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1、1HPLC-ELSD 法测定轻身减肥片中黄芪甲 苷的含量作者：李战,李美容,罗国琼,阮群【摘要】 目的 建立 HPLC-ELSD 测定轻身减肥片中黄芪甲苷含量的方法。方法 选用 C18 色谱柱(4.6 mm250 mm,5 m),流动相为乙腈-水(3565)。蒸发温度 120 ,雾化温度 80 ,载气流速 1.6 mL/min,柱温 35 。结果 黄芪甲苷在 1.038.24 g 范围内呈良好的线性关系,r0.999 9,平均加样回收率为99.35%,RSD1.36%(n6)。结论 所建立的方法简便、准确,重复性好,精密度高,可用于轻身减肥片的质量控制。 【关键词】 轻身减肥片；黄芪甲苷；高效
2、液相色谱-蒸发光散射检测器；含量测定Abstract：Objective To establish a HPLC-ELSD method for determining the content of astragaloside in Qingshen Jianfei Tablets. Methods Stationary phase was C18 column (4.6 mm250 mm, 5 m), mobile phase was acetonitrice-water (3565). The evaporation temperature was 120 , the pulverizat
3、ion temperature was 80 , the flow rate was 1.6 mL/min and column temperature was 35 . Results The standard curve was linear within the range of 1.038.24 g, r0.999 9. The average recovery was 99.35% with RSD1.36% (n6). Conclusion The established method is simple and accurate, with good reproducibilit
4、y and high precision, and suitable for the determination of astragaloside in Qingshen Jianfei Tablets.Key words：Qingshen Jianfei Tablets；astragaloside ；HPLC-ELSD；content determination轻身减肥片是由大黄、山楂、泽泻、黄芪、丹参、防己等制成的中药复方制剂,具有轻身减肥、益气健脾、活血化瘀、宽胸祛积之功效,临床上主要用于单纯性肥胖。原质量标准中没有含量测定项,为了控制该制剂的质量,本试验采用 HPLC- ELSD2法测
5、定轻身减肥片中黄芪甲苷的含量。1 仪器与试药Agilent1200 系列高效液相色谱仪,PL-ELS2100 蒸发光散射检测器(Polymer Laboratories 公司生产),Agilent1200 化学工作站,GR-202 电子分析天平(精确度为十万分之一)。轻身减肥片及不含黄芪药材的阴性对照品(广西玉林制药有限责任公司技术中心提供)；黄芪甲苷对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号 110781-200512,供含量测定用)。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。2 含量测定2.1 色谱条件Agilent1 Eclipse XDB-C18 色谱柱(4.6 mm250 mm,5
6、 m)；流动相：乙腈-水(3565)；流速：1.0 mL/min；检测器：蒸发光散射检测器(氮气流速 1.6 mL/min,蒸发温度 120 ,雾化温度 80 )；柱温 35 ；对照品进样量为 5、10 L,供试品进样量为 10 L。2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每 1 mL 含黄芪甲苷 0.515 mg 的溶液,作为对照品溶液。2.2.2 供试品溶液的制备3取本品 20 片,除去包衣,精密称定,研细,取约 4 g,精密称定。置索氏提取器中,加40%甲醇 80 mL,冷浸过夜,再加适量 40%甲醇加热回流提取至无色。提取液回收溶剂并浓缩至干
7、,残渣加水 10 mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取 4 次,每次 40 mL。合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤 2 次,每次 40 mL。弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水 5 mL 使溶解,放冷,通过 D101 型大孔吸附树脂柱(内径 1.5 cm,长 12 cm),以 50 mL 水洗脱,弃去水液,再用 40%乙醇 30 mL 洗脱,弃去洗脱液,继用 70%乙醇 80 mL 洗脱。收集洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至 5 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。 2.2.3 阴性对照品溶液的制备按处方比例和工艺,制成不含黄芪的阴性对照品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
8、2.3 线性关系考察精密吸取黄芪甲苷对照品溶液 2、4、6、8、12、16 L,进样,在上述色谱条件下测定峰面积。以黄芪甲苷进样量对数值为横坐标,峰面积值对数值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：Y1.682 4X5.552 4,r0.999 9。结果表明,黄芪甲苷进样量在 1.038.24 g 范围内呈良好的线性关系。2.4 精密度试验精密吸取黄芪甲苷对照品溶液 10 L,按上述色谱条件,分别连续进样 6 次,测定峰面积。结果黄芪甲苷峰面积对数的平均值为 6.749 9,RSD0.47%,表明本法精密度良好。42.5 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液(批号为 080912)10 L,在室温
9、下,分别于0、2、4、6、8、10 h 进样 1 次,测定峰面积,求得黄芪甲苷峰面积对数的平均值为6.155 3,RSD1.21%。结果表明,供试品溶液在 10 h 内基本稳定。2.6 重复性试验取同一批号(批号为 080912)样品,按供试品溶液制备方法,平行制备 6 份,按上述色谱条件测定其含量。结果黄芪甲苷含量平均值为 0.085 5 mg/片,RSD1.48%。表明本法重复性良好。2.7 加样回收率试验取已知黄芪甲苷含量的轻身减肥片(批号 080912,含量为 0.085 6 mg/片)样品约 2 g,精密称取 6 份,分别精密加入黄芪甲苷对照品适量,按供试品溶液制备方法制成供试液,进
10、样 10 L,按上述色谱条件测定,按双点校正法计算。结果黄芪甲苷的平均回收率为 99.35%,RSD1.36%。结果见表 1。 表 1 加样回收率试验结果（略）2.8 样品测定取样品约 4 g,精密称定,照供试品溶液制备方法制成供试液,按上述色谱条件,精密吸取 10 L,注入液相色谱仪,测定,计算样品中黄芪甲苷的含量。结果见表 2。表 2 样品测定结果（略）2.9 空白试验5按上述色谱条件,吸取对照品、供试品、阴性对照品溶液各 10 L,分别注入液相色谱仪进行测定。由色谱图可见,在与对照品色谱相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰,而阴性对照在此保留时间处无干扰(见图 1)。3 讨论
11、本试验提取溶剂的选择参考文献1,考察比较了甲醇、40%甲醇、水饱和的正丁醇、40%乙醇等溶剂对本方黄芪甲苷的提取效率,结果以 40%甲醇提取黄芪甲苷提取率最高,所以选择 40%甲醇为提取溶剂。本试验以 40%甲醇为提取溶剂,分别比较了超声提取 2 h,加热回流提取 2 h 以及冷浸过夜,索氏提取至无色的方法,结果以冷浸过夜,索氏提取至无色效果更佳,故选用本提取方法。在试验过程中也曾试验过不过 D101 型大孔吸附树脂柱,直接测定的方法,但由于本方组方复杂,不过柱杂质干扰较大,所以选用过 D101 型大孔吸附树脂柱的方法。对 70%乙醇洗脱液用量进行的考察结果表明,70%乙醇洗脱液用量在 60、80、100 mL,含量测定结果基本相近,所以选用收集洗脱液为 80 mL。本试验中考察了甲醇-水和乙腈-水两种流动相,结果以乙腈-水(3565)分离效果较好。本试验采用 HPLC-ELSD 法测定轻身减肥片中黄芪甲苷的含量,结果重复性好,精密度、稳定性强,无杂质峰干扰,可作为轻身减肥片的质量控制方法。【参考文献】1 杨海燕,徐长根,张倩倩,等.HPLC-ELSD 测定痛宁片中黄芪甲苷的含量J.中6成药,2007,29(3)：467468.
