylori 阴性病例（52.9% vs 7.6%，52.6% vs 9.0%，67.9% vs 33.3%）. 结论： H.pylori 感染诱导 COX2 表达发生在胃癌形成的早期阶段. 【关键词】 胃肿瘤 癌前状态 螺杆菌 幽门 前列腺素内过氧化物合酶0 引言胃癌的发生是一个多阶段、多因素的复杂发展过程. 至今，病因还没有完全研究清楚，但近年的大量研究证实，H.pylori 感染是胃癌病因中最重要的环境因素之一，H.pylori 感染诱导一个复杂免疫反应，首先炎细胞聚集，然后导致增生，细胞因子释放，最终导致分子改变. 在被 H.pylori
3、上调的靶基因中，COX2 在胃癌进程中起重要作用，因此，COX2 与肿瘤的关系倍受关注，COX2 是一种诱导型酶,其与肿瘤的发生、发展有密切关系,并且可作为预防、治疗肿瘤的靶分子,对其检测具有重要的临床意义. H.pylori 感染及其诱导的 COX2 表达在胃黏膜病变转变过程中的相关性尚不清楚. 我们检测 chronic superficial gastritis,chronic atrophic gastritis,intestinal metaphasia,dysplasia 和 gastric carcinoma 标本中的 H.pylori 感染2和 COX2 蛋白的表达，探讨 H.p
4、ylori 感染及其诱导的 COX2 在不同胃黏膜病变中的表达情况，探讨其表达与胃癌发生、发展的关系，为胃癌的早期诊断及治疗提供依据.1 对象和方法1.1 对象 200501/200612 病理确诊存档组织蜡块，术前未放、化疗，年龄2890（中位 58）岁. 男 125 例，女 85 例. 其中 GC 标本 80 例，CSG 30 例，CAG 30例，IM 30 例，Dys 40 例. 常规制备 4 m 连续切片 4 张，兔抗人 COX2 多克隆抗体、免疫组化 SABC 试剂盒及 DAB 显色试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司. 亚甲兰溶液配制：亚甲兰 11 g，硼酸 1 g 加蒸馏水
5、100 mL.1.2 方法免疫组织化学染色采用 SABC 法： 新鲜配置 H2O2 孵育；微波修复抗原；滴加 BSA 封闭液，室温 30 min. 甩去多余液体，不洗；每张切片加 1 滴或 50 L 第一抗体，4孵育过夜；滴加二抗，37下孵育 20 min，PBS 冲洗，5 min3 次；滴加试剂 SABC，37下孵育 20 min; PBS 冲洗，5 min3 次；DAB 显色：每张切片加 2滴或 100 L 新鲜配制的 DAB 溶液，显微镜下观察 510 min; 蒸馏水冲洗；自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，中性树胶封片. COX2 阳性染色主要位于细胞胞质中,呈棕黄色弥漫性分布，间
6、质细胞(炎性细胞、内皮细胞及成纤维细胞)和平滑肌细胞中亦可见散在部分表达，通过光学显微镜每张切片摄取 5 个高倍视野，计数阳性细胞个数，计算阳性细胞率， 以5%为 0 分,6%25%为 1 分,26%50%为2 分,51%75%为 3 分,76%100%为 4 分，着色强度 0 分为阴性,1 分为浅棕黄色（弱阳性）,2 分为棕黄色（阳性）,3 分为深棕黄色（强阳性）. 每张切片的染色积分以这两者的乘积表示. 另 HP 染色：石蜡切片 61烤片 40 min，脱蜡，梯度水化. 亚3甲兰溶液中染色 1 min. 水洗凉干后用中性树胶封固. H.pylori 在 400 倍高倍镜下观察，以切片中腺腔
7、内找到深兰色单个或多个聚集的短棒状、弧状、 “S”状杆菌为阳性（+），否则为阴性.统计学处理：组间率的比较采用 2 检验或精确概率法，P0.05 为差异有统计学意义.2 结果2.1 胃黏膜感染率在 CSG，CAG，IM，Dys，GC 中 H.pylori 感染率分别为23.3%(7/30),56.7%(17/30),63.3%(19/30),70%(28/40),35%(28/80). CAG，IM，Dys 的H.pylori 感染率与 CSG 相比差异有统计学意义（2=6.94,2=6.71,2=10.60, P0.01）. GC 的 H.pylori 感染率与 CSG 相比差异无统计学意义
8、（2=1.37, P0.05）.2.2 胃黏膜 COX2 的表达率 COX2 在 CSG，CAG，IM，DYS，GC 中的阳性表达率分别为 10%（3/30），33.3%(10/30)，36.6%(11/30)，57.5%(23/40)，72.5%(58/80)，CAG，IM，Dys 的 COX2 阳性表达率与 CSG 相比差异有统计学意义（2=4.81，2=5.96，2=16.57，P0.05,图 1）. GC 的阳性表达率与 CSG 相比差异亦有统计学意义（2=34.50，P0.01）. 2.3 胃黏膜感染与 COX2 表达的关系CSG，GC 中阳性和阴性病例 COX2 阳性表达率差异无统
9、计学意义(28.6% vs 4.0%，85.7% vs 65.4%)，但在 CAG，IM，DYS 中的阳性病例中 COX2 表达率高 于阴性病例（52.9% vs 7.6%,52.6% vs 9.0%,67.9% vs 33.3%）.A: CAG; B: Dys; C: IM; D: 阴性对照; E: GC 高分化; F: GC 中分化.图 1 胃黏膜 COX2 表达 SABC 40043 讨论H.pylori 已被认为是慢性活动性胃炎、十二指肠球部溃疡的重要致病因素，是胃癌的高危因素1. 胃癌是经过炎细胞浸润CAGIMDysGC 的演变过程2. 我们的实验结果显示,H.pylori 在 CA
10、G，IM，Dys 的感染率与 CSG 相比差异有统计学意义（P0.05）. GC 的 H.pylori 感染率与 CSG 相比差异无统计学意义（P0.05）. 胃癌 H.pylori 感染率为 35%(28/80)，低于 CAG，IM 和 Dys 的检出率,其原因可能是由于胃癌的发生改变了胃黏膜组织结构和胃内微环境,尤其是胃癌表面的坏死组织,不利于 H.pylori 继续生长或胃癌组织释放其中的破坏因子使局部 H.pylori 破坏崩解所致.COX 有 2 种亚型： 结构型 COX1 和诱生型 COX2，本研究结果显示，COX2 在 CAG，IM，Dys 中的表达率与 CSG 相比差异有统计学
11、意义（P0.05）. 在 GC 中的表达率与 CSG 相比差异亦有统计学意义（P0.01），提示 COX2 表达可能是 CSG 发展到 GC 的分子标志.许多研究证实 H.pylori 是诱导 COX2 表达的重要因素, H.pylori 感染和COX2 的表达有明显的相关性3，在 H.pylori 感染的胃黏膜中 COX2 mRNA和蛋白表达明显增加4，进一步说明了 H.pylori 和 COX2 有着明显的相关性5，樊薇等6研究结果显示,在 H.pylori 感染的胃黏膜疾病中,COX2 阳性表达率高于非 H.pylori 感染的胃黏膜病变,且差异有统计学意义(P0.01),且在胃癌组二者
12、差异亦有统计学意义(P0.01)，说明 COX2 的表达上调与 H.pylori 菌株感染有关, H.pylori 菌株感染通过介导 COX2 的表达上调，在胃癌的发生中起作用，这可能是 H.pylori 感染诱导胃黏膜细胞异常增殖及细胞凋亡进而促使胃癌发生的重要机制. 本研究显示,在 CSG 和 GC 中 H.pylori 阳性和阴性病例 COX2 表达5率差异无统计学意义(P0.05)，但在 CAG,IM 和 DYS 的胃黏膜中 H.pylori 阳性病例的 COX2 表达率高于 H.pylori 阴性病例(P0.05),提示 H.pylori 感染诱导COX2 表达发生在胃癌形成的早期阶
13、段. 因此，在根除 H.pylori 感染的同时应用非甾体类抗炎药物可能对胃癌的防治起重要作用，这为肿瘤化学预防和治疗提供了新思维.【参考文献】1 Mori N, Nada A, Hirayama T, et al. Activation of intercellular adhesion molecule expression by helicobacter pylori is regulated by NFkB in gastric epithelial cancer cellsJ. Infect Immun,2000,68(4):1806-1814.2 Honda S, Fujioka
14、T, Tokieda M, et al. Development of Helicobacter pylori induced gastric carcinoma in Mongolian gerbilsJ. Carcer Res,1998,58:4255-4259.3 Uefuji K, Ichikura T, Schinomiya N, et al. Induction of apoptosis by JTE522, aspecific cyclooxygenase2 inhibitor, in human gastric cancer cell linesJ. Anticancer Re
15、s, 2000,20(5):4279-4284.4 Guo XL, Wang LE, Du SY, et al. Association of cyclooxygenase2 expression with Hp cagA infection in gastric canceJ. World J Gastroenterol, 2003, 9(4):246-249.5 Sung JJ, Leung WK, Go MY, et al. Cyclooxygenase2 expression in Hp associated premalignant and malignant gastric lesions J. Am J Pathol, 2000,157(3): 729-735.6 樊薇,周涛,程宝泉,等. HP 感染及 COX2 的表达与胃癌及癌前病变关系的研究J. 山东大学学报,2006,44(7):704-705.
