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1、1三七超细粉体对兔缺血再灌注心肌 ICAM1 蛋白表达的影响作者：朱晓奕 周亚平 吴建农 辛淮生 傅海珍【关键词】 三七超细粉体； 缺血再灌注损伤； 细胞间黏附分子1目前，缺血心肌再灌注治疗的技术如溶栓治疗，经皮冠状动脉腔内成形术和冠状动脉旁路移植术等仍是治疗缺血性心脏病普遍采用的措施1。但是国内外大量的研究表明，缺血再灌注后已经受损的心肌不一定能恢复正常的功能和结构，甚至还会出现损伤加重的表现，如再灌注心律失常，心肌顿抑，内皮损伤等。探索防治心肌缺血再灌注损伤的药物是当今医学研究热点之一。中药三七是五加科人参属多年生草本植物三七的根。多项实验证实普通三七粉及提取物三七总皂苷（Panax no
2、toginseng saponins,PNS）对大鼠、家兔、犬的心肌缺血再灌注损伤有较强的保护作用2-4。细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule1, ICAM1)是一种很强的蛋白类致损因子，在缺血再灌注心肌细胞表面 ICAM1 量可成倍增加5。本研究利用兔心肌缺血再灌注模型，以心肌 ICAM1 蛋白表达为指标，进一步研究经超细粉碎的三七超细粉体对缺血再灌注心肌损伤的影响，为中药剂型改革以防治再灌注损伤提供实验依据。1 材料与方法1.1 动 物健康成年日本大耳白兔 40 只，雄性，体质量 2.02.5 kg，由江苏大学医学院实验动物中心提供。实验前饲养于
3、安静通风、光线充足的环境中，室温 1525。21.2 药品与试剂三七为云南产，经作者鉴定为 Panax notoginseng（Burk）F.H.Chen 的根。三七超细粉体，系三七超微粉碎，由南京理工大学化工学院加工，粒径 20 m 以下；三七颗粒，由江苏大学药学院制备，普通粉碎机粉碎，过 40 目筛。ICAM1 抗体及免疫组化试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司。1.3 方 法1.3.1 实验分组 将 40 只兔随机分为 5 组，每组 8 只。假手术组：每天以生理盐水 4 ml/kg 连续灌胃 7 d，末次灌胃 1 h 后行手术；缺血再灌注组：处理同假手术组；三七颗粒组：以三七颗粒 0.
4、6 g/kg 溶于生理盐水 4 ml 中，以 4 ml/kg 连续灌胃 7 d后处理同假手术组；三七超细粉体小剂量组：以三七超细粉体 0.3 g/kg 溶于生理盐水 4 ml 中，处理同三七颗粒组；三七超细粉体大剂量组，以三七超细粉体 0.6 g/kg溶于生理盐水 4 ml 中，处理同三七颗粒组。1.3.2 动物模型的制备6 3%戊巴化妥钠 30 mg/kg 耳缘静脉注射麻醉，仰卧固定，常规记录肢体导联心电图。沿胸部中线纵切皮肤，显露胸骨和软骨部分，沿左胸骨边缘切断 3，4 肋软骨，避免损伤胸膜和胸廓内血管，维持自主呼吸，显露心脏，剪开心包膜，于左冠状动脉前降支近起始部 68 mm 处穿一 3
5、0 丝线，假手术组只穿线不结扎，余组用丝线结扎阻闭血管，以心电图导联 ST 段升高，T波高耸，结扎线以下心肌组织颜色由正常变苍白再变暗为心肌缺血造模成功，30 min 后松开血管，恢复左前降支血流，再灌注 60 min，摘取心脏。1.3.3 ICAM1 蛋白表达水平测定 取各组左心室处心肌组织冷冻切片，进行免3疫组化反应染色，严格按说明书操作，DBA 显色，显微镜观察，阳性颗粒呈棕黄色，结果采用计算机医学图像分析仪处理，测定 ICAM1 蛋白阳性心肌面密度值。1.3.4 统计学方法 采用 SPSS11.5 统计分析软件，数据以均数标准差（s）表示，均数的比较用 F 检验，各组间差异用 q 检验
6、。P 0.05 表示差异有统计学意义。2 结 果各组缺血再灌注心肌 ICAM1 蛋白表达的变化见表 1。结果表明，结扎冠状动脉 30 min，再灌注 60 min 后各组心肌 ICAM1 蛋白表达显著高于未结扎的假手术组，应用三七颗粒及三七超细粉体（大、小剂量）预处理的组别 ICAM1 蛋白表达明显低于缺血再灌注组。三七超细粉体大、小剂量两组 ICAM1 蛋白表达又明显低于三七颗粒组。三七超细粉体大、小剂量两组之间比较差异无统计学意义。表 1 各组再灌注 60 min 后 ICAM1 蛋白表达 3 讨 论三七的主要活性成分为三七总皂苷，现代药理研究表明，三七总皂苷具有明显地降低心肌耗氧量、改善
7、心肌缺血、降血脂、防止动脉粥样硬化、抗心律失常等作用7，8。目前微粉化技术在中药材中不断得到运用，我们前期的对比研究表明三七超细粉体有效成分的溶出度明显优于三七常规颗粒，证实了微粉化技术在三七应用中的可行性。ICAM1 属于免疫球蛋白超基因家族，在血管内皮表达量最高。心肌细胞在正常情况下仅有极少量 ICAM1 表达，但在心肌缺血再灌注时，心肌细胞膜表面的ICAM1 量成倍增加5。ICAM1 表达增高导致中性粒细胞浸润增加，心肌组织细胞损伤加剧。使用 ICAM1 单抗或 ICAM1 表达抑制剂能起到心肌保护作4用。研究表明，三七总皂苷能抑制心肌缺血再灌注时 ICAM1 表达的增高，从而起到心肌保
8、护作用9。本实验结果表明，假手术组相比，各缺血再灌注组心肌ICAM1 蛋白表达明显升高，说明心肌缺血再灌注时有大量 ICAM1 蛋白表达，与心肌损伤关系密切。三七预处理各组 ICAM1 蛋白表达均减少，而三七超细粉体较三七颗粒具有更强的降低 ICAM1 蛋白表达的效果，说明与普通三七颗粒相比三七超细粉体可以通过减少 ICAM1 蛋白表达而更有效地减轻心肌缺血再灌注损伤，起到心肌保护作用。综上所述，三七经超细粉碎处理后，对兔心肌缺血再灌注损伤较常规颗粒有更显著的保护作用，为三七超细粉体进一步开发及临床应用提供了实验依据。【参考文献】1 Staat P, Rioufol G, Piot C,et
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