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1、1益气养阴、活血化瘀方对实验性病毒性 扩张型心肌病小鼠外周血 -干扰素的 影响作者：赵艳霞 周亚滨 崔志勇 张晶【摘要】 ：目的 通过检测小鼠外周血 -干扰素(-IFN)水平,探讨益气养阴、活血化瘀方对病毒性扩张型心肌病小鼠的作用机制。方法 Balb/c 小鼠 210 只,随机分为4 组,空白组 30 只,模型组及中药高、低剂量组各 60 只。采用多次腹腔注射柯萨奇B3m 病毒的方式,建立重复感染的早期病毒性扩张型心肌病动物模型。中药高、低剂量组用益气养阴、活血化瘀方治疗,于治疗 4 周后观测小鼠心肌病理形态学改变、死亡率、体重、心脏质量指数变化,双抗体夹心 ELISA 法测定外周血 -IFN
2、 水平。结果 益气养阴、活血化瘀方能促进病毒性扩张型心肌病小鼠 -IFN 诱生,中药高、低剂量组与模型组实验结果经统计学处理有显著差异。结论 益气养阴、活血化瘀方具有抗病毒、调节免疫功能的作用。 【关键词】 益气养阴 活血化瘀方 -干扰素 病毒性扩张型心肌病 柯萨奇 B3m病毒Abstract：Objective To investigate the effect of the prescription of Yiqiyangyin Huoxuehuayu on the mice model with viral dilated cardiomyopathy by examining the
3、levels of serum -IFN. Methods Replicated the animal models of early viral dilated cardiomyopathy by injecting the CVB3m virus to the peritoneal cavity of the Balb/c mice. Two hundred and ten Balb/c mice were divided into 4 groups at random：blank group, model group, high and low dose traditional Chin
4、ese medicine group. The blank group has 30 mice. The other three group has 60 mice each. The mice of high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group were treated with the prescription of Yiqiyangyin Huoxuehuayu. The change of pathomorphology in the cardia
5、c muscle tissue, the rate of death, the weight change and the cardiac weight index were observed after 4 weeks of the treatment. At the same 2time, ELISA method was used to exam the levels of serum -IFN. Results The prescription of Yiqiyangyin Huoxuehuayu can induce the expression of serum -IFN in t
6、he mice with viral dilated cardiomyopathy. The mean level of serum -IFN of the high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group were significantly higher than that of the model group. Conclusions The prescription of Yiqiyangyin Huoxuehuayu can inhibit the
7、viral replication and regulate the immunologic function.Key words：the prescription of Yiqiyangyin Huoxuehuayu；-IFN；viral dilated cardiomyopathy；CVB3m扩张型心肌病是一种常见的特发性心肌病,以左心室或双心室扩大、心肌收缩力明显降低为特征。其病因及发病机制尚未阐明,且目前尚无有效的防治方法,预后极差。近年研究表明,多数扩张型心肌病与病毒感染及自身免疫反应有关1-2,且已发现病毒性心肌炎可演变为扩张型心肌病。益气养阴、活血化瘀方治疗扩张型心肌病临床收到较
8、好的疗效。本实验通过对病毒性扩张型心肌病小鼠外周血 -干扰素(-IFN)水平测定,探讨益气养阴、活血化瘀方防治病毒性扩张型心肌病的作用机理。1 实验材料1.1 病毒柯萨奇 B3m 病毒(Nancy 株,哈尔滨医科大学克山病研究所提供),在 Hela 细胞中传代,冻融 3 次,离心(2 000 r/min10),上清液分装,在 Hela 细胞中测 50%组织感染率(TCID50)为 10-7, -70 保存备用。1.2 药物益气养阴、活血化瘀方由黄芪、红参、生地黄、麦冬、五味子、川芎、丹参、板蓝根、大青叶等药物组成。中药经水提取,制成浸膏,含水量为 21%。用蒸馏水稀释,调3整浓度为 82%,即
9、相当于每 1 mL 悬液中含原药材 4.3 g,备用,黑龙江中医药大学制剂室提供。1.3 动物雄性 Balb/c 小鼠 210 只,34 周龄,购自北京军事医学科学院实验动物中心,动物合格证号：SCXK-(军)。分笼饲养,每笼 10 只,室温(263),均食用普通饲料。2 实验方法2.1 造模及分组210 只 34 周龄雄性 Balb/c 小鼠,适应性喂养 1 周后,随机分为 4 组：空白组 30只,模型组 、中药高剂量组、中药低剂量组各 60 只。模型组、中药高剂量组、中药低剂量组均于实验的第 1、8、15、22、36、50 日分别给予腹腔注射 RML640 液稀释的 0.1 mL10-4
10、TCID50 CVB3m、0.1 mL10-3 TCID50 CVB3m、0.2 mL10-3 TCID50 CVB3m、0.1 mL10-3 TCID50 CVB3m、0.1 mL10-3 TCID50 CVB3m、0.1 mL10-3 TCID50 CVB3m。空白组于实验的第 1、8、15、22、36、50 日均给予同体积的 RML640 液。2.2 给药及取材各组均于末次病毒注射后 10 d,即实验的第 60 日开始灌胃给药。中药高剂量组、中药低剂量组分别给予益气养阴、活血化瘀方混悬液灌胃,中药低剂量组 10.35 g/(kgd),中药高剂量组 20.7 g/(kgd),以上给药剂量均
11、为原药材量。模型组和空白组灌以同体积蒸馏水,每日 1 次,连续 4 周。实验结束时,用电子天平称取小鼠体重。无菌摘取小鼠眼球取血,3 000 r/min 离心,取血清,-70 保存待用。之后处死小鼠,4无菌取心脏,4 预冷生理盐水冲洗血污,滤纸吸干,电子天平称取心脏重量。剪取部分心肌组织,置 4%多聚甲醛中固定,常规包埋,做病理检验。 2.3 指标检测根据相应 ELISA 试剂盒说明书操作(试剂盒购于博士德生物工程有限公司)；测定心脏与体重的比值,即心脏与体重质量比(mg/g),作为心脏肥大指标；光镜电镜观察心肌组织。2.4 统计学方法应用 SPSS13.0 for Windows 统计软件进
12、行统计分析。计量资料应用 xs 表示,多组均数间的比较应用方差分析,两两比较应用 q 检验,样本率的比较用 2 检验。3 结果3.1 各组小鼠死亡率(见表 1)表 1 各组小鼠死亡率比较（略）注：与空白组比较,P0.053.2 各组小鼠心肌组织病理形态学改变空白组小鼠心肌组织结构正常。光镜下,模型组小鼠心肌纤维排列紊乱、断裂,心肌细胞肥大,空泡变性,血管充血出血,少量炎细胞浸润,间质纤维化明显。电镜下,模型组小鼠心肌超微结构表现为心肌细胞核变大,可见双核仁,核膜明显不规则,线粒体明显增多,增生的线粒体嵴为板层体,同时也可见线粒体嵴融合,肌节结构不清,肌丝溶解、断裂,M 线消失,间质胶原纤维增生
13、明显,间质纤维母细胞增生活跃。中药低剂量组及中药高剂量组小鼠心肌组织结构改变均较模型组轻微。53.3 各组小鼠体重、心脏质量指数变化(见表 2)表 2 各组小鼠体重、心脏质量指数变化(略)注：与空白组比较,P0.05；与模型组比较,P0.05,P0.013.4 各组小鼠外周血 -干扰素水平变化(见表 3)表 3 各组小鼠外周血 -IFN 水平比较(略)注：与空白组比较, P0.01；与模型组比较,P0.01；与中药低剂量组比较,P0.014 讨论近年来研究发现,扩张型心肌病与病毒持续感染和自身免疫病变有关,后者包括细胞免疫和体液免疫。业已发现,扩张型心肌病与 T 细胞功能变化、T 细胞亚群比例
14、异常及细胞因子分泌异常密切相关,Th2 水平升高,辅助 B 细胞产生心肌自身抗体,造成免疫异常3。-IFN 作为重要的细胞因子,在扩张型心肌病病程发展中发挥着重要的调节作用4：促进 Th0 细胞向 Th1 细胞分化5,通过抑制白细胞介素-4 的产生,阻滞 Th2 的增殖分化6,调整 Th1/Th2 比例,从而抑制体液免疫,调节自身免疫；-IFN 还可通过诱导抗病毒蛋白直接抑制病毒复制7；活化 NK 细胞,形成 IFN-NK 系统8,抵御病毒感染；诱导一氧化氮产生,而发挥抗病毒、扩张血管保护心肌作用9。有研究发现,扩张型心肌病小鼠外周血中 -IFN 水平较低10,可能使 Th1/Th2 比例异常
15、更加难以纠正,体液免疫损伤加重。本实验检测模型组 -IFN水平较空白组明显降低,与文献报道一致,中药高剂量组及中药低剂量组 -IFN 水平较模型组明显升高,且其病理改变均较模型组轻微,证实益气养阴、活血化瘀方对病毒性扩张型心肌病有一定的防治作用。其作用机制可能与调节机体免疫水平,6诱生体内 -IFN、抗病毒复制、纠正 Th1/Th2 比例异常进而减轻体液免疫损害有关,其深入机理有待进一步研究。【参考文献】1 Marriott JB, Goldman JH, Keeling PJ, et al. Abnormal cytokine profiles in patients with idiopa
16、thic dilated cardiomyopathy and their asymptomatic relativeJ. Heart,1996,75(3)：287.2 Limas CJ. Cardiac autoantibodies in dilated cardiomyopathy： A pathogenetic roleJ. Circulation,1997,95：1979.3 Eriksson U, Kurrer MO, Schmitz N, et al. Interleukin-6-deficient mice resist development of autoimmune myocarditis associated with impaired upregulation of complements C3 J. Circulation, 2002, 107：32032
