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1、钙视网膜蛋白在先天性巨结肠中的诊断价值钙视网膜蛋白在先天性巨结肠中的诊断价值童科融，朱进，金先庆，李晓庆，向丽，刘伟，刘洪江，李洪，王海涛(400014 重庆，重庆医科大学附属儿童医院胃肠新生儿外科) 摘要摘要 目的目的 探讨钙视网膜蛋白(calretinin,CR)诊断先天性巨结肠( Hirschsprungs disease,HD)的概率及意义。 方法方法 收集我院 2008 年 1 月至 2014 年 10 月经病理检查苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色确诊为 HD 病 例共 495 例的病案资料，包括钡剂灌肠(contrast enema,CE)、直肠肛管测压
2、(anorectal manometry,ARM)、经直 肠粘膜吸引活检(rectal suction biopsy,RSB)等结果，通过上述各项检查阳性率来比较其在诊断 HD 中的价值， 并分析出现 CR 阴性结果原因。 结果结果 495 例 HD 患儿中，435 例术前 CE，265 例术前 ARM，254 例 CR 检查， 其中术前经 RSB112 例，术后 142 例。CE、ARM 及 CR 诊断阳性率分别为 81.1%、90.6%、99.6%，其中 CR 阳性率术前为 98.2%，术后达 100%。 结论结论 诊断 HD 需依靠病史、典型的临床表现及辅助检查，特殊辅助检 查中 CR
3、阳性率术前为 98.2%，术后达 100%，因此 CR 可广泛用于临床，作为术前 HD 诊断的重要指标。 关键词关键词 先天性巨结肠；诊断；钙视网膜蛋白 中图法分类号中图法分类号 R726.5; R446.61 The diagnostic value of calretinin for Hirschsprungs diseaseKerong Tong1, Jin Zhu2, Xianqing Jin*, Xiaoqing Li, Li Xiang, Wei Liu, Hongjiang Liu, Hong Li, Haitao Wang(Department of Neonatal Gast
4、rointestinal Surgery, Childrens Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 40014, China)ABSTRACT Objective To research the probability and significance of calretinin for the clinical diagnosis of Hirschsprungs disease. Methods Collected the clinical data of 495 Hirschsprungs diseases cases
5、via pathological examination hematoxylin-eosin staining from Junuary 2008 to August 2014, including the outcomes of contrast enema, anorectal manometry and rectal suction biopsy, to compare the clinical value of the examinations by positive rates, and analysis the cause of the negative results of ca
6、lretinin. Result In 495 Hirschsprungs disease children, there were 435 preoperative contrast enema, 265 preoperative anorectal manometry, 254 calretinin staining examination which contains 112 by preoperative rectal suction biopsy and 142 post operation. The positive rates of contrast enema, anorect
7、al manometry, rectal suction biopsy were 81.1%、90.6%、99.6%, the positive rate of calretinin was 98.2% preoperation, 100% postoperation. Conclusion The clinical diagnosis of Hirschsprungs disease based on medical history, typical physical examination and auxiliary examination. The positive rate of ca
8、lretinin was 98.2% preoperation, 100% postoperation. Accordingly calretinin could be widely used in clinic, and it could be an important index in preoperative diagnosis of Hirschsprungs disease. Keywords Hirschsprungs disease; diagnosis; calretinin基金项目国家自然科学基金资助项目(No.81370474)；国家临床重点专科建设项目(国卫办医函2013
9、544）；重庆市卫生局 2013年医学科研计划项目（2013-2-053）Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China; Supported by the National Clinical Key Subject Construction Program; Chongqing Health Bureau of Medical Scientific Research Projects in 2013通讯作者：金先庆，电话：023-63638834，E-mail：Correspon
10、ding author：Jin Xianqing，Tel：023-63638834，E-mail：先天性巨结肠( Hirschsprungs disease,HD)又称 先天性肠无神经节细胞症(congenital aganglionosis)， 是小儿外科常见疾病之一。目前国内 0-3 月龄 HD 患儿术前诊断存在困难，罕见大宗病例报告，诊断 HD 依靠临床表现及特殊辅助检查，包括钡剂灌肠 (contrast enema,CE)、直肠肛管测压(anorectal manometry,ARM)以及直肠粘膜吸引活检(rectal suction biopsy,RSB)1。RSB 在各项辅助检查中
11、灵 敏度及特异度最高2。钙视网膜蛋白(calretinin,CR)是一种重要的钙结合蛋白，存在于早期胚胎发育的 肠神经系统(enteric nervous system,ENS)中，在肠粘 膜下神经丛及肌间神经丛中广泛存在，是一种同时 标记神经节细胞及神经纤维的神经标志物3。本研 究利用临床大样本检测 CR 在 HD 肠壁中的蛋白表 达，比较术前各项辅助检查方法诊断 HD 的阳性率， 探讨 CR 可否作为术前诊断 HD 的重要指标，为小 儿外科尤其是新生儿外科在 HD 的诊断及治疗提供 参考。Comment microsoft1: 直接说明什么 方法。1 材料与方法材料与方法 1.1 临床资料
12、 收集重庆医科大学附属儿童医院胃肠新生儿外 科 2008 年 1 月至 2014 年 10 月经病理检查 HE 染 色确诊为 HD 的 495 例住院患儿病案资料：男性患 儿 387 例，女性患儿 108 例；0-3 月龄 178 例，大 于 3 月龄 317 例，平均年龄 12 月 14 d。病案资料 包括钡剂灌肠、直肠肛管测压、经直肠粘膜吸引活 检行 CR 染色检查等结果。 1.2 仪器与检查方法 钡剂灌肠：采用德国 GMM OPERA 1000mA 胃肠机。直肠肛管测压：采用美国 Medtronic 公司 生产的 Polygraf ID 多道胃肠功能测定仪及美国 Sierra Scien
13、tific Instruments 公司生产的 ManoScanTM360 胃肠动力学检查系统。直肠粘膜吸 引活检：采用澳大利亚 Aus Systems Pty Ltd 公司的 HP1000，CP1200 型号粘膜活检吸引系统(rbi2)， 2.5mm 口径活检舱，吸引压力在 15-20mL，在齿状 线上 3cm 处在直肠后壁及侧壁个切取组织一块， 组织大小约 0.4cm0.2cm，厚度约 0.1cm。活检前 予回流灌肠 1 次。床旁行直肠粘膜吸引活检操作时， 无需麻醉，患儿取膀胱截石位，常规消毒铺巾，活 检舱安装于活检钳头部，石蜡油涂抹活检舱，将活 检钳头部插入肛门，置于齿状线上 3cm 处
14、，将吸引孔紧贴直肠后壁，助手用注射器做负压吸引，使 粘膜及粘膜下层组织进入吸引孔内，活动切割器切 取组织，取出活检钳用生理盐水冲洗，使组织由活 检舱处冲出，同法切取直肠侧壁组织 1 块，将 2 块 组织标本置于 10%甲醛中固定送检，通过 HE 染色 检查粘膜下有无神经节细胞，免疫组织化学染色方 法检查 CR 表达情况。 1.3 统计学方法 采用 SPSS 19.0 统计学软件，2检验评价 3 种 辅助检查方法。 2 2 结果结果 2.1 CE、ARM、CR 辅助检查结果 495 例 HD 患儿中，435 例 CE 中提示 HD 诊断 的有 353 例，表现为 24 h 钡剂排空延迟或可见典
15、型痉挛段、移行段及扩张段影像，未见典型 HD 征 象的有 82 例，确诊率 81.1%；265 例 ARM 中未能 引出典型直肠肛门抑制反射(rectoanal inhibitory reflex,RAIR)的有 240 例，能引出 RAIR 的有 25 例， 确诊率 90.6%；254 例 CR 检查中 CR 阴性 249 例， CR 阳性 5 例，确诊率 98.0%，见表 1。0-3 月龄 HD 患儿 CE 确诊率 78.3%；ARM 确诊率 89.6%；CR 确诊率 97.5%，见表 2。大于 3 月龄 HD 患儿 CE 确诊率 82.4%；ARM 确诊率 91.0%；CR 确诊率 98
16、.5%，见表 3。表 1.495 例 HD 患儿各项辅助检查结果组别检查项目例数阳性结果阴性结果1钡剂灌肠（CE)435353（81.1%）82（18.9%）2直肠肛管测压（ARM）265240（90.6%）25（9.4%）3钙视网膜蛋白（CR）254249（98.0%）5（2.0%）注：卡方检验 1、22=11.28，P=0.0010.05；1、32 =41.43， P=0.0000.05；2、32=13.27，P=0.0000.05表 2.0-3 月龄 HD 患儿各项辅助检查结果组别检查项目例数阳性结果阴性结果1钡剂灌肠（CE)129101（78.3%）28（21.7%）2直肠肛管测压（ARM）7769（89.6%）8（10.4%）3钙视网膜蛋白（CR）119116（97.5%）3（2.5%）注：卡方检验 1、22=4.28，P=0.0390.05；1、32 =20.83， P=0.0000
