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1、1连环素和 连环素在非小细胞肺 癌中的表达及其临床意义【摘要】 目的 探讨 连环素( cat)和 连环素( cat)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与 NSCLC 的发生、发展及临床预后的关系。方法 应用免疫组化法，观察 43 例 NSCLC 患者及 7 例正常肺组织中的 cat 和 cat 的表达。结果 在43 例 NSCLC 中， cat 和 cat 的异常表达率分别为 72.1%和65.1%； cat、 cat 异常表达与不同病理分级间和淋巴结有无转移均有显著性差异(P0.05)； cat 和 cat 异常表达者的生存时间明显少于正常表达者， cat异常表达具有独立的预后意义(P
2、0.05，相对危险度 RR=0.330)。结论 cat 和 cat 表达与 NSCLC 的发生、发展及预后关系密切，可作为评估 NSCLC 进展及预后的指标。 【关键词】 肺肿瘤； 连环素； 连环素；免疫组织化学ABSTRACT: Objective To investigate the expressions of catenin ( cat) and catenin ( cat) and their relation with development and prognosis of non small cell lung cancer (NSCLC). Methods Expressio
3、ns of cat and cat were immunohistochemically studied in 43 specimens of NSCLC and 7 cases of normal lung tissues. Results Of the 43 NSCLC cases, the abnormal rate of cat and cat expression was 72.1% and 65.1%, respectively. Differentiation and lymph node involvement had a significantly positive corr
4、elation with abnormal expression of cat or cat (P0.05). The survival time was significantly shorter in patients with cat or cat abnormal expression than in those with normal cat or cat expression. cat could serve as an independent prognosis factor (P0.05). Conclusion The expressions of cat and cat a
5、re closely correlated with the occurrence, development and prognosis of NSCLC. cat and cat may be used as indicators for development and prognosis of NSCLC.KEY WORDS: lung neoplasm; catenin; catenin; immunohistochemistry上皮细胞钙依赖黏附分子 E 钙黏素(E cadherin)主要介导上皮细胞之间的连2接和黏附，E cadherin 主要位于细胞膜上，与细胞膜内侧的连环素 、
6、结合成复合体，E cadherin catenin(E cad cat)复合体中任何组分结构和功能的异常均会影响细胞的黏附性1。近年来发现 E cad cat 复合体功能异常与恶性肿瘤的侵袭转移、预后密切相关2。为此，我们应用免疫组化方法观察了 cat、 cat 在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达，并探讨其表达与 NSCLC 发生、发展及预后的关系。1 资料与方法1.1 材料 选取西安交通大学医学院第一附属医院 19941999 年经根治性肺癌切除、术后病理证实的 NSCLC 石蜡包埋组织标本 43 例，其中男性 35 例，女性 8例，男女之比为 4.381；年龄 3277 岁，平均 58.
7、7 岁；生存期最长的为 72 个月，且继续存活，最短于术后 3 个月死亡，死亡原因均系肺癌及相关疾病或并发症。所有病例术前均未行放疗和化疗，无其他疾病及并发症。病理类型：腺癌 26 例，鳞癌 17 例；分化程度：、级 24 例，级 19 例。临床分期(pTNM)：期 10 例，期 17 例，期 16 例。29 例伴有区域淋巴结转移。正常对照取 7 例正常肺组织，男性 5 例，女性 2 例。1.2 试剂及方法 cat 和 cat 单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司，PV6000PicTureTM 通用型试剂盒为美国 Zymed 公司产品。本实验采用免疫组化PicTureTM 通用型二歩法，石
8、蜡标本常规切片，脱蜡至水，30mL/L 甲醇双氧水阻断内源性过氧化物酶活性，微波炉修复抗原，每张切片滴加 170 鼠抗人 cat 或 cat 第一抗体 80L，置湿盒中室温下孵育 120min，PBS 液洗涤后滴加即用型PV6000 PicTureTM 通用型试剂，室温下孵育 30min，DAB 液中显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明后封片。阳性对照采用已知的表达 cat、 cat 的正3常支气管黏膜切片，空白对照采用 PBS 代替一抗。1.3 结果判定标准 免疫组化阳性反应为棕黄色或黄色细颗粒状着色。 cat 和 cat 正常染色均定位于细胞膜，表现为细胞膜呈均匀线性棕黄色染色，无胞
9、质及胞核染色(图 1)。异常染色表现为细胞膜染色减少和(或)细胞质、胞核染色(图 1)。依阳性细胞百分比和染色分布综合判断分析。每例切片在 400 倍光镜下随机找510 个视野，数 100200 个细胞，共 1000 个癌细胞，记录阳性细胞的百分数和染色特征。如果90%的肿瘤细胞染色为正常染色时为正常表达；如果正常染色的肿瘤细胞数90%为异常表达3。1.4 统计学处理 所有统计学分析采用 SPSS 10.0 统计软件包完成。 cat 和 cat 的表达采用卡方检验和 Fisher 精确概率法；组间相关性用 Kendall s tau b秩相关检验；各因素对生存的影响采用 Log Rank 检验
10、，生存期按 Kaplan Meier方法制作累计生存曲线；影响预后的多因素分析采用 Cox 比例风险模型。结果均以 P0.05 为差异有统计学意义。2 结 果2.1 cat 和 cat 在正常肺组织及 NSCLC 中的表达 cat 及 cat 在正常肺组织中无异常表达。43 例 NSCLC 中 cat 及 cat 异常表达率分别为72.1%(31/43)和 65.1%(28/43)。两种蛋白异常表达率在正常肺组织和 NSCLC 间经统计有统计学意义(P0.05，Fisher 精确概率法)。2.2 cat 和 cat 在 NSCLC 中的表达与临床参数的关系 在病理分级、级分组中 cat 和 c
11、at 的异常表达率分别为 58.3%和 50.0%，级分组中 cat4和 cat 的异常表达率分别为 89.5%和 84.2%，不同的病理分级分组间两种蛋白的异常表达率均有显著性差异。 cat 和 cat 在伴有区域淋巴结转移组的异常表达率明显高于无淋巴结转移组(表 1)。表 1 cat 和 cat 在 NSCLC 中的表达与临床参数的关系2.3 cat 和 cat 的表达与 NSCLC 预后的关系 cat 正常表达者和异常表达者的中位生存时间分别为 35 个月和 19 个月，结合 Kaplan meier 生存曲线可以看出 cat 异常表达患者生存期明显缩短(Log Rank 检验 P=0.
12、0189，图 2)； cat正常表达者和异常表达者的中位生存时间分别为 35 个月和 16 个月， cat 异常表达患者生存期明显缩短(P=0.0265，图 3)。进一步行 Cox 比例风险模型分析，表明 cat 的表达水平具有独立的预后意义(P=0.004，相对危险度 RR=0.330)。2.4 cat 和 cat 在 NSCLC 中表达的相关性 43 例 NSCLC 中，有 11 例同时正常表达 cat 和 cat， cat 和 cat 表达具有明显的正相关性(r=0.741, P0.01)。 3 讨 论E cad cat 复合体是细胞间黏附和上皮组织整合的主要递质。 cat 一端与 ca
13、t 或 cat 结合，另一端与肌动蛋白细胞骨架结合，将由 E cad 传递进来的信号传导到细胞骨架上而发挥作用，它是 E cad cat 复合体的锚定成分，对复合体的稳定和功能是必需的，在 E cad 介导的细胞黏附中起关键作用4。因此，即使 E cad、 cat 的表达正常，如果 cat 异常表达，仍不能介导细胞间的正常连接。没有 cat 表达的肿瘤细胞不能紧密聚集5，并具侵袭表型6。国外一些学者研究发现 E cad、 cat 表达状况与恶性肿瘤分化程度、临床分期、转移发生及其预后有密切关系，表达失常或缺失的恶性肿瘤多分化差、分期高、转移及预后差57。KIMURA 等8认为 cat 表达减少
14、的 NSCLC 更容易发生淋巴结转移且预后较差。TANAKA 等9在对 159 例口腔鳞状细胞癌的研究中发现 cat 的减少同淋巴结转移关系密切。本结果表明，正常肺组织与 NSCLC 相比 cat 异常表达率有显著性差异， cat 表达与 NSCLC 病理分级和淋巴结转移关系密切，本结果与国外学者在恶性肿瘤中报道的结果一致。可以推测,在 NSCLC 早期可能已发生 cat 表达下调，并随着肿瘤的演进而加重，癌细胞可因 cat 表达缺失或下调获得一定的“自由”，为其进一步的浸润和转移提供了必要的分子基础。 cat 不但连接 E cad 形成 E cad cat 功能复合体，成为 E cad 黏附
15、系统中的重要环节，而且还通过与 APC 蛋白连接，构成第二种非 cad 依赖的独立的 cat 复合体,共同影响细胞间的黏附、运动。同时， cat 也是 Wnt 途径信号传导过程中的关键环节10。 cat 结构和功能异常一方面使肿瘤细胞间黏附作用减弱，瘤细胞迁移能力增加，另一方面刺激瘤细胞的增殖，这均有利于肿瘤浸润转移。YOSHIDA 等11进行的 171 例原发性浸润型乳腺癌的研究认为， cat 的表达减低与肿瘤的远处及淋巴结转移有关。PIRINEN 等12对 261 例手术切除的非小细胞肺癌研究，发现 cat 的表达与肿瘤的组织类型及分化程度密切相关。RODRIGUEZ SASTRE 等13在肺支气管神经内分泌癌的发展进程研究中，发现 cat 复合物会出现下调或在肿瘤细胞中的分布发生改变。Kren 等14分析了100 例 NSCLC 中 cat 的表达，结果显示 cat 的胞膜表达异常与肿瘤的大小、临床分期和患者的预后显著相关。本组结果显示正常肺组织与 NSCLC 相比 cat 异常表达率有显著性差异， cat 表达与 NSCLC 病理分级和淋巴结转移关系密切。表明 cat 功能异常与非小细胞肺癌发生、发展和转移有密切关系,是肺癌转移的重要机制。6本研究显示， cat 和 cat 的异常表达率与 TN
