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1、1破壁灵芝孢子粉的研究进展 【摘要】 灵芝是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称，具有扶正固本等功效，被本经列为上品。近年来，对灵芝属真菌的化学成分及临床作用的研究颇多，对灵芝的生殖细胞孢子药用价值的研究也逐渐增加，随着研究的不断深入，研究工作者采用多种有效的方法对灵芝孢子进行破壁研究，笔者综述破壁灵芝孢子粉的研究近况。【关键词】 破壁；灵芝孢子粉；研究进展【Abstract】 The ganoderma lucidum divides into the fungus red iris and the ganoderma lucidum, has straightens up the s
2、olid this effect and so on, “This after“ is called the high-grade goods. In recent years, were very many to ganoderma lucidums chemical composition and the clinical function research, also gradually increased to ganoderma lucidums germ cell spore for medicinal purposes value research. Along with res
3、earch unceasingly thorough, the research worker used many kinds of effective methods to carry on the broken-down wall to the ganoderma lucidum spore, the authors summarizes the broken-down wall ganoderma lucidum the research recent situation.【Key words】 broken-down wall；ganoderma lucidum spore powde
4、r；research progress灵芝是担子菌纲多孔菌科(Polyproraceae)灵芝属(Ganoderma)真菌赤芝Ganoderma lucidium (LeyssexFr)Karst 和紫芝Ganoderma japonicum(Fr)Lloyd 的总称，由菌丝体和子实体组成，其菌丝无色透明，具分隔及分枝，表面常2分泌白色草酸钙结晶。子实体由菌丝形成，分菌柄、菌盖和菌伞下边的子实体三部分，成熟后的子实体木质化，其皮壳组织革质化，有赤褐色光泽；内壁为子实层，孢子从子实层内产生，孢子褐色，卵形，811m57m，中央含一个大油滴。灵芝具有扶正固本等功效。目前，对灵芝的化学成分及其药理作
5、用等方面都进行了比较深入的研究，但是灵芝孢子具双层壁1，褐色内层有许多针状小突起伸入透明光滑的孢子壁外层，一般的化学和物理方法很难打破灵芝孢子的双层壁，因此限制了对其化学成分、生物活性成分的深入研究。随着技术的进一步发展，人们采用多种有效的方法对灵芝进行破壁研究，本文就对目前该方面的研究近况作一综述。1 灵芝孢子的破壁有效的灵芝孢子破壁方法可以促进对其生物活性成分的提取及药用价值的研究。灵芝孢子破壁方法包括机械法、酶法、过冷液氮淬冷法和低温玻璃化破碎法等。蒋家新等2采用酶法破壁，破壁率达 42%，但用此法想要进一步提高破壁率就会造成灵芝营养物质损害的增加和新的蛋白杂质。吴华等3利用超声波细胞粉
6、碎机，并在高压的条件下将灵芝孢子粉破壁，并就此方法建立了比较好的破壁工艺。周顺华等4采用一种新型的低温玻璃化破碎技术进行了灵芝孢子破壁实验，取得了较好的效果。不久后笔者又利用过冷液氮淬冷破壁法进行了灵芝孢子破壁实验；证明了该方法具有效果较好、破壁率较高，设备、操作简便及效率高等优点；增加冻结、解冻循环次数能在一定程度上提高灵芝孢子破壁率。最近，杨晓强等5利3用最新的超微粉碎技术将灵芝子实体的细胞壁打破，并在国内、外率先采用微粉动态提取技术提取灵芝多糖，取得了较好的结果。但以上方法普遍存在成本高、效率低、破壁率相对较低等缺点。目前王春涛、崔宁等6,7根据撞击流技术的原理，用超临界 CO2 作为超
7、高压工作介质和加速、撞击的载体，研制开发了超高压超临界撞击流粉碎试验系统，并将其用于制备破壁灵芝孢子粉，明显提高了破壁率，并对其制备工艺进行了研究，取得了较为满意的效果。可用光学显微镜观察灵芝孢子的破壁与否，未破壁的孢子壁光滑完整，破壁处理后的孢子壁则残缺不全，内容物呈不规则团块状8。2 破壁灵芝孢子粉化学成分的研究灵芝不管是孢子还是子实体的化学成分都很复杂，特别是灵芝孢子具有双层壁较难打破，对其化学成分还需要进一步的深入研究。目前认为，灵芝化学成分组成大概可分为几类：蛋白质和氨基酸类、糖肽类、维生素类、胡萝卜素、甾醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类、内酯和无机离子类等，其中多糖、三萜类化合物、
8、核苷、生物碱等是灵芝的主要有效成分，对这几类主要有效成分，特别是多糖的分离提取、药理作用以及临床作用的研究已成为了热点。21 破壁灵芝孢子粉多糖的研究 随着灵芝孢子壁被人们用有效的方法打破，对4灵芝孢子粉的化学成分研究也不断展开。2006 年黄晓兰等9，研究了灵芝孢子粉多糖的组成、相对分子质量及相对分子质量分布，比较破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的异同，结果表明，不同提取方法所得灵芝孢子粉多糖的得率不同，破壁后灵芝孢子粉含的多糖是不破壁的 1.7 倍；灵芝孢子粉多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖，破壁与不破壁的多糖组成完全相同，其相对质量分数略有区别；朱俊洁等10采用破壁
9、提取综合法将灵芝孢子破壁和有效成分提取结合起来, 经过一次加工处理在降低提取费用的同时提高了灵芝孢子多糖提取得率；刘英梅等112006 年，通过正交试验法，优化了灵芝孢子粉中多糖提取的工艺过程，得出较为可行的孢子粉多糖提取最佳工艺。目前，用苯酚-硫酸法测定灵芝多糖是比较常用的方法，2005 年朱建国等12，用苯酚-硫酸法初步建立了灵芝孢子粉多糖含量测定的方法，得到测定中显色的最佳条件为：5%的苯酚1.6ml，浓硫酸 8ml，温度为 20，反应时间为 24min。2006 年白在贤等13采用硫酸葸酮比色法测定破壁灵芝孢子粉中多糖类含量，同时考察了该方法的专属性、准确性、精密性及线性关系。结果表明
10、此法准确、可靠、重现性较好，可用于破壁灵芝孢子粉中多糖的含量测定。22 破壁灵芝孢子粉其他化学成分的研究 除此之外，人们还发现灵芝孢子粉蛋白质含量高达 18%，富含多种必需氨基酸和脂肪酸，维生素类主要是维生素 E，含量超过 600mgkg，另外也含有少量的维生素 C14；并且不断在灵芝孢子粉中发现新的三萜类物质15，2003 年马林等16还发现三萜类物质在灵芝子实体和孢子粉中的含量不同；灵芝孢子粉中的脂肪酸以不饱和脂肪酸油酸和亚油酸为主，也包含长链烯酸14。其内酯类属五环三萜内酯，有灵芝孢子内酯 A 和 B17。5生物碱类有胆碱、甜菜碱和硫组氨酸甲基内胺盐18。灵芝孢子粉中微量元素钴(Co)、
11、硒(Se)和铬(Cr)与人类的健康和疾病的防治有密切关系19。3 破壁灵芝孢子粉药理作用的研究破壁灵芝孢子粉的药理主要作用有抗肿瘤、免疫调节、调节血脂以及对神经、心血管和呼吸系统有调节改善作用。有研究认为，灵芝可能是从两个方面发挥其作用的，一是增强重要器官系统的功能，如强心、保肝、促进造血、增强免疫功能等；其二是通过神经系统、内分泌系统和免疫系统的调节作用以及它们之间的相互调节来协调机体的功能活动，使之能适应内外环境的改变，减轻各种致病因素对机体的损害，提高机体的抗病能力20。31 抗癌作用 癌细胞是一种变异细胞,生命力强,不断繁殖而不衰亡,是因为癌细胞含有一种“永生不死”的端粒酶具有无穷的分
12、裂能力。灵芝及其孢子粉提取液能破坏癌细胞端粒酶几乎达 100%效果，这是因为该提取物的多糖、肽类、酶类、有机锗等多种成分渗透到癌细胞中，与端粒共价结合，使酶分子拉长，改变、破坏端粒酶活性，于是癌细胞中的 DNA 失去端粒酶的保护，每分裂一次也就缩短一次，随着 DNA 消耗殆尽，癌细胞停止分裂而衰亡。灵芝及其孢子粉还可通过直接刺激淋巴细胞增殖，促进巨噬细胞吞噬能力，增强免疫功能等作用，拮抗和抑制癌细胞的生长和蔓延，从而达到了抗癌效果20。同时，灵芝孢子粉还可以抑制细胞染色体畸变，保护 DNA21；抑制肿瘤细胞自由基的产生，从而抑制自由基引起的脂6质过氧化反应导致 DNA 损伤，同时抑制肿瘤细胞对
13、周围组织的破坏作用和肿瘤细胞的生长22；提高肿瘤患者对放疗、化疗和手术的耐受性。3.2 免疫作用 灵芝孢子粉能激活巨噬细胞的吞噬功能，对糖皮质激素有拮抗作用。灵芝孢子粉水提取物能提高小鼠腹腔巨噬细胞酸性磷酸酶、B-葡萄糖醛酸酶活性及过氧化氢含量，并能对抗糖皮质激素对小鼠脾脏 DNA 合成的抑制作用及促进肝脏脂肪堆积的作用23。给小鼠服食灵芝孢子粉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬和血清凝集功能有增强作用。小鼠脾指数和酸性非特异性酯酶染色也相应增加。说明灵芝孢子粉能增强非特异性免疫功能，提高体液免疫水平和细胞免疫水平24。2005 年徐彩菊等25还研究了纳米级灵芝破壁孢子粉对小鼠免疫功能的影响，通过给雌性小
14、鼠连续灌胃 30 天后检测免疫学指标。结果表明纳米级灵芝破壁孢子粉 167、250、333、500 和 1500mg/kg 剂量均能提高 ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力、小鼠左后足跖部厚度差 24h 测量值和小鼠溶血空斑数；250、333、500 和 1500mg/kg 剂量组均能提高小鼠 NK 细胞活性；250mg/kg 剂量能提高小鼠血清溶血素抗体积数值；500mg/kg 剂量能提高小鼠脾脏/体重比值和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率。说明纳米级灵芝破壁孢子粉具有提高小鼠免疫力作用。3.3 降血糖作用 四氧嘧啶能选择性地破坏胰岛 B 细胞。灵芝孢子粉醇提取物的水溶成分(Gan
15、oderma lucidum spore extract，Glse)能减弱四氧嘧啶对胰岛 B 细胞的损伤或改善受损伤的 B 细胞的功能26。肾上腺素能促进肝脏和肌糖原的分解而引起血糖升高，Glse 亦能拮抗正常小鼠因 ip 葡萄糖或肾上腺素引起的升血糖作7用，改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐量。表明 Glse 可能抑制了糖原的分解27。同时，由于糖尿病的高血糖及线粒体钙超载、细胞色素 C 释放，可通过各种机制造成脑细胞损伤。灵芝孢子粉可能通过减轻线粒体钙超载，线粒体 Cyt-C 的释放从而减轻脑细胞的损伤，改善脑细胞的代偿功能，降低血糖，从而对糖尿病脑组织起保护作用28。3.4 对神经系统的作用 破壁
16、灵芝孢子粉在神经系统中的作用主要是镇静催眠，而且不会产生依赖性29。近年来的研究发现，灵芝孢子粉可以促进受损伤的脊髓运动神经元存活及其轴突再生，其作用机制很可能是通过促进受损伤脊髓神经元和神经胶质细胞分泌的神经营养素-3(neurotrophin-3，NT-3)实现的30。许多研究已经证实，NT-3 可以促进受损伤的中枢神经元存活及其轴突再生。破壁灵芝孢子粉还在中枢神经损伤修复中有一定的作用，2005 年张伟等31通过大鼠脊神经腹根切断动物模型，发现灵芝孢子粉有保护脊髓受损伤运动神经元的作用，即降低受损伤运动神经元的死亡率。2006 年马钦桃等32探讨了灵芝孢子和一氧化氮合酶(NOS) 抑制剂(L-NNA) 联合应用能否促进脊髓半横断后受损伤的背核和红核神经元存活及其轴突再生，结果表明，两者联合应用能更好地促进受损伤的背核神经元存活及其轴突再生，灵芝孢子粉也能促进受损伤的红核神经元存活；从而进一步
