化学发光简介

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1、化学发光简介化学发光是当前体外检测的主流，现常用的主要有板式发光和磁微粒化学发光（磁微球是重点）我主要说说磁微球的方面，板式发光类似两者使用的主要制备过程（技术手段）：1.包被：将抗体或者抗原包被于微孔板上或者磁微球上面 和金类似，也会涉及到直标和放大标记（链酶亲和素-生物素放大系统） ，以及比例的关系。以磁微球为例： （1）直径的选择：一般会在几百纳米到几微米之间（2）磁微球基团的选择：氨基基团和羧基基团（3）活化剂：如果氨基磁微球，活化剂就用戊二醛；如果是羧基磁微球，活化剂就用 NHS和 EDC。 （磁微球都是标明上面带的是什么基团）（4）是否用放大系统：和金标选择一样，主要是灵敏度，稳定

2、性等考察。磁微球包被的具体过程： 1）活化磁微球基团2）包被抗体，涉及到比例关系3）蛋白封闭，一般用 BSA标记：用过氧化物酶（HRP）标记抗原或者抗体主要步骤：1.先纯化抗体（抗体里含有杂质）:透析，或者过柱子2.将 HRP 氧化，使它能够标记抗体或者抗原3.终止氧化，使用一定量的乙二醇4.交联：就是标记抗体（这里面会涉及到抗体与 HRP 比例的选择）5.还原：将抗体HRP 还原成稳定的酶标记物。6.纯化：透析或者过柱，只留需要的抗体酶备注：磁微球包被抗体，酶标记抗体主要技术。化学发光的原理：之所以叫做化学发光，就是因为它是靠化学手段从而发光的，我们最后都是测得发光的强度值，从而确定样本的浓

3、度，从而得知病人是否得病。辣根过氧化物酶（HRP）系列发光需要的原料：1.HRP， （在抗体上）2.底物 A,B。A 中是过氧化氢，B 是鲁米诺 反应原理是鲁米诺只有用氧化剂处理过才会发光鲁米诺+氧化剂某种衍生物+光子氧化剂是过氧化物酶分解过氧化氢得来的反应步骤是1.往微孔板中加入磁微球抗体复合物2.加入样本（抗原） ，抗原会和磁微球-抗体结合，温育一段时间。洗涤除去没有结合的抗原和抗体复合物3.加入酶抗体复合物，酶抗体复合物会和抗原-抗体-磁微球结合，温育一段时间，洗涤。4.加入反应底物 A,B。通过化学发光免疫分析仪读数A 中含有过氧化氢，会被 HRP 分解成水和氧气。而鲁米诺要发光的话，需要大量的氧化剂（可用氧气） 。所以关系是：抗原接的抗体酶越多，所得的氧化剂越多，那么产生的光子数就越多，那么读数也就越强。你就主要记 HRP 吧，吖啶酯和 HRP 类似。HRP 对于面试够用了。