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1、1降钙素基因相关肽对油酸型急性肺损伤 家兔细胞因子的影响作者：张丙芳 林允信 戚好文 李志超 薛军 贾斌 赵淑华 【关键词】 急性肺损伤 关键词: 急性肺损伤;降钙素基因相关肽;肿瘤坏死因子;白介素-8;内皮素-1 摘 要:目的 探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对油酸型急性肺损伤（ALI）家兔血与支气管肺泡灌洗液（BALF）中 TNF-，IL-8 和 ET-1 含量的影响. 方法 观察油酸型 ALI 家兔 CGRP 治疗前、后不同时间静脉血与 BALF 中上述 3 种细胞因子的含量，并测定其肺含水量. 结果 油酸致伤后 30，60，120min 血及 BALF 中 TNF-，IL-8 和 ET
2、-1 含量均显著增高（P0.050.01），尤其以 TNF- 增幅最大.CGRP 治疗后各因子含量明显下降（P0.05），并维持在低水平，肺含水量也显著降低（P0.05）. 结论 iv CGRP 可有效降低油酸致伤后血及 BALF 中 TNF-，IL-8 和 ET-1 水平，抑制肺内炎症反应，减轻肺损伤. Keywords:acute lung injury;calcitionin gene-related pep-tide;tumour necrosis factor;interleukin-8;en-dothelin-1 Abstract:AIM To investigate the ef
3、fects of calcitionin gene-related peptide（CGRP）on the levels of TNF-，IL-8 and ET-1in blood and bronchio- alveolar lavage fluid（BALF）from rabbits with acute lung injury（ALI）induced by oleic acid.METHODS The concentrations of the three cytokines in venous blood and BALF were continuously analysed at d
4、if-ferent time points before and after treated with CGRP（0，30，60，120min）.Additionally，extravascular lung water was observed at the end of the study.RESULTS The concentra-tions of the three cytokines in blood and BALF were marked-ly increasd at30，60and120min after the intravenous infu-sion of oleic a
5、cid（P0.050.01）.In contrast the levels of the three cytokines remarkably decreased and were kept at a lower state after the intravenous infusion of 2CGRP（P0.05）.So did the extravascular lung water（P0.05）.CONCLUSION CGRP may effectively decrease the levels of TNF-，IL-8and ET-1in blood and BALF after i
6、nfusion of oleic acid，inhibit intrapulmonary inflammation and reduce the lung injury. 0 引言 急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的发病机制极为复杂，涉及到细胞因子网络，而肿瘤坏死因子（TNF），白细胞介素（IL）-8，内皮素（ET）-1 是肺内炎症的启动和放大因子1 .它们可通过多种途径直接或间接损伤细胞-毛细血管膜，使其通透性增高，产生渗透性肺水肿2，3 .抑制这些因子成为防治 ALI和/或 ARDS 的主要方向之一.降钙素基因相关肽（CGRP）具有保护血管内皮细胞、抑制 ET-1 产生
7、、促进心钠素（ANP）释放等多种作用，可降低实验性 ALI 动物的平均肺动脉压并减轻其肺水肿4 ，但 CGRP 对 ALI 时体内炎性因子水平的影响文献报道较少.我们通过观察 CGRP 治疗前后油酸型 ALI 家兔血与 BALF 中TNF-，IL-8 和 ET-1 含量的变化，探讨其减轻肺损伤的机制. 1 材料和方法 1.1 材料 健康家兔 18 只，雌雄不拘，体质量 2.53.0kg，由第四军医大学实验动物中心提供，随机分为 3 组，每组 6 只.油酸模型（OA）组;CGRP 组;健康对照（C）组.OA 组和 CGRP 组均经耳缘静脉注射油酸 60L kg-1 建立 ALI 模型.C 组以等
8、量生理盐水代替油酸静注. 1.2 方法 实验前禁食 12h，用 30g L-1 戊巴比妥钠（1mL kg-1 ）经耳缘静脉麻醉后，将家兔仰卧固定于实验台上，沿颈部正中切开皮肤，钝性分离各层组织，置入右颈外静脉导管至上腔静脉供采血及给药.然后按前述方法建立油酸型 ALI 模型.CGRP 组于注射油酸 30min 时给予 CGRP1.5g kg-1 .各组均于试验前（0min）、3实验后 30，60，120min 由右颈外静脉导管采集静脉血各 3mL，分置于含有 100g L-1 EDTA-Na2 30L 和抑制肽酶 40L 的试管或非抗凝试管中混匀，43000r min-1 离心 15min，分
9、离血浆或血清，-20保存待测血浆 ET-1 和血清 TNF-，IL-8 含量.兔 ET 放免检测盒由解放军总医院放免所提供，TNF- 和 IL-8 酶联免疫检测盒购自第四军医大学免疫学教研室，均按说明书统一测定.各组于实验后120min 放血处死动物，立即开胸取肺，将右肺称湿质量后置于 75烤箱 72h 取出称干质量.计算肺水质量分数=（肺湿质量-肺质量）/肺湿质量100%. 统计学处理:各组数据以 x s 表示，用 SPSS 统计软件进行数据分析，组内各时间点数据比较用方差分析，并行均数间两两比较，各组间比较用团体 t 检验及直线相关分析. 2 结果 OA 组、CGRP 组家兔于注射油酸后很
10、快出现呼吸急促、紫绀，呼吸频率由实验前 3856 次 min-1 ，增至 100132 次 min-1 .但 iv CGRP 后，上述症状逐渐减轻，至实验结束时呼吸恢复至 4580 次 min-1 ，C 组实验前后呼吸无异常变化. 2.1 血中 TNF，IL8 和 ET1 的含量 OA 组、CGRP 组血中 TNF-，ET-1含量在油酸致伤后 30min 均显著升高（P0.01），约为致伤前的 25 倍，也明显高于 C 组（P0.01）.OA 组 120min 时仍维持高水平，而 CGRP 组 60min 时即明显下降（P0.050.01），120min 时仍呈下降趋势，与 OA 组比较显著降
11、低（P0.05，Tab1）.IL-8 含量也于致伤后显著升高（P0.05），但其较 TNF- 和ET-1 滞后 30min，CGRP 治疗 60min 时明显降低（P0.05）. 42.2 BALF 中 TNF，IL8 和 ET1 的含量 油酸致伤后 120min 时，OA 组和CGRP 组 TNF-，IL-8 和 ET-1 含量均显著高于 C 组（P0.050.01），但 CGRP组各细胞因子水平均明显低于 OA 组（P0.050.01，Tab2）. 表 1 急性肺损伤家兔各组血 TNF- 及 ET-1 含量变化 略 表 2 急性肺损伤家兔 120min 时 BALF 中细胞因子含量 略 2
12、.3 肺水质量分数与细胞因子的关系 油酸致伤后 120min OA 组肺水质量分数（84.30.8）%明显高于 C 组（78.50.9）%，P0.01;CGRP 组（82.60.9）%明显低于 OA 组（P0.05）.肺水质量分数与 120min 时血中 TNF-，IL-8，ET-1 的相关系数分别为 0.9235，0.8417 和 0.9350（P0.01），也与 BALF 中 3 种细胞因子的含量呈显著正相关. 3 讨论 细胞因子在肺损伤炎症反应的发生和发展中起重要作用，特别是 TNF 被称为ALI 的启动因子，在 ARDS 炎症反应早期起关键作用.我们的结果显示油酸致伤早期（30min）
13、血中 TNF- 和 ET-1 即显著升高，TNF- 更是高达致伤前的 5 倍，至120min 时仍维持在高水平，并呈上升趋势;而 IL-8 升高则较 TNF- 可滞后 30min.这种滞后的意义在于 IL-8 接受 TNF- 的刺激后合成释放增多，并放大其炎症信号，使肺内炎症反应加强3 .BALF 中这 3 种细胞因子含量在油酸致伤后也显著升高，并与肺水含量呈显著正相关（P0.01），提示油酸致伤后肺内 TNF-，IL-8，ET-1 产生持续增多，直接参于了肺损伤的过程.用免疫吸附法清除循环中 TNF- 后，ALI 肺充血及中性粒细胞浸润明显减轻5 .结果提示，若降低肺内及血中TNF-，IL-
14、8，ET-1 含量，有可能减轻油酸所致的急性肺损伤. 5最近发现 CGRP 可减轻 ARDS 动物的肺水肿4 .本结果表明，静注 CGRP 除可减少油酸致伤后家兔的肺水含量外，还能快速有效地降低血及 BALF 中 TNF-，IL-8，ET-1 含量.提示 CGRP 不仅可有效抑制 ALI 时肺内炎性因子的合成及释放，而且还能加强 ALI 时肺对炎性因子的灭活和清除而减轻肺内炎症反应. 综上所述，CGRP 能够明显减轻油酸型 ALI，其主要作用机制可能是:降低血及 BALF 中炎性细胞因子含量，并抑制其损伤效应，减轻肺内炎症反应;保护血管内皮细胞，从而减轻炎症损伤;促进心钠素释放，发挥抗炎作用6
15、 ;扩张肺血管，改善肺循环，减轻肺水肿.此外，CGRP 作用发挥快，持续时间较长，这对拮抗油酸致伤早期炎症因子的表达及其肺损伤作用有实际意义. 参考文献: 1Vergbese GM，Shanon K，Mason RJ.Hepatocyte growth factor and keratinocyte growth factor in the pulmonary disase fluid for patients with acute lung injury:Biological and clinical signifi-cance J.Am J Respir Crit Care Med，199
16、8;158（1）:386-394. 2Liu YG，Li HZ，Qi HW.Mice lung injury induced by toluene di-isocyanate in halation J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1998;19（3）:332- 335. 3Zhang HW，Jia B，Zeng ZR，Wen GN.Palmonary edema and thd increased concentrations of histamine in the perfusate of iso-lated perfused rabbit lungs induced by chloring gas exposure J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Me
