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1、1PPAR 和 MMP9 在妊娠期高血压疾病 患者胎盘组织的表达及其临床意义【摘要】 目的 探讨 PPAR 和 MMP 9 在妊娠期高血压疾病(HDCP)发生发展中的表达及其临床意义。方法 利用免疫组化 SP 法检测正常妊娠者 31 例(对照组)和HDCP 患者 36 例(实验组)胎盘组织中 PPAR、MMP 9 表达,探讨其与 HDCP 的关系。结果 PPAR 在实验组胎盘组织中明显高表达, 与对照组比较有显著差异(P0.05), PPAR 阳性表达率随病情加重而显著增高。MMP 9 在实验组胎盘组织中呈低表达, 与对照组比较有显著差异(P0.05)，MMP 9 阳性表达率随病情加重而显著降
2、低。PPAR 与 MMP 9 的 Pearman 相关分析显示二者表达水平呈负相关(r=-0.529，P0.01)。结论 PPAR 在 HDCP 患者胎盘中呈高表达，MMP 9 在 HDCP 患者胎盘中呈低表达, 提示其可能通过抑制滋养细胞的浸润能力而参与 HDCP 的发病。 【关键词】 过氧化物酶体增殖物激活受体 ;基质金属蛋白酶 9;妊娠期高血压疾病;胎盘;免疫组化ABSTRACT: Objective To investigate the expressions and clinical significance of PPAR and MMP 9 in the genesis and
3、development of hypertensive disorder complicating pregnancy (HDCP). Methods The expressions of PPAR and MMP 9 in placenta of 31 normal pregnant women (control group) and 36 pregnant women with hypertensive disorder complicating pregnancy (experimental group) were detected by using SP method of immun
4、ohistochemistry, and the relationship between PPAR and MMP 9 expressions and hypertensive disorder complicating pregnancy was explored. Results PPAR expression in placental tissues was significantly higher in the experimental group than in the control group (P0.05); PPAR with positive expression rat
5、e of exacerbations was significantly increased. MMP 9 expression in placental tissues showed low expression in the experimental group, which was significantly different from that in the control group (P0.05); MMP 9 with positive expression rate of exacerbations was significantly decreased. 2 The Pea
6、rman correlation analysis of PPAR and MMP 9 showed that the expression level of the two had a negative correlation (r=-0.529, P0.01). Conclusion PPAR has a high expression in the placenta of patients with HDCP while MMP 9 has a low expression, suggesting that they may be involved in the pathogenesis
7、 of HDCP by inhibiting the infiltration capacity of nourishing cells.KEY WORDS: peroxisome proliferation activated receptor (PPAR); matrix metalloproteinase 9; (MMP 9); hypertensive disorder complicating pregnancy (HDCP); placenta; immunohistochemistry妊娠期高血压疾病(HDCP)是妊娠期特有的疾病,我国发病率为 9.4%10.4%, 严重影响母婴
8、健康, 是孕产妇和围生儿患病率及死亡率的主要原因, 发病机制不明。最近研究发现滋养细胞浸润能力下降是 HDCP 的主要原因之一1。过氧化物酶体增殖物激活受体 (peroxisome proliferation activated receptor , PPAR)是一类配体启动的核转录因子, 在转录水平上调控多种细胞的增殖、侵袭、分化和凋亡。PPAR 在胎盘形成中起重要作用, 不仅对滋养细胞浸润分化是必需的, 而且可建立成熟的母胎转运。研究发现 PPAR 的表达或活性增加可以抑制体外培养人类滋养细胞的浸润，因此其可能影响滋养细胞的正常浸润，在 HDCP 的发病过程中起一定作用。MMP 9 分解基
9、底膜的主要成分型胶原，是参与细胞滋养细胞浸润的关键酶，许多胎盘激素和细胞因子对滋养细胞浸润的调节都是通过控制MMP 9 的分泌而实现的，所以 MMP 9 在滋养细胞浸润过程中起重要作用。本研究通过免疫组化 SP 染色法，检测 HDCP 患者与正常孕妇胎盘组织中 PPAR和 MMP 9 的表达, 揭示其在 HDCP 发生发展中的表达,探讨两者的关系。1 资料与方法1.1 临床资料 选取西安交通大学医学院第一附属医院 2008 年 4 月10 月住院初产妇 HDCP 患者 36 例(妊娠期高血压 10 例,轻度子痫前期 13 例,重度子痫前3期 13 例)作为实验组,同时随机选取同期剖宫产结束妊娠
10、的正常初产妇 31 例为对照组。所有对象均无肝炎、结核等急慢性传染病史,无心脏病及肝肾疾病史,无其他妊娠合并症及并发症。诊断标准依据乐杰教授主编的第七版妇产科学。两组孕妇年龄、孕龄比较均无统计学差异(P0.05), 实验组胎盘重量和新生儿体重明显低于对照组(P0.05)。1.2 检测方法1.2.1 取材 所有标本均于胎盘娩出后 10min 内收集，迅速称量胎盘重量，于胎盘母体面近脐带处避开钙化点区取胎盘组织约 1.5cm1.0cm0.5cm 大小, 置于40g/L 中性多聚甲醛液固定，常规石蜡包埋，5m 连续切片，HE 染色后观察典型组织为入选标本。1.2.2 PPAR、MMP 9 测定 兔抗
11、人 PPAR 多克隆抗体、兔抗人 MMP 9 多克隆抗体、SP 型免疫组化试剂盒及 DAB 显色试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司，具体操作参照说明书。采用免疫组化 SP 法测定胎盘组织PPAR、MMP 9 的表达。每批染色均设阳性对照(公司提供)和阴性对照磷酸盐缓冲溶液(PBS)代替一抗。1.3 结果分析 采用德国 LEICA 公司生产的生物医学图像分析系统(Q550CW)进行灰度定量分析, 由显微摄像机将切片图像输入计算机,每张切片随机选取 5 个不重叠高倍视野, 分别计算每个视野 PPAR 及 MMP 9 的平均灰度值,求出每例胎盘标本的平均灰度值。用平均灰度值代表 PPAR 及 M
12、MP 9 在胎盘的表达水平。阳性区表达的强弱和灰度值呈负相关,灰度值越大则阳性表达越弱,灰度值越4小则阳性表达越强。1.4 统计学方法 所有数据均采用 SPSS13.0 统计软件进行处理，结果用(s)表示，临床资料和平均灰度值比较采用 t 检验，P0.05 为有显著性差异。 2 结 果2.1 PPAR 在胎盘组织的表达情况 PPAR 主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及蜕膜细胞的细胞核上, 在胎盘绒毛和蜕膜的间质中也有表达。PPAR 在对照组、实验组灰度值表达有显著性差异(P0.05)。妊娠期高血压与对照组之间比较无显著性差异(P0.05), 轻度子痫前期、重度子痫前期与对照组
13、比较存在显著性差异(P0.05)。见图 1、图 2。2.2 MMP 9 在胎盘组织的表达情况 MMP 9 主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及蜕膜细胞的细胞质中，胎盘绒毛血管内皮细胞及间质少量表达。MMP 9 在对照组、实验组灰度值比较有显著性差异(P0.05)。对照组与妊娠期高血压之间比较有显著性差异(P0.05), 轻度子痫前期、重度子痫前期与对照组比较存在显著性差异(P0.05)。见表 1、图 3、图 4。表 1 PPAR 及MMP 9 在胎盘组织的平均灰度值2.3 PPAR 和 MMP 9 的相关性分析 实验组 PPAR 和 MMP 9 在胎盘组织中的表达水平进行 Pe
14、arson 相关分析, PPAR 和 MMP 9 的表达水平呈负相关(r=-0.529，P0.01)。见图 5。3 讨 论过氧化物酶体增殖物激活受体 (peroxisome proliferation activated receptor , 5PPAR)属型核受体超家族成员, 是参与多种生物学效应的核受体, 除与脂质代谢、炎症、心血管疾病、糖尿病、肥胖等一系列生理过程密切相关外，还对细胞的生长、分化甚至凋亡有重要影响。PPAR 的配体分为天然配体和合成配体。天然配体主要来源于食物和机体的代谢产物,如亚油酸、亚麻酸、前列腺素及其代谢产物等。PPAR 合成激动配体包括：噻唑烷二酮类(TZDs);
15、羧酸类激动剂和其他类型激动剂, 如非甾体类抗炎药(NSAIDs)等2。FOURNIEDR3等发现利用 PPAR的激动剂合成配体(罗格列酮)和天然配体(15 PGJ2)可以抑制体外培养的人类滋养细胞浸润, PPAR 的激动受体可以影响滋养细胞的正常浸润，引起 HDCP 的发生。FOURNIER 等4研究发现鼠类在胚胎形成的第 8 天就可在胎盘中表达PPAR，其分布在母胎界面的滋养细胞上，而 PPAR 基因敲除的小鼠胎盘形成障碍，胚胎死亡率增加，滋养细胞浸润受阻及血管重铸障碍， 说明 PPAR 在胎盘的发育中起了至关重要的作用。研究发现 PPAR 能抑制滋养细胞的浸润性， 对滋养细胞的侵袭行为起负
16、调控作用。PPAR 受体在胎盘上有许多重要的功能，包括滋养细胞分化、入侵和摄取胎儿宫内发展重要的脂肪酸和在滋养层中作为合成类固醇激素的前体。此外，利用激动剂激活 PPAR 受体可能通过抑制胎膜炎症反应来降低的早产风险5。本实验应用免疫组化 SP 法检测 HDCP 患者和正常孕妇的胎盘组织中 PPAR 的表达，结果显示 HDCP 患者胎盘组织中 PPAR 表达水平明显高于正常孕妇，且随病情加重升高，而在二者胎盘组织中 PPAR 的分布基本一致，主要位于绒毛滋养细胞，提示 PPAR 的过度表达限制了滋养细胞的正常浸润能力，导致滋养细胞侵入过浅，使胎盘螺旋小动脉重新生成障碍，胎盘浅着床，最终引发 HDCP。基质金属蛋白酶 9(matrix metalloproteinase 9, MMP 9)是 REPONE 和6SAHLBERG1994 年在小鼠胚胎发育中的破骨细胞内发现的, 分子量为
