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1、1高效液相色谱法测定小春花口服液木犀 草素含量作者：陈敏, 林宇星, 林凌, 庄捷 【关键词】 木犀草素小春花为阴地蕨科植物阴地蕨 Sceptridium ternatum(Thunb.)Lyon 的带根全草,为福建民间习用草药,性味甘平,味淡,具有平肝、清热、镇咳和清火、明目、解毒祛风的功效12。小春花口服液(小伏口服液)是依据民间经验由小春花等药物组成的复方制剂,具有清肝解热、散风解毒的功效,实验表明该制剂有抗炎、免疫调节等作用34,临床用于治疗呼吸系统疾病。笔者对小春花口服液主要有效成分木犀草素进行定性及含量测定,建立该制剂的质量控制标准。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 仪器高效液
2、相色谱色谱仪(Focus 型,美国光谱物理公司),紫外可见分光光度计(TU1221 型,北京普析通用仪器有限公司),离心机(ABBOTT,美国雅培仪器公司),电子天平(AE240 型,Mettler 仪器(上海)有限公司,电热恒温干燥箱(GZXDH4045S,上海跃进医疗器械厂),三用紫外分析仪(ZFI 型,上海顾村电光仪器厂),硅胶板(100 mm200 mm,青岛海洋化工厂分厂)。1.1.2 试药小春花及小春花口服液由福建省立医院药剂科提供。水为重蒸馏水;乙2酸乙酯、苯、甲酸、磷酸、甲醇、石油醚、无水乙醇均为分析纯。对照品为木犀草素标准品(中国药品生物制品检定所,批号 1115202002
3、01)。1.2 方法1.2.1 样品制备(1)称取干燥粉碎小春花 5 g 于索氏提取器中,加石油醚(6090 )100 mL,回流提取至石油醚无色,取出晾干。加无水乙醇 100 mL,回流提取 7 h,提取液加无水乙醇定容至 50 mL 作为供试品。(2)取木犀草素标准品适量,精密称定,加乙醇溶解,配成 1 mg/mL 木犀草素对照品。1.2.2 有效成分薄层色谱鉴别硅胶 G0.5%CMCNa 板 10 cm20 cm,105 活化1 h,展开剂:苯乙酸乙酯甲酸(820.5)。将供试品与对照品点于同一薄层板上,展开,晾干,三用紫外分析仪下(254 nm)观察供试品与对照品。对应位置均呈较明显的
4、暗斑,表明供试品中含木犀草素(图 1)。1.2.3 木犀草素含量测定(反相高效液相色谱法)1.2.3.1 色谱条件色谱柱为 YWG C18ODS 柱(250 mm4.6 mm,5 m);流动相由0.4%磷酸缓冲液(pH 3)甲醇(5050)组成,流速 1 mL/min,柱温 25 ,进样量 10 L,紫外检测波长 355 nm 。木犀草素峰保留时间约 15 min。精密称取木犀草素标准品适量,配制成浓度为 35 g/mL 甲醇溶液,分别取 1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mL,用甲醇定容至 25 mL,进样(10 L)得色谱图,绘制标准曲线(图 2)。1.2.3.2 色谱和光谱鉴别取供
5、试品 2 mL,10 000 r/min 离心 10 min,上清液用微孔滤膜(0.45 m)滤过,取续滤液 10 L 进样,供试品色谱图保留时间约 15 min 处可见木犀草素峰,并与供试品中其他成分色谱峰较好分离。分别取 5 批次本院生产的小春3花口服液 2 mL,10 000 r/min 离心 20 min;上清液用微孔滤膜(0.45 m)加压滤过,续滤液 10 L 进样,依上述色谱条件作色谱图(图 3)。 2 结果2.1 木犀草素标准曲线以木犀草素浓度(X)作为横坐标,其色谱峰面积(Y)作为纵坐标进行线性回归。结果回归方程为:Y35 771.18X2 214.22,r=0.999 3。
6、木犀草素在 14.3243.42 g/mL 范围内符合比耳定律,线性关系良好。2.2 测定方法的精密度与回收率日间分别配制 5 批次浓度为 14.32 g/mL 和35.80 g/mL 木犀草素样品,依上法测定,日间变异为 2.68%和 2.09%,样品回收率为 99.83%和 98.66%(表 1)。2.3 小春花口服液木犀草素含量测定 5 批次本院生产的小春花口服液含木犀草素的浓度分别为 16.38,17.39,17.43,17.05 和 16.13 g/mL,平均为(16.880.53)g/mL。表 1 木犀草素样品的日间变异和回收率2.4 木犀草素标准品及小春花口服液样品分别放置 1,
7、3,5,7 d 后测定峰面积值,基本无变化,说明标准品及样品相当稳定。3 讨论3.1 小春花的主要化学分为黄酮类、阴地蕨素、槲皮素等。叶的浸出成分水解后含木犀草素1。小春花口服液(小伏口服液)是由小春花等药物以 60%乙醇水加热提取数小时后浓缩去乙醇而进一步配制成的复方制剂。小春花口服液保留约 15 min处色谱峰的紫外光谱,与木犀草素对照品在同一保留时间处色谱峰的紫外光谱均在 200400 nm,并与文献5的光谱峰位置一致。通过对小春花口服液进行薄层层析及高效液相色谱和光谱特征分析,笔者证实小春花口服液含木犀草素,后者含量4可作为该制剂提取制备工艺的客观指标。3.2 小春花口服液中木犀草素在
8、上述色谱分离条件下,与其他成分色谱峰基本分离。以木犀草素计理论塔板数不低于 6 000，口服液中其他成分在上述色谱分离条件下不干扰测定结果。运用高效液相色谱法测定小春花口服液中木犀草素含量,分离度好,快速准确,为全面客观地建立小春花口服液质量标准提供了依据。【参考文献】1中华本草编委会. 中华本草(精选本)M. 上海:上海科学技术出版社, 1998:207210.2江苏新医学院. 中药大辞典M. 上海:上海科学技术出版社, 1995:980981.3王少明,阮君山,庄捷. 小春花口服液对慢性支气管炎模型小鼠病理形式影响及祛痰作用J.福建中医药, 2001,32(3):1819.4王少明,庄捷,阮君山. 小伏口服液的免疫学作用研究J. 福建医药杂志, 2001,23(2):102104.5孙文基. 天然药物成分提取分离与制备M. 北京:中国医药科技出版社, 1999:243246.
