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1、实验室常用技术参数资料(1)一、核酸及蛋白质常用数据1核苷三磷酸的物理常数化合物分 子 量max(pH7.0)1 摩尔溶液（pH7.0）中 max 时的 最大吸收值OD280/OD260ATP507259154000.15CTP48327190000.97GTP523253137000.66UTP484262100000.38dATP494259152000.15dCTP46727193000.98dGTP507253137000.66dTTP48226796000.712常用核酸的长度与分子量核酸核苷酸数分子量DNA48502（双链环状）3.0107pBR3224363（双链）2.81062
2、8SrRNA48001.610623SrRNA37001.210618SrRNA19006.110519SrRNA17005.51055SrRNA1203.6104tRNA（大肠杆菌）752.51043常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算1g=10-6g 1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g（2）分光光度换算：1A260双链 DNA=50g/ml1A260单链 DNA=30g/ml1A260单链 RNA=40g/ml（3）DNA 摩尔换算：1g 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol 末端1g pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp
3、 DNA=0.66g1pmol pBR322=2.8g1kb 双链 DNA（钠盐）=6.6105道尔顿1kb 单链 DNA（钠盐）=3.3105道尔顿1kb 单链 RNA（钠盐）=3.4105道尔顿（4）蛋白摩尔换算：100pmol 分子量 100，000 蛋白质=10g100pmol 分子量 50，000 蛋白质=5g100pmol 分子量 10，000 蛋白质=1g氨基酸的平均分子量=126.7 道尔顿（5）蛋白质/DNA 换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7104MW 蛋白质10，000MW 蛋白质=270bp DNA30，000MW 蛋白质=810bp DNA50，0
4、00MW 蛋白质=1.35kb100，000MW 蛋白质=2.7kb DNA4常用蛋白质分子量标准参照物（1）高分子量标准参照（2）中分子量标准参照（3）低分子量标准参照肌球蛋白分子量磷酸化酶 B97，400碳酸酐酶31，00肌球蛋白212，000牛血清白蛋白66，200大豆脻蛋白酶21，500-半乳糖甘酶B116，000谷氨酶脱氢酶55，000抑制剂磷酸化酶 B97，400卵白蛋白42，700马心肌球蛋白16，900牛血清白蛋白66，200醛缩酶40，000溶菌酶14，400过氧化氢酶57，000碳酸酐酶31，000肌球蛋白（F1）8，100醛缩酶40，000大豆脻蛋白酶21，500肌球蛋白
5、（F2）6，200抑制剂肌球蛋白（F3）2，500溶菌酶14，4005常用 DNA 分子量标准参照物DNA/HindDNA/EcoR/Hind+EcoRpBR322/Hae23130212262122758712394167421514840510465575804497350489436156434268458802322484335304346420273530202726757564 190423451125 158421321137519218974184118311247564 125 续上表pBR322/Hinf174/Hinf174/Hae 174/Tap163172614013
6、5329145177131181078117550655310087240439650082603327344417663102312984134828114122131142271872202494023454154200241943375151 1182072 二、常用缓冲液1分子克隆常用缓冲液2磷酸缓冲液（1）25下 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液的配制pH1mol/L K2HPO4(ml)1mol/L KH2PO4(ml)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.849.750.37.061.538.57.271.7
7、28.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2（2）25下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配制pH1mol/L Na2HPO4(ml)1mol/L NaH2PO4(ml)5.87.992.16.012.088.06.217.882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8:用蒸馏水将混合的两种 1mol/L 贮存液稀释至 1000ml，根据 Henderson- Hasselbalch 方程
8、计算其 pH 值：pH=pK+1g(质子受体/质子供体)在此，pK=6.86(25)。3电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青 FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过， 一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与 Dowex XG8混合床树脂共同搅拌 1 小时 进行去离子处理，并用 Whatman 1 号滤纸过滤 2 次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于- 70。常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris-乙酸（TAE）1：0.04mol/L Tris-乙酸50
9、：242g Tris 碱0.001mol/L EDTA57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-磷酸（TPE）1:0.09mol/L Tris-磷酸10:10g Tris 碱0.002mol/L EDTA15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-硼酸（TBE）a0.50.045mol/L Tris-硼酸5：54g Tris 碱0.001mol/L EDTA27.5 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)碱性缓冲液b1:50mmol/L NaOH1:5ml 10mol/L NaO
10、H1mmol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris-甘氨酸c1:25mmol/L Tris5:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS50ml 10% SDS(电泳级)说明：TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存 5溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以 1TBE 作为使用液（即 1：5 稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但 0.5 的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以 1：10 稀释的贮存液 作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小
11、， 故通过缓冲液的电流量通常较大，需要 使用 1TBE 以提供足够的缓冲容量。碱性电泳缓冲液应现用现配。Tris-甘氨酸缓冲液用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。2SDS 凝胶加样缓冲液：100mmol/L TrisHCl(6.8)200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含 DTT 的 2SDS 凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取 1mol/L 贮存液现加 于上述缓冲液中。4凝胶加样缓冲液缓冲液类型6缓冲液贮存温度0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青 FF40%（W/V）蔗糖水溶液40.25 溴酚蓝0.25%二甲苯青 FF15%聚蔗糖(Ficoll
12、400)室温0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青 FF430%甘油水溶液0.25%溴酚蓝40%(W/V)蔗糖水溶液4碱性加样缓冲液:300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA18%聚蔗糖(Ficoll400)0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青 FF4使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保 DNA 均匀进入样品孔内； 使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的 染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度无关。以 0.5TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长 300bp 的双链线状
13、 DNA 相同， 而二甲苯青 FF 的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA 相同。在琼脂糖浓度为 0.5%1.4%的范 围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪 染料，因为在碱性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。5各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH 值（25）0.1mol/L HCl 的体积714577244773434744207540376385773667834579320802928.126.28.222.98.319.98.417.28.5
14、14.78.612.48.710.38.88.58.97.0某一特定 pH 值的 0.05mol/L Tris 缓冲液的配制：将 50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液与上 表所示相应体积（单位：ml）的 0.1ml/L HCl 混合，加水将体积调至 100ml（2）温度对 50mmol/L TrisHCl 液 pH 值的影响42537817572827673837774847875857976868077878178888279898380908481918582928683938784948885（6）常用缓冲液的 pKa 值缓冲液分子量pKa 值缓冲范围Trisa12.18.087
15、.17.9HEPESb283.37.477.28.2MPOSc209.37.156.67.8PIPESd304.36.766.27.3MESe195.26.095.46.8a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺 酸；d：N，N-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。7温度对常用缓冲液 pH 的影响缓冲体系pKa(20)pKa/10Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110PiPes6.80-0.085Aces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.
16、55-0.014Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280三、常用酶的配制1溶菌酶用水配制成 50mg/ml 的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20。每一小份一经使用后 便予丢弃。2蛋白水解酶类贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理0.01mol/L Tris(pH7.8)链霉蛋白 酶a20mg/ml-20（溶 于水）1mg/ml0.01mol/L EDTA37自消化b0.5% SDS 0.01mol/L Tris(pH7.8)蛋白酶 Kc20mg/ml-20（溶 于水）50g/ml0.005
