HPLC的日常维护

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1、HPLCHPLC 日常维护办法之一：压力异常日常维护办法之一：压力异常作者: wxmwqr 收录日期: 2006-05-09 发布日期: 2006-05-09操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧 的列表中参考相应的解决方法。A、没有压力显示，没有流动相流动 原 因 解决方法 1、电源问题 1、接通电源，开机 2、保险丝被烧坏 2、更换保险丝 3、控制器设定不正确或设定失败 3、a、采取恰当的设定 b、修理或更换控制器 4、柱塞杆折断 4、更换柱塞杆 5、泵头内有空气 5、溶剂脱气、启动泵抽出空气 6、流动相不足 6、a、补充流动相 b、更换入口滤头 7、单向阀损

2、坏 7、更换单向阀 8、漏液 8、拧紧或更换手紧接头B、 流动相流动正常，但没有压力显示 原 因 解决方法 1、仪表损坏 1、更换仪表 2、压力传感器损坏 2、更换压力传感器C、压力持续偏高 原 因 解决方法 1、流速设定过高 1、调整流速设定 2、柱前筛板堵塞 2、a、在允许情况下反冲色谱柱 b、更换筛板 c、更换色谱柱 3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀 3、a、使用恰当的流动相 b、冲洗色谱柱 4、色谱柱选择不当 4、选择恰当的色谱柱 5、进样阀损坏 5、清洗或更换进样阀 6、柱温过低 6、提高温度 7、控制器失常 7、修理或更换控制器 8、保护柱阻塞 8、清洗或更换保护柱 9、在线过

3、滤器阻塞 9、清洗或更换在线过滤器D、 压力持续偏低 原 因 解决方法1、流速设定过低 1、调整流速 2、系统漏液 2、确定漏液位置并维修 3、色谱柱选择不当 3、选择恰当的色谱柱 4、柱温过高 4、降低温度 5、控制器失常 5、维修或更换控制器E、压力不断上升 原 因 解决方法 1、见列表 C 1、见列表 CF、压力降为零 原 因 解决方法 1、见列表 A、B 1、见列表 A、BG、压力不断下降，但不回零 原 因 解决方法 1、见列表 D 1、见列表 DH、压力波动 原 因 解决方法 1、泵中有气体 1、a、溶剂脱气 b、从泵中除去气体 2、单向阀损坏 2、更换单向阀 3、泵密封损坏 3、更

4、换泵密封 4、脱气不充分 4、a、溶剂脱气 b、改变脱气方法（使用在线脱气法等） 5、系统漏液 5、确定漏液位置并维修 6、使用梯度洗脱 6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动HPLC 日常维护办法之二：漏液 通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧 紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决 漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面 有杂质）；损坏的接头应该更换掉。A、接头处漏液 原 因 解决方法 1、接头松动 1、拧紧 2、接头磨损 2、更换 3、接头过紧 3、a、拧松，再重新拧紧 b、更换 4、接头被污染

5、4、a、拆下清洗 b、更换 5、部件不匹配 5、使用同一品牌的配件B、泵漏液原 因 解决方法 1、单向阀松动 1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧） b、更换单向阀 2、接头松动 2、拧紧接头（不必拧的过紧） 3、混合器密封损坏 3、a、更换混合器密封 b、更换混合器 4、泵密封损坏 4、维修或更换泵密封件 5、压力传感器损坏 5、维修或更换压力传感器 6、脉冲阻尼器损坏 6、更换脉冲阻尼器 7、比例阀损坏 7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换 b、检查手紧接头，损坏的立即更换 8、放空阀的损坏 8、a、拧紧放空阀 b、更换放空阀C、进样阀漏液 原 因 解决方法 1、转子密封损坏 1、重新安装或更换

6、进样阀 2、定量环阻塞 2、更换定量环 3、进样口密封松动 3、调整 4、进样针头尺寸不合适 4、使用恰当的进样针 5、废液管中产生虹吸 5、保持废液管高于废液液面 6、废液管阻塞 6、更换或疏通废液管D、色谱柱漏液 原 因 解决方法 1、尾端接头松动 1、拧紧接头 2、卡套内有填料 2、拆下、清洗卡套、重新安装 3、筛板厚度不合适 3、使用合适的筛板（参考下表） 筛板选择指导 物质粒径 筛板孔径 3-4u 0.5u 5-20u 2u E、检测器漏液 原 因 解决方法 1、流通池垫片损坏 1、a、避免过大的背景压力（压力降） b、更换垫片 2、流通池窗破碎 2、更换窗口 3、手紧接头漏液 3、

7、拧紧或更换 4、废液管阻塞 4、更换废液管 5、流通池阻塞 5、重新安装或更换HPLC 日常维护办法之三：谱图的各种问题 液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改 变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱 柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。A、峰拖尾 原 因 解决方法 1、筛板阻塞 1、a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱 2、色谱柱塌陷 2、填充色谱柱 3、干扰峰 3、a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱 4、流动相 PH 选择错误 4、调整 PH 值。对于碱性化合物，低 PH 值更 有利于 得到对称峰

8、 5、样品与填料表面的溶化点发生反应 5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性 修饰剂 b、更改色谱柱 B、峰前延原 因 解决方法 1、柱温低 1、升高柱温 2、样品溶剂选择不恰当 2、使用流动相作为样品溶剂 3、样品过载 3、降低样品含量 4、色谱柱损坏 4、见 A1、A2C、峰分叉 原 因 解决方法 1、保护柱或分析柱污染 图 1、取下保护柱再进行分析。如果必要更 换保护柱。如果分析柱阻塞，拆 下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再 生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。 2、样品溶剂不溶于流动相 2、改变样品溶剂。如果可能采取 流动相作为

9、样品溶剂。 D、峰变形 原 因 解决方法 1、样品过载 1、减少样品载量E、早出的峰变形 原 因 解决方法 1、样品溶剂选择不恰当 1、a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂 F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 原 因 解决方法 1、柱外效应 1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池G、K增加时，脱尾更严重 原 因 解决方法 1、二级保留效应，反相模式 1、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品） d、更换一支柱子 2、二级保留效应，正相模式 2、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入

10、水（或多官能团化合物） d、试用另一种方法 3、二级保留效应，离子对 3、加入三乙胺（或碱性样品）H、酸性或碱性化合物的峰拖尾 原 因 解决方法 1、缓冲不合适 1、a、使用浓度 50-100mM 的缓冲液 b、使用 Pka 等于流动相 PH 值的缓冲液 I、额外的峰 原 因 解决方法 1、样品中有其他组份 1、正常 2、前一次进样的洗脱峰 2、a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速 3、空位或鬼峰 3、a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积 J、保留时间波动 原 因 解决方法 1、温控不当 1、调好柱温 2、流动相组分变化 2、防止变化（蒸发、反应等） 3、色

11、谱柱没有平衡 3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化 原 因 解决方法 1、流速变化 1、重新设定流速 2、泵中有气泡 2、从泵中除去气泡 3、流动相选择不恰当 3、a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相 L、基线漂移 原 因 解决方法 1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检 测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。） 1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器 图 2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）2、使用 HPLC 级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用

12、前进行脱气， 使用中使用氦气。 3、流通池被污染或有气体 3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用 1N 的硝酸。（不 要用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线） 4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。 5、流动相配比不当或流速变化 5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。 6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用 10-20 倍体积的新 流动相对柱子进行冲洗。 7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及 HPLC 级的溶

13、剂 8、样品中有强保留的物质（高 K值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个 逐步升高的基线。 8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱 子。 9、使用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。 10、检测器没有设定在最大吸收波长处。 10、将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音（规则的） 原 因 解决方法 1、在流动相、检测器 1、流动相脱气。冲洗系统以除去 或泵中有空气 检测器或泵中的空气。 2、漏液 图 2、见第三部分。检查管路接头 是否松动，泵是否漏液，是否有盐 析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。 3、

14、流动相混合不完全 3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂 4、温度影响（柱温过高，检测器未加热） 4、减少差异或加上热交换器 5、在同一条线上有其他电子设备 5、断开 LC、检测器和记录仪， 检查干扰是否来自于外部，加以更正。 6、泵振动 6、在系统中加入脉冲阻尼器N、基线噪音（不规则的） 原 因 解决方法 1、漏液 图 1、见第三部分。检查接头是否 松动，泵是否漏液，是否有盐析出和 不正常的噪音。如有必要，更换密封。 检查流通池是否漏液。 2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 2、检查流动相的组成。 3、流动相各溶剂不相溶 3、选择互溶的流动相 4、检测器/记录仪电子元件的问题 4、断开检

15、测器和记录仪的 电源，检查并更正。 5、系统内有气泡 5、用强极性溶液清洗系统 6、检测器内有气泡 6、清洗检测器，在检测器后 面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污 7、用 1N 的硝酸（不能用磷酸） 染物也会产 生噪音。） 清洗流通池 8、检测器灯能量不足 8、更换灯 9、色谱柱填料流失或阻塞 9、更换色谱柱 10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常 10、维修或更换混合器， 在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置 O、宽峰 原 因 解决方法 1、流动相组成变化 1、重新制备新的流动相 2、流动相流速太低 2、调节流速 3、漏液（特别是在柱子和检测器之间） 3、见 section 3。检查接头是否松 动、泵是否漏液、是否有盐析出以 及不正常的噪音。如果必要更换密封。 4、检测器设定不正确 4、调整设定 5、柱外效应影响 a、柱子过载 b、检测器对反应时间或池体积响应过大 c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大 d、记录仪响应时间太长 图 5、 a、 小体积进样（例如：10ul 而不是 100ul）以 1：10 或 1：100 的比例稀释样 品 b、减少响应时间或使用更小的流通池 c、 使用