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1、1银杏叶提取物对大鼠慢性高眼压视网膜 损伤的保护作用【摘要】 目的：探讨银杏叶提取物（EGb）对实验性高眼压大鼠视网膜神经节细胞层（RGCL）神经元损伤的保护作用。方法：取健康 SD 大鼠 60 只，正常对照组和正常银杏叶治疗组各 6 只，其余 48 只采用烧烙法，烙闭大鼠左眼 2 条浅层巩膜静脉，制作大鼠持续性高眼压模型，从中选出眼压稳定在实验要求水平的大鼠 30 只，随机分为生理盐水组，治疗 A 组（每日 EGb 50mg/kg）、 治疗 B 组（每日 EGb 100mg/kg） 、治疗 C 组（每日 EGb 150mg/kg）、 治疗 D 组（每日 EGb 200mg/kg），治疗时间为
2、 1mo，处死大鼠后做视网膜全层铺片，对 RGCL 神经元做特异性染色后行神经元计数分析来评估神经元的情况。结果：正常对照组双眼 RGCL 神经元计数比较无显著性差异（P 0.05），正常对照组与正常 EGb 治疗组 RGCL 神经元计数比较无显著性差异（P 0.05），各浓度 EGb 治疗组实验眼与正常对照组RGCL 计数比较均有显著性差异 （P 0.05），各浓度 EGb 治疗组实验眼与其自身对照眼 RGCL 神经元计数均有显著性差异（P 0.05），各浓度 EGb 治疗组实验眼与生理盐水组实验眼 RGCL 神经元计数均有显著性差异（P 0.05），治疗A，B，C，D 4 组实验眼 RGC
3、L 神经元计数两两比较均有显著性差异（P 0.05）。结论：单独使用 EGb 对正常大鼠 RGCL 神经元计数无影响，EGb 可对持续慢性高眼压导致的大鼠 RGCL 神经元损伤提供部分保护作用，且在一定范围内保护作用大小与用药剂量呈正相关。 【关键词】 银杏叶提取物 大鼠 高眼压 神经保护Protective effect of extract of ginkgo biloba leaves on retinal neuron injury in 2chronic high intraocular pressure ratsAbstract AIM: To investigate the pr
4、otective effect of extract of ginkgo biloba (EGb) on retinal ganglion cell layer neuron injury induced high intraocular pressure (IOP) in rats. METHODS: Sixty healthy Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into 3 groups: 6 rats in normal control group, 6 rats in EGb treating normal IOP group
5、, and the other 48 rats were established chronic high IOP models of rats by cauterizing two episcleral veins. Then 30 rats satisfying experimental level were selected and randomly divided into five groups: 6 rats in physiological brine treating group, and the other 24 rats were divided into four exp
6、erimental groups according to the dose of EGb: group A, EGb 50mg/(kgd); group B, EGb 100mg/(kgd); group C, EGb 150mg/(kgd); and group D EGb 200mg/(kgd). After the treating time of 1 month, the rats were sacrificed on schedule. Flat preparation of whole retinaes was stained distinctively and neuron c
7、ounting in retinal ganglion cell layer (RGCL) from both eyes of each rat were performed to evaluate neuron situation. RESULTS: There was no significant difference between the bilateral eyes on neuron counting from RGCL of normal control group (P0.05). There was no significant difference between the
8、normal control group and the EGb treating normal IOP group on neuron counting from RGCL of (P0.05). The difference was significant between the experimental eyes of every dose group and normal control group (P0.05). The difference was significant between the experimental eyes and self-controlled eyes
9、 in every dose group (P0.05). The difference was significant between the experimental eyes of every dose group and physiological brine treating group (P0.05). The difference was significant between the experimental eyes on neuron counting from RGCL of every dose group (P0.05). CONCLUSION: EGb has no
10、 effect on neuron counting of RGCL when administered alone in normal rats. EGb could partly provide the protective effect on retinal ganglion cell layer neuron injury induced chronic high IOP in rats. The protective effect of EGb will be enhanced according to the increasing dose in a definite range.
11、 KEYWORDS: extract of ginkgo biloba; rats; high intraocular pressure; neuroprotection0 引言青光眼是一组由许多因素引起的以视神经凹陷性萎缩和视野缺损为共同特征的疾病，其中病理性眼压升高是最主要的危险因素。所以临床上的治疗方法大都以降低眼压为主，但是眼压降低以后，很多时候视神经仍就进行性损害，视网膜神经节细胞层神经元最终仍将凋亡，因此找到一种能保护 RGCL 神经元的药物，延缓和减少神经元的凋亡，有效保护视神经，已经成为了当今青光眼研究的焦点和热3点。银杏叶提取物（extract of ginkgo bilob
12、a leaves，EGb）是从植物银杏叶中提取精制而成的纯天然药物。其主要成份为黄酮类和萜内酯化合物，还含有有机酸、多糖、酚类、氨基酸、聚戊烯醇、甾类和微量元素等。近年来许多研究都已证明 EGb 具有清除自由基、抑制血小板活化因子、抑制一氧化氮合酶、保护线粒体、抑制谷氨酸毒性等多种生理作用1,2，在此基础上我们研究 EGb 能否延缓或减少持续慢性高眼压对大鼠视网膜神经节细胞层（RGCL）神经元的损伤。1 材料和方法1.1 材料 由南华大学实验动物学部提供健康 Sprague- Dawlay 大鼠 60 只，雌性，体质量 200240g，812wk 龄，经检查无明显歪颈，角膜透明，虹膜血管清晰，
13、瞳孔等大等圆，对光反应灵敏。实验性饲养 3d 后，连续测量 3d 眼压，剔除平均眼压高于或者低于大鼠正常眼压波动范围（820mmHg）者3，挑出合格者纳入实验。银杏叶胶囊（三九药业黄石制药厂，0.15g/粒 ，含银杏叶提取物 40mg/粒）。1.2 方法 随机挑选 6 只大鼠为正常对照组，6 只为 EGb 治疗正常组，其余均采用烧烙法3，烙闭大鼠左眼 2 条浅层巩膜静脉，制作大鼠持续性高眼压模型，右眼不做手术，作为自身对照，观察 1wk，在左眼眼压稳定在 26mmHg 以上者中随机挑选出 30 只纳入实验，然后随机分为生理盐水组，治疗 A 组（每日 Egb 50mg/kg）、治疗 B 组（每日
14、 EGb 100mg/kg） 、治疗 C 组（每日 EGb 150mg/kg）、 治疗 D 组（每日 EGb 200mg/kg），每组 6 只，进行灌胃治疗 1mo，每日上午一次性给全部药量。每周监测眼压 1 次。各组实验期满后取视网膜作全层铺片，甲酚固紫染色后行 RGCL 神经元计数。每张待测视网膜铺片通过视乳头对称画线，将其分为颞上、颞下、鼻上、鼻下 4 个象限，并将每一象限视网膜分为 3 等份，即中央、中间和周4边 3 区，各分区随机取 3 个点，每点面积为 32 500m2，然后对每点的视网膜神经元细胞进行计数,然后换算成每平方毫米的细胞数(细胞数/mm2),将每区 3 点细胞密度的均
15、数作为该区的神经元密度。通过形态学（图 1）易于辨认 RGCL 中的血管内皮细胞，具有浓染的核并且无尼氏物质的细胞为胶质细胞，这两种细胞均不纳入 RGCL 神经元计数。统计学处理：所有数据均在 WindowsXP 环境下运用 SPSS11.0 统计软件处理。统计学方法采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）和 t 检验,显著性水平为 P 0.05。图 1 大鼠视网膜铺片颞上象限（甲酚固紫400） A：治疗 A 组；B：治疗 B 组；C：治疗 C 组；D：治疗 D 组 2 结果正常 SD 大鼠右眼和左眼的 RGCL 神经元计数分别为(3483.321.5)个/mm2 和(3491.211
16、.9)个/mm2,双眼比较差异无显著性(P 0.05)。且从中央区到周边区神经元计数逐渐减少。正常 EGb 治疗组与正常对照组比较差异无显著性（P 0.05），各浓度 EGb 治疗组实验眼与正常对照组 RGCL 神经元计数均有显著性差异(P 0.05)，各浓度 EGb 治疗组实验眼与其自身对照眼 RGCL 神经元计数均有显著性差异（P 0.05），各浓度 EGb 治疗组实验眼与生理盐水组实验眼 RGCL 神经元计数均有显著性差异(P 0.05)。治疗 A，B，C，D 4 组实验眼 RGCL 神经元计数两两比较均有显著性差异（P 0.05，表 1）。3 讨论青光眼是一种临床常见眼病，也是主要的致盲眼病之一。青光眼导致的视功能损伤是不可逆，后果极其严重。关于青光眼的神经损伤机制主要包括机械学说和缺5血学说，眼压升高和视神经供血不足是两大主要原发危险因素，另外兴奋性氨基酸的毒性、氧自由的损害、一氧化氮的增加、自身免疫攻击和生长因子的损耗等都加剧着视神经的变性和凋亡4
