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1、1外阴 HPV 感染患者中宫颈 HPV 分型检测作者：施铮铮，杨孝军，许张晔，陈云琴，郑飞云 【摘要】 目的:研究外阴尖锐湿疣(Condyloma acuminata，CA)和外阴鲍温样丘疹病(Bowenoid papulosis，BP)患者宫颈细胞人乳头瘤病毒(HPV)的检出情况，尝试为此类患者群的宫颈病变筛查或宫颈癌的防治提供流行病学依据。方法:选取自2007 年 1 月至 6 月间在我院妇科门诊首次就诊的 44 例外阴 CA 和 7 例外阴 BP患者，采集宫颈细胞应用导流杂交基因芯片技术（凯普 HPV 分型）行 21 种 HPV-DNA 亚型检测；同期检测 54 例慢性宫颈炎患者作对照。
2、结果:外阴 CA 组和 BP 组的宫颈高危型 HPV 检出率分别为 56.82 %和 85.71%，均显著大于对照组（20.37%），P 0.01；外阴 HPV 感染组较对照组更易发生高危型 HPV 的多重感染(P 0.05)，其中以二重和三重感染为主；外阴 CA 患者的宫颈 HPV 感染以低危型 11、6 亚型为主，高危型 HPV 感染中以 58、16、52 亚型位居前三位，其中检出 CIN II 级 1 例；外阴 BP 组中宫颈 HPV 感染以 16 亚型为主，检出 CIN I 级、II级共 2 例。结论:外阴 CA 和 BP 患者临床体征明显，易于诊断，但可能会伴发宫颈高危型 HPV 感
3、染，从而导致宫颈上皮内瘤变（CIN）甚至宫颈癌的发生。 【关键词】 外阴；尖锐湿疣；鲍温样丘疹病；宫颈；HPV 感染随着对人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）与女性生殖器相关疾病研究的深入以及 HPV 检测技术的不断升级，临床中女性生殖道 HPV 感染的检出率亦随之增加。外阴 HPV 感染可致外阴的尖锐湿疣(Condyloma acuminata，CA) 和鲍温样丘疹病(Bowenoid papulosis，BP)等疾病。但 HPV 多灶性感染的特征，可能会2同时导致宫颈细胞的 HPV 感染1，其早期多表现为潜伏性感染和亚临床感染（subclinical huma
4、n papilloma virus infection，SPI），肉眼难以识别，易被忽视。现已明确高危型 HPV 持续性感染是宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌的主要致病因素。我们应用凯普导流杂交基因芯片技术，采集外阴 CA、BP 患者的宫颈细胞行HPV-DNA 的分型检测，以研究此类患者中宫颈感染 HPV 的型别及伴发相关宫颈疾病的状况。1 资料和方法1.1 一般资料 选择自 2007 年 1 月至 6 月间在本院妇科门诊首次就诊的患者，均主诉外阴赘生物，经活检病理确诊为外阴 CA 患者 44 例，外阴 BP 患者 7 例。年龄 1863 岁，平均（36.211.1）岁。外阴 CA 患者中宫颈
5、检查发现疣状赘生物者 9例，不同程度宫颈糜烂者 36 例；外阴 BP 患者中宫颈检查未发现赘生物，宫颈糜烂 4 例。选取同期就诊的 54 例外阴正常而患慢性宫颈炎者作为对照组，其中临床检查宫颈糜烂者 44 例，年龄 2154 岁，平均（37.37.4）岁，两组年龄相比差异无显著性（P0.05）。1.2 方法 1.2.1 按照凯普导流杂交 HPV-DNA 检测法要求，两组研究对象均用无菌棉签拭净宫颈口分泌物，专用 HPV 采样刷紧贴宫颈口及宫颈管旋转取得脱落细胞，再将宫颈刷放入盛有细胞保存液和识别编号的取样管中待检。采用凯普医用核酸分子快速杂交基因分型试剂盒作 HPV-DNA 检测及分型。实验操
6、作与结果判断按试剂盒要求进行：宫颈细胞 HPV-DNA 提取、PCR 扩增；核酸分子快速导流杂交；显色 HPV 基因分型。该试剂盒可检测 13 种高危型 HPV-3DNA：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 亚型；5 种低危型 HPV-DNA：6、11、42、43、44 亚型；另可检测出 3 种中国人群特有的高危亚型 HPV 53、66 亚型及 CP8304；共计 21 种 HPV 亚型。本研究中，将缺乏细胞形态学变化，仅 HPV-DNA 检测呈阳性者称为 HPV 的潜伏性感染2；芯片上 HPV 亚型分布显色后出现二点或二点以上阳性即为多重感染3。1.
7、2.2 外阴 CA 和 BP 组中，肉眼可识别的宫颈疣样赘生物直接取组织活检。其余患者及对照组患者均接受阴道镜下宫颈多点活检，行病理检查以明确是否存在SPI 或 CIN，病理阅片时出现挖空细胞即判断为 SPI2。1.3 统计学处理方法 采用 SPSS13.0 软件包，计量资料行 t 检验，计数资料行列联表 x2 检验。2 结果2.1 宫颈 HPV-DNA 亚型的感染情况 44 例外阴 CA 患者中仅 5 例宫颈细胞HPV-DNA 检测呈阴性（占 11.36%），病理检查为慢性宫颈炎，而有 39 例检测均呈阳性（占 88.64%），其中肉眼可识别的宫颈 HPV 病变有 9 例，组织活检为宫颈尖锐
8、湿疣，余 30 例经病理学证实分别为宫颈 HPV 潜伏性感染 27 例，SPI 2 例，CIN级 1 例。外阴 CA 中 25 例宫颈细胞检出高危型别 HPV。7 例外阴 BP 患者中 1 例宫颈细胞 HPV-DNA 检测呈阴性（占 14.29%），病理检查为慢性宫颈炎，6例 HPV 检测呈阳性（占 85.71%），均为高危型，经病理学证实分别为宫颈 HPV 潜伏性感染 4 例，CIN级 1 例，CIN级 1 例。对照组 54 例，宫颈组织病理检查均为慢性宫颈炎，其中宫颈 HPV 检测呈阳性者 11 例（占 20.37%），均为高危型。各4组 HPV 感染型别检测结果详见表 1。外阴 CA 组
9、和外阴 BP 组的宫颈高危型 HPV检出率分别显著大于对照组，差异有显著性（P 0.01），见表 2。2.2 外阴 HPV 感染组和对照组间宫颈高危型 HPV 单一型别与多重感染的情况 外阴 HPV 感染组（包括外阴 CA 组与 BP 组）中宫颈 HPV 单一型别感染 18 例，其中低危型 12 例，高危型 6 例；多重感染 27 例，其中 2 例为低危型 6+11 的二重感染，25 例为含有高危型的多重感染，包括二重感染 12 例（发生 CIN、级各 1例），三重感染 7 例（发生 CIN级 1 例），四重感染 2 例，五重感染 2 例，六重感染 2 例。外阴 CA 组的 HPV 多重感染中
10、均包含有 HPV6 和（或）11 低危型别。而对照组 54 例中 11 例宫颈 HPV 阳性者均为高危型潜伏性感染，其中单型感染 7 例，多重感染 4 例，包括二重感染 2 例、三重感染 2 例。两组比较，外阴 HPV 感染患者宫颈高危型 HPV 的多重感染率显著大于对照组，差异有显著性（P 0.05），见表 3。3 讨论迄今已发现的 100 多种 HPV 亚型中有近 40 种能感染女性生殖道。已明确外阴CA 是 HPV 感染所致的外阴鳞状上皮疣状增生病变，主要与HPV6、11、42、43、44 等低危亚型有关，少数为高危型或混合型感染4。外阴 BP则是 HPV 感染所致的外阴丘疹样皮损，主要
11、与高危型 HPV 感染密切相关，包括HPV 16、18、31、35、39、42、48 和 5154，尤其是 HPV16 感染5。本研究应用凯普 HPV 分型检测技术，检测出外阴 CA 患者中宫颈 HPV 感染以低危型 11、6 为主，高危型 HPV 感染中以 58、16、52 亚型位居前三位，高危型 HPV 的多重感染中均包含 HPV6、11；外阴 BP 患者中宫颈 HPV 感染均为高危型别，并以 16 亚型为主，其次为 52 和 58 亚型。外阴 CA 和 BP 患者的宫颈 HPV 感染型别与外阴原5发病灶的 HPV 感染型别特点相同。且外阴 CA 和外阴 BP 患者宫颈高危型 HPV的检出
12、率均显著大于对照组（P 0.01），提示外阴 HPV 感染患者更易合并宫颈高危型 HPV 感染。而研究证明，宫颈感染HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 等高危亚型还与宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌的发生关系密切6。因此，临床上有必要在外阴 CA 和 BP患者群中检测宫颈高危型 HPV 的感染状况，以了解可能存在的宫颈病变。 研究报道：HPV 在正常宫颈组织中的阳性率为 10%30%，绝大部分 HPV 感染会被机体免疫力自动清除，仅 5%10%发展为持续性感染7。本研究对照组中宫颈HPV 检测呈阳性者占 20.37%，与文献相符，但均为高危型，可
13、能与对照组中多为宫颈糜烂而就诊的慢性宫颈炎患者有关。Ho 等8认为 HPV 多重感染者体内正常免疫状态紊乱，易出现持续感染。而高危型 HPV 的持续感染是宫颈癌及其癌前病变发生发展的必要条件。因此，高危型 HPV 的多重感染更易导致宫颈病变。本研究发现外阴 HPV 感染组宫颈高危型 HPV 的多重感染率亦显著大于对照组（P 0.05），主要是二重感染和三重感染。因此，在积极治疗外阴 CA 和 BP 患者原发病灶的同时，还需及时检测其宫颈HPV 的感染状态及分型。利用导流杂交基因芯片技术检测 HPV 分型，快速简便准确，尤其针对高危型和多重 HPV 感染的宫颈糜烂患者，应同时结合宫颈细胞学、阴道
14、镜与宫颈病理检查，及时发现、治疗 SPI 和 CIN，以阻断 HPV 的持续性感染，预防宫颈癌的发生。【参考文献】1 Schneider A. Pathogenesis of genital HPV infectionJ.Genitourin Med,1993,69(3):165-173. 2 宋学红,于秀梅,翁梨驹,等. 外阴尖锐湿疣患者子宫颈人乳头瘤病毒感染的检6测J.中华妇产科杂志,1994,29(11):673-676.3 陶萍萍,卞美璐,李敏,等. HPV 多重感染与宫颈病变关系探讨J.中国妇产科临床杂志,2006,7(2):94-96.4 陈家林,邓超干,许晓清,等. 基因芯片对尖
15、锐湿疣患者 HPV 的检测和基因分型J.河北医学,2006,12(2):105-107.5 Beaudenon S,Kremsdorf D,Croissant O,et al. A novel type of human papillomavirus associated with genital neoplasiasJ.Nature,1986,321(6067):246-249.6 Muz N,Bosch FX,de Sanjos?et al. Epidemiologic classifi-cation of human papillomavirus types associated wit
16、h cerviccancerJ.N Engl J Med,2003,348(6):518- 527.7 Herrero R,Castle PE,Schiffman M,et al. Epidemiologic profileof type-specific human papilloma virus infection and cervicalneoplasia in Guanacaste J.J Infect Dis,2005,191(11):1796-1807.8 Ho GY,Burk RD,Klein S,et al. Persistent genital humanpapillomavirus infection as a risk factor for persistent cervicaldysplasiaJ.J Natl Cancer Inst,1995,87(18):1365- 1371.
