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1、1p16 和 Ecadherin 基因在胃癌中的表达【摘要】 目的 探讨原发胃癌组织 P16 和 Ecadherin 蛋白表达与肿瘤发生、发展关系。方法 应用免疫组织化学技术检测 80 例胃癌及 20 例胃良性病变组织中 P16和 Ecadherin 蛋白的表达。结果 80 例胃癌组织中 P16 蛋白阴性表达率为78.8%，Ecadherin 蛋白减弱表达率为 87.5%,和胃良性组织相比，蛋白表达均显著下调（2=9.040、58.330，P0.01）。P16 蛋白阴性表达率在淋巴结转移组高于未发生淋巴结转移组（2=6.819,P0.01），期胃癌高于期胃癌（25.711,P0.05）。Eca
2、dherin 蛋白减弱表达率在淋巴结转移组高于未发生淋巴结转移组（25.503,P0.05）,+期胃癌高于期胃癌（24.156,P0.05）,随浸润深度的加深，Ecadherin 蛋白减弱表达率明显增高（26.011,P0.05）。胃癌组织 P16 蛋白与 Ecadherin 蛋白表达呈正相关（27.779,P0.01）。结论 P16、Ecadherin 蛋白表达下调在胃癌的发生发展过程中均起重要作用，其蛋白状态可作为判断胃癌生物学行为的重要指标，两者均下调可能提示病人预后不良。 【关键词】 胃肿瘤 p16 基因 Ecadherin 基因 免疫组织化学 ABSTRACTObjectiveTo
3、investigate the expression of P16 and Ecadherin protein and their roles in the occurrence and development of primary gastric carcinoma. MethodsExpression of protein P16 and Ecadherin in 80 cases of primary gastric carcinoma and 20 benign gastric lesions were detected by immunohistochemistry. Results
4、The negative expression of P16 and attenuated expression of Ecadherin were respective 78.8% and 87.5% in the cancer, which were higher than those in benign one （2=9.040,58.330;P0.01）. The negative rate of P16 was higher in cases with lymph node metastasis or in patients at stage than those without l
5、ymph node metastasis or patients at stage （2=6.819,5.711;P0.01,0.05）. The attenuated expression of Ecadherin was higher in cases with lymph node metastasis or patients at stage than those without or patients at stage 2（2=5.503,4.156;P0.05）. The attenuated expression of Ecadherin increased along with
6、 deepening of tumor invasion （26.011,P0.05）. A positive correlation existed between P16 and Ecadherin expressions in gastric carcinoma （27.779,P0.01). ConclusionThe downregulation expressions of P16 and Ecadherin play an important role in the development and progression of gastric carcinoma. The lev
7、el of P16 and Ecadherin protein can be used as an important biological behavior marker for the carcinoma. The downregulation of both P16 and Ecadherin implies a poor prognosis. KEY WORDS gastric neoplasms; p16 gene; Ecadherin gene; immunohistochemistry p16 基因作为抑癌基因，其抑癌作用是通过编码的核磷酸蛋白 P16ink4 与cyclinD
8、竞争与依赖性细胞周期激酶 4（CDK4）/CDK6 结合，从而阻止细胞从 G1期进入 S 期。大量研究表明，p16 基因在肿瘤细胞株及原发肿瘤中频繁缺失，提示其参与了肿瘤的发生发展过程。Ecadherin 基因是一种广义的肿瘤转移抑制基因，其蛋白表达产物是钙依赖的上皮细胞黏附分子，分布于同种上皮细胞侧面中间连接处，介导同种亲和性上皮细胞细胞间的黏附，在维持组织结构的完整性和极性方面起重要作用。体外实验证明，其表达下调与细胞分化程度和肿瘤细胞浸润转移密切相关。本文采用 SABC 免疫组化方法检测原发胃癌组织中的 P16 和Ecadherin 蛋白的表达，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1
9、 材料及来源 选取青岛市中心医院病理科 19981999 年经病理诊断为原发性胃癌的手术切除标本 80 例（男 57 例，女 23 例，年龄 2881 岁，年龄中位数为 62.6 岁）。依据1988 年 IUCC 分期标准进行 PTNM 分期：期 21 例，期 15 例，期 29 例，期 15 例；有淋巴结转移者 54 例，无淋巴结转移者 26 例；未侵及浆膜者 39 例，侵及浆膜者 41 例。病人术前均未进行过放疗及化疗。另取 20 例胃良性病变组织（为青岛市中心医院 1999 年胃镜活检组织）作为对照。 1.2 免疫组化方法 3标本均常规经 40 g/L 甲醛溶液固定，石蜡包埋后存档，4
10、m 厚切片，行 SABC法染色。兔抗人 P16 多克隆抗体，鼠抗人 Ecadherin 单克隆抗体及 SABC 即用型试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司，经微波修复抗原，具体操作按说明书进行，DAB 显色。以胃癌组织表达阳性的切片作为阳性对照，以 PBS 代替一抗作为阴性对照。 1.3 结果判断 P16：细胞膜、胞浆或胞核呈清晰棕色为阳性，阳性细胞数（10 HP）25%为 P16阳性，无阳性细胞或阳性细胞数25%为 P16 阴性1。Ecadherin：阳性反应部位呈棕黄色颗粒状，以正常胃黏膜组织切片为阳性对照，胃癌细胞染色反应强度与正常胃黏膜相似者判为 Ecadherin（），较正常黏膜减弱者
11、为Ecadherin（），完全消失者为 Ecadherin（）。根据 SHIOZAKI 等2介绍的方法进行定性和半定量的分类。肿瘤细胞 Ecadherin 保留表达：所有肿瘤细胞均系Ecadherin（）；肿瘤细胞 Ecadherin 减弱表达：肿瘤细胞染色强度不一，呈（）、（）到（）均存在为异质性减弱表达；肿瘤细胞 Ecadherin 基本呈（）为消失表达。 2 结 果 2.1 胃癌和胃良性病变组织中 P16 与 Ecadherin 的表达 80 例胃癌组织中，17 例 P16 蛋白表达阳性，阴性表达率为 78.8%；20 例胃良性病变组织中，11 例 P16 蛋白表达阳性，阴性表达率为 4
12、5.0%,两组差异有极显著性（2=9.040,P0.01）。80 例胃癌组织中，10 例 Ecadherin 蛋白表达阳性，70 例呈减弱表达，减弱表达率为 87.5%；20 例胃良性病变组织均呈阳性表达，减弱表达率为 0，两组差异有极显著性（2=58.330，P0.01）。 2.2 P16 蛋白表达与胃癌临床分期的关系 4在伴有淋巴结转移和不伴有淋巴结转移的胃癌组织中，P16 阴性表达率分别为87.0%、61.5%,两组差异有极显著性（2=6.819,P0.01）。期胃癌 P16 阴性表达率为 66.7%,+期胃癌 P16 阴性表达率为 88.6%,两者差异有显著性（25.711,P0.05
13、）。 2.3 Ecadherin 蛋白表达与胃癌临床分期的关系 未侵及浆膜者和侵及浆膜者的 Ecadherin 减弱表达率分别为 76.9%、97.6%,两者差异有显著性（26.011,P0.05），随浸润深度的加深，Ecadherin 减弱表达率增高。伴淋巴结转移组和无淋巴结转移组 Ecadherin 减弱表达率分别为94.4%、73.1%,两者差异有显著性（25.503,P0.05）。期胃癌Ecadherin 减弱表达率为 77.8%,而+期胃癌 Ecadherin 减弱表达率为95.5%，两者比较差异有显著性（24.156,P0.05）。 2.4 P16 蛋白阴性表达与 Ecadheri
14、n 减弱表达的关系 80 例胃癌组织中，P16、Ecadherin 共同阳性表达者 6 例，占全部病例的7.5%;P16 阴性表达、Ecadherin 减弱表达者 59 例，占 73.75%;P16 阳性表达、 Ecadherin 减弱表达者 11 例，占 13.75%;P16 阴性表达、Ecadherin 阳性表达者4 例，占 5.0%。在 P16 阳性和阴性肿瘤中，Ecadherin 减弱表达率分别为 64.7%和 93.7%,两者差异有显著性（27.779,P0.01）。 3 讨 论 p16 基因定位于人染色体 9p21,其编码产物为 P16 蛋白。P16 蛋白可特异地与CDK4 或细胞
15、周期蛋白CDK4 复合物结合,抑制 CDK4 活性,从而抑制细胞由 G1期向 S 期转化,对细胞增殖周期起负性调节作用。p16 基因与人类恶性肿瘤的关系密切3。基因转染研究结果表明，用 p16 基因转染癌细胞则出现癌细胞生长的阻抑现象，反之 p16 基因缺失则导致肿瘤细胞的无限生长4。本研究结果显示，p16基因在胃良性病变组织中的阴性表达率为 45.0%,而在原发胃癌中阴性表达率为78.8%,提示 p16 基因失活与胃癌的发生可能有关。伴有淋巴结转移的胃癌，其 P165蛋白的阴性表达率高于不伴有转移者，提示 p16 基因的失活可能与胃癌的淋巴结转移有关。人们在肺癌、大脑胶质细胞瘤与黑色素瘤中，
16、也注意到 p16 基因失活与各自的转移表型的表达有密切关系5。有学者认为 p16 基因失活的生物学意义可能就在于它使某一细胞亚群获得生长优势，并使这些细胞表现出转移的特征6。本研究结果也显示，+期胃癌的 P16 蛋白阴性表达率显著高于期，说明 P16 蛋白阴性表达与胃癌 的自然病程密切相关，提示 p16 基因的失活不仅参与了胃癌的发生，亦参与了胃癌的进展过程，是胃癌的一个晚期事件。 Ecadherin 蛋白是介导细胞间及细胞与细胞外基质黏附的主要分子7，在维持上皮细胞间连接、控制细胞极性、分化及组织形态的发生等方面起重要作用。Ecadherin 蛋白表达减少或缺失后，胃癌细胞间的黏附力减弱，易使癌细胞弥漫生长，不能形成腺管，容易脱落及向远处转移。本
