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1、1. Biolog 生态板的应用原理生态板的应用原理Biolog ECO 板上有 32 个微孔，每 32 个孔为 1 个重复，每板共计 3 个重复。32 个微孔中除对照孔外各个孔中都含有一种不同的有机碳源和相同含量的四唑紫燃料。将微孔内的有机碳源作为微生物的唯一能量来源，微生物接种到微孔板的孔中后，若能利用碳源，即能够对其进行生物氧化，有电子转移，四唑紫燃料就能优先俘获电子而变成紫色。颜色的深浅反映了微生物对相对碳源的利用能力。通过 Biolog 系统的微平板读数器，测定 ECO板在 590nm 波长下的光密度值（OD 值） ，完成数据的采集与存储。运用主成分分析（PCA）或相似类型的多变量统
2、计分析方法展示不同处理条件下微生物群落产生的代谢特征指纹。其理论依据是 Biolog 代谢类型的变化与群落组成的变化相关。2. Biolog 测定方法测定方法（1）称取相当于 10.0g 干土的新鲜土壤放入三角瓶中，加入 90ml 灭菌的生理盐水（0.85% NaCl， W/V） ，用无菌棉花塞封口。（2）震荡 30min 后，静置 15min，用移液枪吸取 10ml 上清液，加入 90ml 灭菌生理盐水。（3）按逐步稀释法，将土壤悬液稀释为 10-3g/ml。（4）在超净工作台中用移液器将制备好的土壤悬液接种到 BIOLOG ECO 板的各孔中，每孔 150L。（5）将接种好的 BIOLOG
3、 ECO 板盖好盖子，放入 25C 的培养箱中培养 7 天。（6）每隔 24h 用 BIOLOG 读板仪在 590nm 下测定各孔的吸光度值。图 1 Biolog ECO 板中碳源分布结合有机化合物化学官能团、微生物代谢途径和生态功能 3 个方面，将 ECO 板的 31 种碳源底物分为 6 大类：糖类、氨基酸类、羧酸类、胺类、酚酸类和聚合物类。BIOLOG ECO 微平板 31 种不同碳源糖类氨基酸类羧酸类胺类酚酸类聚合物类-甲基-D-葡萄糖苷L-精氨酸-羟丁酸苯乙胺2-羟基苯甲酸吐温 40D-木糖/戊醛糖L-天门冬酰胺-丁酮酸腐胺4-羟基苯甲酸吐温 80i-赤藓糖醇L-苯丙氨酸D-葡糖胺酸-环式糊精D-甘露醇L-丝氨酸D-苹果酸肝糖N-乙酰-D 葡萄糖氨L-苏氨酸D-半乳糖醛酸D-纤维二糖甘氨酰-L-谷氨酸丙酮酸甲酯-D-乳糖衣康酸D-半乳糖酸 -内酯D, L-磷酸甘油1-磷酸葡萄糖
